Оптимизация синтеза 6-(18F)фтор-L-ДОФА, важнейшего ПЭТ радиотрейсера класса аминокислот

Ляш Екатерина Владимировна

Оптимизация синтеза 6-(18F)фтор-L-ДОФА, важнейшего ПЭТ радиотрейсера класса аминокислот

Изучена эффективность реакции нуклеофильного радиофторирования серии новых 4,5-замещённых нитробензальдегидов с эфирными защитными группами, обладающими длинной углеродной цепью и разветвлённой структурой, для оценки возможности их использования в качестве предшественников в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА, важнейшего радиотрейсера для исследований мозга методом позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ). Из них 4,5-диэтоксиметокси-2-нитробензальдегид обладает оптимальными характеристиками ввиду высокого и стабильного выхода в реакции радиофторирования (79±11%, n=10, [К/2.2.2.]+18F-, ДМФА, 155оС, 10 мин) и возможности удаления защитных групп в мягких условиях, (6N HCl, 120оС, 10 мин), пригодных для использования в автоматизированных модулях синтеза 6-[18F]фтор-L-ДОФА.

Химия

Дипломы

Вуз: Санкт-Петербургский государственный университет (СПбГУ)

ID: 587d364d5f1be77c40d58c06

UUID: 491b5779-8ee1-42c5-b2df-13cae11ee202

Язык: Русский

Опубликовано: больше 7 лет назад

Просмотры: 254

Ляш Екатерина Владимировна

Источник: Санкт-Петербургский государственный университет

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 433156 bytes

Поделиться работой

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Направление подготовки Химия ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА «Оптимизация синтеза 6-[18F]-L-3,4-дигидроксифенилаланина (6-[18F]- L-ФДОФА), важнейшего ПЭТ радиотрейсера класса аминокислот» Студент 6 курса Ляш Е.В. Уровень образования: Специалист Заведующий кафедрой: д.х.н. Смирнов И.В. Научный руководитель: к.х.н., доцент Красикова Р.Н. Санкт-Петербург 2016 год

Содержание Введение ............................................................................................................................ 4 1 Литературный обзор .................................................................................................... 6 1.1 Метод позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ)......................................... 6 1.2 Преимущества фтора-18 при использовании в методе ПЭТ ............................... 8 1.3 Метод нуклеофильного радиофторирования как основной метод получения РФП для ПЭТ.................................................................................................................. 9 1.3.1 Выделение фтора-18 из водной мишени циклотрона.................................. 10 1.3.2 Ароматическое нуклеофильное фторирование............................................ 11 1.3.3 Роль защитных и уходящих групп при введении метки фтор-18 в ароматические субстраты ..................................................................................... 12 1.4 Особенности синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА методом нуклеофильного радиофторирования...................................................................................................... 13 2 Экспериментальная часть ........................................................................................ 16 2.1 Синтез 4,5 замещенных нитробензальдегидов ................................................... 16 2.2 Радиохимический синтез....................................................................................... 16 2.2.1 Оборудование ................................................................................................... 16 2.2.2 Реактивы и материалы .................................................................................. 17 2.2.3 Подготовка модуля для нуклеофильного фторирования ........................... 17 2.2.4 Подготовка реагентов и материалов .......................................................... 19 2.3 Анализ реакционной смеси методом тонкослойной радиохроматографии (радиоТСХ) ................................................................................................................... 20 2.4 Получение фтора-18 и его комплекса с МФК..................................................... 20 2.5 Проведение реакции нуклеофильного радиофторирования.............................. 21 2.6 Оценка эффективности снятия защиты с гидрокси групп при использовании IVА-VIIIА в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА..................................................................... 21 3 Результаты и обсуждение.......................................................................................... 23 2

3.1 Выбор защитных групп ......................................................................................... 23 3.2 Синтез 18F-фторированных замещённых нитробензальдегидов IVА-VIIIА.... 24 3.3 Сравнение результатов радиофторирования соединений IV-VIII и значений химических сдвигов некоторых атомов углерода .................................................... 26 3.4 Кислотный гидролиз.............................................................................................. 27 Выводы ............................................................................................................................ 29 Благодарности................................................................................................................ 30 Список цитируемой литературы................................................................................ 31 3

Введение Позитронная эмиссионная томография (ПЭТ) - современный метод медицинской визуализации, позволяющий получать in vivo информацию о нарушениях физиологических и биохимических процессов на молекулярном уровне. Исключительные возможности метода обусловлены использованием радиофармпрепаратов (РФП), меченных короткоживущими изотопами элементоворганогенов с позитронным типом распада (11С - T1/2 20.4 мин; 13N - Т1/2 9,98 мин; 15 O - Т1/2 2,04 мин), а также 18F - Т1/2 109.8 мин. Современной тенденцией развития ПЭТ является разработка новых РФП на основе все более сложных биомолекул. Прямое введение метки в такие молекулы зачастую требует сложного многостадийного процесса. Изотоп вводят в относительно простую реакционноспособную молекулу, и далее полученный радиоактивный синтон участвует в реакции или последовательности реакций, приводящих к образованию более сложных молекул. В настоящее время 2-[18F]-фтор-2-дезокси-D-глюкоза ([18F]ФДГ) является основным РФП для ПЭТ (более 80% исследований). ПЭТ с [18F]ФДГ позволяет количественно определить скорость регионального потребления глюкозы уникальную характеристику, непосредственно связанную с метаболической активностью опухоли, скоростью ее роста, степенью злокачественности и др. Это исследование играет огромную роль в современной онкодиагностике, однако, имеет ряд ограничений в случае опухолей с низкой скоростью гликолиза. Что касается опухолей мозга, их визуализация с [18F]ФДГ осложняется высоким уровнем физиологического накопления глюкозы (основного энергетического субстрата мозга) серым веществом. Кроме того, [18F]ФДГ утилизируется в макрофагах, продуцируемых в абсцессах или очагах воспаления в послеоперационный период или при инфильтрирующем росте, что является основной причиной ложно-положительных заключений [1]. Для диагностики опухолей мозга предложено использовать РФП класса аминокислот, например, L-[метил-11C]метионин. Однако, малый период полураспада углерода-11 (20,4 мин) приводит к сложностям в использовании данного радиотрейсера: невозможности проводить длительные исследования, необходимости начинать синтез с большой активности. Кроме того, применение 4

радиотрейсеров на основе углерода-11 возможно лишь в центрах, оборудованных собственным циклотроном. В последние годы отмечается все больший интерес к фторированным аналогам аминокислот ([18F]ФАА), меченных более долгоживущим фтором-18, характеристики которых подробно рассмотрены в обзоре [2]. Предполагается, что [18F]ФАА являются перспективными агентами для дифференциации опухолевого и воспалительного процессов. В настоящее время наибольшее применение в диагностике опухолей находит меченный фтором-18 аналог тирозина, О-(2’-[18F]фторэтил)-L-тирозин ([18F]ФЭТ) [2]. Введение метки фтор-18 в алкильную цепочку молекулы [18F]ФЭТ возможно простым и удобным методом прямого нуклеофильного радиофторирования (как и в случае [18F]ФДГ), что во многом способствовало внедрению данного РФП в практику ПЭТ. Другим важнейшим РФП класса аминокислот является 6-[18F]-L-3,4дигидроксифенилаланин (6-[18F]-L-ФДОФА), радиотрейсер с широким спектром применения болезни (диагностика Паркинсона, глиом, нейроэндокринных опухолей и др.). Однако, его внедрение в практику тормозится отсутствием эффективных методов синтеза. В отличие от [18F]ФЭТ, получение 6-[18F]-LФДОФА методом нуклеофильного радиофторирования является сложной задачей и осуществляется в несколько стадий. Первой из них является введение метки в ароматическое кольцо реакцией нуклеофильного замещения уходящей группы в молекуле бензальдегида (БА) на [18F]фторид в присутствии межфазных катализаторов. Гидроксильные группы в молекуле БА на этой стадии должны быть защищены и удаляются на последней стадии. Именно она представляется сложной для автоматизации в модулях синтеза: удаление традиционно используемых защитных метилендиокси- или 4,5-диметокси групп требует применения агрессивных реагентов и жестких условий (57% HI, 180-200°С, 20 мин). Целью данной работы является поиск и экспериментальное исследование 4,5-замещённых нитробензальдегидов с лабильными защитными группами для использования в качестве предшественников в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА. Необходимым требованием к этим соединениям являются высокая эффективность реакции нуклеофильного радиофторирования, а также возможность удаления защитных групп с использованием водных растворов HCl. 5

1 Литературный обзор 1.1 Метод позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ) Основы метода ПЭТ были заложены американским ученым М. ТерПогоссяном. В 1951 году он, сотрудничая с В.Б. Иттнером, предложил один из первых сканнеров с фокусным коллиматором для определения концентраций радиоактивного соединения in vivo [3]. В середине 70-х годов М. Тер-Погоссян и М. Фелпс заявили о возможности использования позитронных эмиттеров для получения томографических изображений [4] и разработали первый ПЭТ-сканнер [5]. В последующие годы развитие ПЭТ как одного из методов ядерной медицины было необычайно быстрым и эффективным. Основы методологии ПЭТ были разработаны в 80-е годы прошлого века [67]. Этот наиболее информативный метод радионуклидной диагностики даёт возможность количественно оценить физиологические и биохимические процессы (метаболизм, перфузию, рецепторные и нейротрансмиттерные взаимодействия), позволяя выявлять различные заболевания на ранних стадиях развития [8]. Уникальные возможности ПЭТ основаны на использовании радиодиагностических агентов (радиотрейсеров биологически активных или радиофармпрепаратов, соединений, которые РФП) - меченных включаются в различные биохимические процессы или связываются с определёнными мишенями, для производства которых требуется специализированный циклотрон, находящийся в непосредственной близости от ПЭТ-центра. Огромное значение имеет то, что радиоактивной меткой в ПЭТ служат короткоживущие радионуклиды (РН) с позитронным типом распада (табл. 1), в ядрах которых число протонов превышает число нейтронов. Таблица 1. Ядерно-физические характеристики основных радионуклидов, используемых в ПЭТ [9] Радионуклид Т1/2, мин Тип распада 11 13 С N 15 О 18 F 20,4 9,96 2,04 109,8 β+(99,8%), β+(99,8%), β+(99,9%), β+(96,9%), ЭЗ- ЭЗ- ЭЗ- ЭЗ- 6

захват(0,2%) захват(0,2%) захват(0,1%) захват(3,1%) 0,96 1,19 1,72 0,63 4,1 5,4 8,2 2,4 9,22*109 1,89*1010 9,0*1010 1,71*109 Макс. энергия частиц, МэВ Макс. пробег в ткани, мм Макс. мольная активность, Ки/моль Ядерная реакция 14 N(p,α)11C 16 O(p,α)13N 14 N(d,n)15O 18 O(p,n)18F получения При переходе ядра в устойчивое состояние в результате β+-превращения испускаются позитрон и нейтрино (рис.1.) При этом продуктами распада являются стабильные изотопы: 15N, 13C, 11B, и 18O соответственно. 11 С→ 11 В + β+ + ν Рис. 1. Распад 11С с образованием стабильного 11В, позитрона и нейтрино После свободного пробега, который составляет в ткани человека или животных несколько миллиметров и зависит от энергии позитронов, позитрон сталкивается с электроном среды. Это столкновение завершается процессом аннигиляции, при этом испускаются в противоположных направлениях два высокоэнергетических γ-кванта с энергией 0,511 МэВ. Если два детектора, объединённых в схему совпадений, одновременно зарегистрируют сигнал, можно утверждать, что точка аннигиляции находится на линии, соединяющие эти детекторы (рис. 2). 7

Рис. 2. Физический принцип работы ПЭТ камеры После математической реконструкции накопленных данных (которые получают на основании зарегистрировавших показаний разлетающиеся пары γ-кванты) детекторов, получают одновременно псевдотрёхмерное изображение процесса накопления радиоактивности в исследуемом органе. Толщина среза и минимальный размер элементарной точки изображения (пиксела) зависят от геометрических размеров и плотности упаковки датчиков ПЭТ-камеры, число которых в современных моделях томографов насчитывает десятки тысяч. В аппаратурном отношении такой способ детектирования, называемый электронной коллимацией, уникален [8]. 1.2 Преимущества фтора-18 при использовании в методе ПЭТ Очень важным является тот факт, что три из представленных в табл.1 радионуклида - углерод-11, кислород-15, азот-13 - являются изотопами жизненно важных биологических элементов. С их помощью можно «пометить» практически любое соединение, тем самым обеспечив доступ к десяткам тысяч радиотрейсеров, биохимическое поведение и метаболизм которых не будут отличаться от немеченых аналогов [10,11]. Радионуклид фтор-18 не входит в число элементоворганогенов, однако именно он часто считается «идеальным» радионуклидом. Высокий период полураспада (110 мин) подходит для проведения ПЭТисследования, а поскольку пробег позитронов в ткани в случае фтора-18 составляет всего 2.4 мм, это позволяет получать изображение высокого разрешения. Кроме того, полученные РФП можно транспортировать на большие расстояния в другие 8

клиники, не имеющие собственного медицинского циклотрона, а также проводить сложные, многостадийные синтезы. При производстве фтора-18 по ядерной реакции 18 O(p,n)18F в водной мишени циклотрона можно получать радиотрейсеры высокой удельной активности. 1.3 Метод нуклеофильного радиофторирования как основной метод получения РФП для ПЭТ Исторически первым методом синтеза РФП для ПЭТ на основе фтора-18 было электрофильное радиофторирование. В качестве фторирующего агента использовался газообразный [18F]F2, получаемый в результате ядерной реакции 20 Ne(d,α)18F при облучении смеси неона и 0.5-2% F2 дейтонами в газовой мишени циклотрона [12,13]. Позднее было предложено использовать ядерную реакцию 18 O(p,n)18F с большим сечением (700 мбарн против 140 мбарн), которая протекает при облучении протонами молекулярного кислорода-16, обогащенного кислородом-18 [14]. В обоих случаях для эффективного извлечения [18F]F2 из газовой мишени было необходимо добавление носителя [19F]F2, приводящее к снижению удельной мольной активности радиотрейсеров. Подробное описание методов получения [18F]F2 можно найти в обзоре [15]. Метод электрофильного радиофторирования практически не используется на практике ввиду технических сложностей работы с радиоактивным агрессивным газом. Предпочтение отдается нуклеофильным методам, где активность радионуклида на выходе из мишени существенно выше, а работа с водной мишенью для производства изотопа в виде [18F]фторида - намного проще и удобнее [15]. Реакции производства прямого нуклеофильного большинства важнейших фторирования используются ПЭТ-радиотрейсеров, прежде для всего [18F]ФДГ, а также [18F]ФЭТ, 3’-диокси-3’-[18F]фтортимидина и других агентов для онкодиагностики, [18F]галоперидола - для изучения D2-рецепторов дофамина; 1-(5[18F]фтор-5-дезокси-α-D-арабинофуранозил)-2-нитроимидазола и 18 F- фторомизонидазола - радиотрейсеров для визуализации тканевой гипоксии [16]. Сложные многостадийные методы, основанные на нуклеофильном фторировании, применяют в случае [18F]ФАА с меткой фтор-18 в ароматическом кольце. Важнейшим является РФП этого класса производное L-3,4- дигдроксифенилаланина, меченное фтором-18 в 6-ом положении бензольного 9

кольца - 6-[18F]-L-ФДОФА. Радиотрейсер впервые был предложен в 1984 г. и оказался крайне эффективным при оценке плотности дофаминергических нейронов, которая уменьшается при болезни Паркинсона [17]. Болезнь Паркинсона - хроническое заболевание, характерное для лиц старшей возрастной группы, вызванное прогрессирующим разрушением и гибелью нейронов чёрной субстанции среднего мозга и других отделов центральной нервной системы, использующих в качестве нейромедиатора дофамин. Кроме того, 6-[18F]-L-ФДОФА применяется в диагностике нейроэндокринных опухолей (феохромоцитом, нейробластом), а также глиом - опухолей мозга, с трудом поддающихся лечению. 1.3.1 Выделение фтора-18 из водной мишени циклотрона Для использования в реакциях нуклеофильного фторирования фтор-18 получают по ядерной реакции 18 O(p,n)18F при облучении протонами водной мишени циклотрона (объем [18O]H2O от 0.8 до 2.5 мл). Как уже отмечалось, фтор18 получается в форме [18F]фторида без добавления носителя с исключительно высокой удельной мольной активностью, что важно в случае РФП для рецепторных исследований (концентрация большинства рецепторов очень мала). Полученный [18F]фторид выделяют из облученной воды путем сорбции на анионообменной смоле и затем элюируют растворами различного состава непосредственно в реакционный сосуд для проведения радиофторирования. Перевод [18F]фторида из водной в органическую фазу осуществляется с помощью межфазных катализаторов (МФК) - краун-эфиров или криптандов - в комбинациях с различными основаниями, а также солей тетрабутил- или тетраэтиламмония. Эффективным и удобным для автоматизации является метод элюирования фторида-18, адсорбированного на анионообменном картридже, раствором криптофикса и карбоната калия в смеси ацетонитрил-вода (рис. 3), содержащей минимальное содержание воды (4-5% по объему) [18]. Растворители удаляют дистилляцией в токе азота, и получают реакционноспособный комплекс [K/K2.2.2]+18F–, являющийся фторирующим агентом. Реакции нуклеофильного фторирования проводят в безводных апротонных растворителях (ДМСО, ДМФА, СН3CN и др.), так как присутствие следовых количеств воды снижает радиохимический выход. 10

При проведении реакции прямого нуклеофильного замещения уходящей группы в молекуле предшественника функциональные группы с подвижными атомами водорода должны быть защищены для предотвращения атаки нуклеофила в нежелательное положение. Защитные группы удаляют на последней стадии синтеза путем кислотного или (реже) щелочного гидролиза, а конечный продукт выделяют из реакционной смеси методами полупрепаративной ВЭЖХ или твердофазной экстракции. Рис. 3. Схема получения реакционноспособного фторирующего комплекса: криптофикс (K2.2.2) в качестве МФК и карбонат калия в роли основания 1.3.2 Ароматическое нуклеофильное фторирование Образование связи F-C с помощью реакции нуклеофильного замещения в ароматических субстратах представляет огромный интерес, так как ароматическое кольцо является одним из наиболее распространенных структурных фрагментов биологически активных молекул. Радиотрейсеры с фтором-18 в ароматическом кольце отличаются высокой стабильностью в отношении потери метки в результате метаболизма. Однако, в отличие от алифатических субстратов для введения фтора-18 в ароматическое кольцо наряду с уходящей группой (LG) необходимо присутствие сильных электроноакцепторных заместителей (EWG 11

NO2, CHO, COR и др.), находящихся в орто- и пара-положении к ней. Основные закономерности фторирования изучены на примере простых ароматических соединений (замещённых бензальдегидов, бензонитрилов), где в большинстве случаев реализуется классический механизм ароматического нуклеофильного замещения SNAr, включающий две стадии (рис. 4). На первой (лимитирующей) стадии нуклеофил присоединяется к субстрату с образованием анионного интермедиата, а на второй (быстрой) стадии происходит отщепление нуклеофуга [19, 20, 21]. Рис. 4. Схема реакции нуклеофильного замещения уходящей группы [18F]фторидом (ароматический субстрат) Известно, что в отсутствие активации бензольного кольца методы прямого нуклеофильного радиофторирования не эффективны, и для получения меченых фтором-18 сложных ароматических соединений необходим многостадийный синтез. Важно, чтобы предложенный метод мог быть адаптирован к автоматизированным модулям синтеза, используемым при работе с высокими уровнями радиоактивности [22]. 1.3.3 Роль защитных и уходящих групп при введении метки фтор-18 в ароматические субстраты [18F]фторид является очень реакционноспособной частицей по отношению к атомам водорода, поэтому при использовании метода нуклеофильного фторирования необходимо защитить функциональные группы с подвижными атомами водорода в молекуле предшественника. Так в случае ароматических аминокислот, меченых фтором-18, необходима защита фенольных гидроксильных групп [23]. В классической органической химии используется достаточно много 12

защитных групп [24]. Однако, в синтезе РФП они должны отвечать определенным требованиям. Во-первых, они должны быть устойчивы к щелочным условиям реакции радиофторирования (температура: 100 - 160 °C, pH: 8 - 12), а также в ходе дальнейшего синтеза, но при этом легко удаляться на последней стадии. Другим важным требованиям к предшественникам, используемым на первой стадии радиоактивного радиофторирования. синтеза, является высокий Эффективность радиофторирования выход в реакции свою очередь определяется природой уходящей и защитной групп и их взаиморасположением в молекуле замещенного бензальдегида. Эту совокупность факторов надо учитывать и при поиске и экспериментальном исследовании молекул с новыми защитными группами для использования в качестве предшественников в многостадийном синтезе РФП класса аминокислот ([18F]ФАА), в частности, 6-[18F]-L-ФДОФА [25, 26]. 1.4 Особенности синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА методом нуклеофильного радиофторирования Для получения 6-[18F]-L-ФДОФА с использованием [18F]фторида используют многостадийные методы синтеза, основанные на введении метки фтор-18 в относительно простые молекулы замещенных бензальдегидов. Поскольку в ПЭТ необходимы [18F]ФАА в энатиомерно чистой форме, наиболее перспективными являются методы асимметрического синтеза, которые, в случае тщательного подбора хирального агента и условий реакций, позволяют получать 6-[18F]-LФДОФА с высокой (более 95%) энантиомерной чистотой. Ключевой стадией синтеза является реакция асимметрического алкилирования с использованием различных хиральных индукторов или катализаторов, подробно рассмотренных в обзоре [15] и работе [25], где алкилирующим агентом служит меченый фтором-18 замещенный фторбензилгалогенид (бромид или йодид). Cхема асимметрического синтеза [26], разработанного совместно в ИМЧ РАН, Санкт-Петербург и Институте элементорганических соединений РАН, Москва, приведена ниже (Рис. 5). Первая стадия синтеза - реакция нуклеофильного замещения уходящей группы на [18F]фторид в молекуле замещённого нитробензальдегида в присутствии МФК. Вторая стадия синтеза - восстановление полученного на первом этапе 13

[18F]фторзамещенного бензальдегида в соответствующий спирт; третья - получение меченного фтором-18 алкилирующего агента, четвёртая реакция - асимметрического алкилирования комплекса Ni(II) с основанием Шиффа на основе глицина и хирального реагента - (S)-N-(2-бензоилфенил)-1-пирролидин-2- карбоксамида (Ni-(S)-BPB-Gly). На последнем этапе синтеза, который подробно будет изучен в настоящей работе, производится разложение полученного комплекса и одновременное снятие защитных групп путем кислотного гидролиза. O CHO O NO2 Н и тр о пи пер о нал ь [K /K 2 .2 .2 ]+ 1 8F Д M С О , 1 8 0 oC , 5 мин CHO O 18 O F N AB H4 aq P h3P Br C H 2 C l2 C H2Br O 18 O F COOH 18 (R ) (S ) O N N O O N C H2C L2 t-B u O K , 5 м и н , 4 0 oC N F OH N H2 (R ) Ni Ni H O O H N 18 F H l 57% , 1 8 0 oC , 2 0 м и н H N O H (S ) Ph OH HO Ph L --F D O P À O O N i- ( R ) - B P B - G l y Рис. 5. Схема асимметрического нуклеофильного синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА [26] Традиционно в качестве защиты гидроксильных групп в синтезе [18F]ФАА используют метокси- (II, рис. 6.) [19] или метилендиокси- группы (I, рис.6) [26], удаление которых требует применения агрессивных реагентов и жестких условий (57% HI, 160°C, 20 мин). Именно стадия снятия защиты является наиболее проблематичной для реализации в автоматизированных модулях синтеза, в особенности при использовании одноразовых кассет реагентов [22], не рассчитанных на работу в агрессивных средах. В работе [27] по асимметрическому синтезу 6-18F-L-трео-3,4-дигидроксифенилсерина впервые был применен 4,514

бис(метоксиметокси)-2-нитробензальдегид (III, рис.6) с защитными метоксиметокси (МОМ) группами, легко удаляемыми в мягких условиях: 1N НСl, 50100оС, 5 мин. Однако, согласно работе [28], использование данного бензальдегида в асимметрическом синтезе 6-[18F]фтор-L-ДОФА по методике [26] приводило к существенному снижению радиохимического выхода конечного продукта, по сравнению с использованием в качестве предшественника «традиционного» 6- нитропипероналя (I). O O O H NO 2 O I CH 3 O O H CH 3 O NO 2 CH 3 O O CH 3 O O II H NO 2 III Рис. 6. Замещённые 4,5 нитробензальдегиды с различными защитными группами Поэтому синтез 4,5–замещённых нитробензальдегидов с различными защитными группами и оценка возможности их использования в качестве предшественников при получении 6-[18F]- L-ФДОФА методом [26] представляет большой интерес и является целью настоящей работы. Более конкретно задачи работы включают: - исследование и оценка эффективности радиофторирования новых синтезированных замещённых нитробензальдегидов, используемых в качестве предшественников в синтезе 6-[18F]- L-ФДОФА; - подбор условий снятия защитных групп на последней стадии синтеза 6[18F]- L-ФДОФА; - разработка методик контроля за прохождением различных стадий синтеза методом радиотонкослойной хроматографии; - выбор оптимальной структуры предшественника, обеспечивающей как высокую эффективность радиофторирования, так и возможность снятия защиты кислотным гидролизом с использованием водных растворов HCl. 15

2 Экспериментальная часть 2.1 Синтез 4,5 замещенных нитробензальдегидов В данной работе изучены процессы нуклеофильного радиофторирования серии 4,5-замещенных бензальдегидов IV-VIII (Рис. 7) с различными защитными группами и нитрогруппой в качестве уходящей группы. Синтез данных нитробензальдегидов был выполнен в СПбГТУ, Санкт-Петербург, и их структура подтверждена 1 спектрами Н и 13 С-ЯМР O элементным BocO H NO 2 O H BocO NO 2 IV EtO CH 2 O H EtO CH 2 O NO 2 V VI O C3H7O O iC 3 H 7 O H C3H7O NO 2 H iC 3 H 7 O VII Рис. 7. анализом. O BuO BuO и NO 2 VIII Структурные формулы 4,5-замещённых нитробензальдегидов: 4,5-бис(бутокси)-2-нитробензальдегид (IV); 4,5-бис(трет-бутоксикарбонилокси)-2нитробензальдегид (V); 4,5-бис(этоксиметокси)-2-нитробензальдегид 4,5-бис(пропокси)-2-нитробензальдегид (VII); (VI); 4,5-бис(изопропокси)-2- нитробензальдегид (VIII) 2.2 Радиохимический синтез 2.2.1 Оборудование Радионуклид 18 F получали на медицинском циклотроне GE PETTrace 4 (Швеция), энергия протонов 16,5 МэВ; свинцовый бокс для работы с радиоактивностью Von Gahlen (Нидерланды); изотопный калибратор PTW Curiementor-2 (Германия) для измерения 16 радиоактивности; сканнер для

тонкослойной радиохроматографии Minigita (Raytest, Германия). Для проведения радиоактивного синтеза использовали разработанный в ИМЧ РАН дистанционно управляемый полуавтоматический радиофторирования, модуль установленный в для свинцовом нуклеофильного боксе; управление переключением вентилей, потоков газа, температурного блока осуществлялось с помощью внешней кнопочной панели. 2.2.2 Реактивы и материалы В работе использованы: вода-18О с обогащением 97% (Глобальные научные технологии, Сосновый Бор, Россия); реактивы фирмы 4,7,13,16,20,24-гексаокса-1,10-диазабицикло[8.8.8]гексакозан К2.2.2.), К2CO3, NaBH4, Ph3PBr2; t-BuOK; безводный Sigma Aldrich: (криптофикс ДМФА; или безводный бескислотный ацетонитрил фирмы Криохром, Санкт-Петербург; анионообменный картридж, заполненный четвертичной метиламмониевой анионообменной смолой SepPak QMA Accell Plus (Waters); хиральный комплекс Ni-(S)-BPB-Gly был предоставлен ИНЭОС РАН, Москва. 2.2.3 Подготовка модуля для нуклеофильного фторирования Принципиальная схема автоматизированного дистанционно управляемого модуля синтеза (ИМЧ РАН) приведена на рис. 8. Модуль включает электронно управляемые двух- и трехходовые вентили фирмы Бюркерт, терморегулятор, ручной регулятор потока газа, пневматический поршень для поднятия и опускания иглы в реакционный сосуд, стандартные конические вайлы объемом для реагентов объемом 5 мл (Supelco). Транспортировка жидкостей осуществлялась током азота, а управление пневматическим поршнем для устройства поднятия иглы - сжатым воздухом. Для промывки линий модуля (тефлоновых трубок диаметром 1/16”) сосуды для реагентов заполняли ацетонитрилом, а для полного испарения растворителя нагревали реакционный сосуд при температуре 130°С в течение 10 мин. Основной реакционный сосуд находится в нагревательном устройстве, которое обеспечивает возможность нагрева до 200oC. Управление процессом 17

проводилось дистанционно с помощью выключателей, установленных вне горячей зоны. Рис. 8. Схема модуля для нуклеофильного 18F-фторирования Основные этапы синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА согласно методике [26] (рис. 5) можно представить схематически, как это показано ниже. 18

Подготовка к синтезу и одновременное облучение мишени Получение фторированного 18Fбензальдегида Реакция восстановления Реакция галогенирования Реакция алкилирования с комплексом Ni (II) Кислотный гидролиз и снятие защит Выделение конечного продукта Рис. 9. Основные этапы синтеза 6-[18F]-L-ФДОФА 2.2.4 Подготовка реагентов и материалов Непосредственно перед использованием картриджи SepPak QMA Accell Plus кондиционировали элюированием 10 мл 0,5 М водного раствора К2СО3 и 15 мл деионизованной воды. Для проведения первой стадии синтеза навеску предшественника ~ 5 мг растворяли в 0.6 мл безводного ДМФА и помещали в вайл с закрытой крышкой. Раствор готовили непосредственно перед поступлением облученной воды, содержащей 18 F, на размещенный на входе в модуль синтеза анионообменный картридж. 19

2.3 Анализ реакционной смеси методом тонкослойной радиохроматографии (радиоТСХ) Анализ методом радиоТСХ проводили на пластинках силикагеля типа “Сорбфил” с пластиковой подложкой. В качестве элюентов использовались: 1) для анализа продуктов реакции [18F]фторирования, восстановления, галогенирования и реакции алкилирования с Ni-комплексом - хлороформ / ацетон (7/1, v/v) или хлористый метилен; 2) для анализа конечного продукта (6-[18F]- L-ФДОФА) - н-бутанол/уксусная кислота/этанол (2/1/1, v/v/v). Методика анализа заключалась в следующем: на хроматографическую пластинку размером 2×10 см наносилась проба объемом 1 мкл при помощи микрошприца на расстоянии 1,5 см от нижнего края, и пластина ставилась вертикально в кювету с элюентом. Затем кювета плотно закрывалась крышкой, и элюирование продолжали до того момента, когда фронт растворителя достигал начала 10-го сантиметра. Затем пластинку извлекали и высушивали в токе воздуха. Анализ методом радиоТСХ дает картину распределения радиоактивности по пластине. Каждое меченое соединение поднимается с фронтом элюента в соответствии со своим фактором удерживания Rf. Так, известно, что [18F]фторидион прочно адсорбируется на силикагеле и практически не перемещается по пластине. Следовательно, часть активности, соответствующая непрореагировавшему [18F]фториду, должна оставаться на старте пластины, т.е. на втором сантиметре. Другая же часть активности, соответствующая меченым органическим соединениям, при элюировании поднимается вверх по пластине. Таким образом, зная Rf того или иного вещества можно не только надежно определить его присутствие в реакционной смеси, но и оценить эффективность реакции фторирования. 2.4 Получение фтора-18 и его комплекса с МФК Радионуклид фтор-18 (T1/2 110 мин) в форме [18F]фторида получали по ядерной реакции 18 O(p,n)18F, реализуемой при облучении [18О]Н2О протонами в 20

водной ниобиевой мишени циклотрона объемом 2.3 мл. В работе использовали начальную активность фтора-18 от 50 до 350 мКи, что достаточно для разработки стратегии синтеза и анализа всех продуктов. Полученный в мишени водный раствор [18F]фторида током азота переносили на кондиционированный ранее (см. 2.2.4.) анионообменный картридж Sep-Pak Light Waters AccellTM Plus QMA; для удаления следов воды картридж продували током азота в течение 5-10 мин. 18 F элюировали в реакционный конический сосуд объемом 5 мл, помещенный в нагревательный блок. Использовали элюент, предложенный в работе [18], следующего состава: К2.2.2 - 9.8 мг; K2CO3 - 2.1 мг; H2O - 0.09 мл; ацетонитрил - 2 мл. Растворители удаляли в токе азота при 130оС в течение 4-6 мин, после чего добавляли порцию CH3CN (1 мл) и проводили дополнительную отгонку следов воды в виде азеотропа. Полученный активированный комплекс [К/2.2.2.]+18F- использовали на следующей стадии. 2.5 Проведение реакции нуклеофильного радиофторирования К активированному комплексу, содержащему фтор-18, добавляли замещенный бензальдегид IV-VIII в количестве ~ 5 мг в 0.6 мл ДМФА, смесь нагревали в закрытом сосуде при температуре 155оС в течение 10 мин. Эффективность радиофторирования определяли путем анализа реакционной аликвоты методом радиоТСХ в системе 1 (см. 2.3.). Факторы удерживания (Rf) соответствующих 18 F-фторированных производных IVА-VIIIА составили: 18 F- фторид 0,11; IVА 0,65; VА 0,55; VIА 0,6; VIIА 0,61; VIIIА 0,62. Распределение радиоактивности детектировали радиометрическим методом при помощи сканнера для радиоТСХ. Эффективность радиофторирования (%) определяли по данным радиоТСХ как отношение площади пика продукта к суммарной площади всех пиков, детектированных на радиоТСХ хроматограмме. 2.6 Оценка эффективности снятия защиты с гидрокси групп при использовании IVА-VIIIА в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА Синтез 6-[18F]-L-ФДОФА проводили ранее разработанным методом [26] в модифицированном варианте. К полученному на первой стадии 18 F- фторированному замещённому бензальдегиду добавляли 0,23 мл NaBH4 (5 мг 21

NaBH4 в 1,25 мл ДМФА) и при температуре 40°С проводили восстановление при перемешивании током азота в течение 5 мин. Затем добавляли 0,8 мл Ph3PBr2 (125 мг Ph3PBr2 в 0,8 мл ДМФА) и при той же температуре проводили галогенирование в течение 5 мин. Затем в заранее приготовленный вайл с 20 мг комплекса Ni-(S)ВPВ-Gly и 20 мг t-BuOK c помощью иглы с автоматическим управлением переносили 18F-бензилгалогенид, и при перемешивании током азота и температуре 30°С проводили алкилирование в течение 8 мин. К полученной реакционной смеси добавляли водный раствор HCl (6N; 1,5 мл), НСlконц (1,5 мл ) или HI (57%, 1,5 мл). Смесь нагревали в течение 10 мин при 100-180 0С. После охлаждения отбирали аликвоту реакционной смеси для анализа методом радиоТСХ (система 2, см. 2.3.). Для идентификации 6-[18F]-L-ФДОФА в дополнение к радиоТСХ анализу (Система 2, см. 2.3) использовали метод радиоВЭЖХ, описанный в [26]. 22

3 Результаты и обсуждение 3.1 Выбор защитных групп Из литературных данных известно, что лёгкость удаления алкильных защитных групп возрастает в ряду: OCH3 < OCH(CH2)2 < OCH2Ph < OC(CH3)3 < OCH2OCH3 [24]. В рамках этой концепции нами были выбраны 4,5-замещенные нитробензальдегиды IV-VIII с различными защитными группами, структурные формулы которых представлены на рис. 7. Синтез этих соединений был выполнен в СПбГТУ, Санкт-Петербург, и их структура подтверждена спектрами 1Н и 13С-ЯМР и элементным анализом. Общая схема синтеза представлена на рис. 10. Синтез проводился реакцией алкилирования 4,5-дигидрокси-2-нитробензальдегида, который, в свою очередь, получали путём раскрытия метилендиокси кольца соединения (I) (рис. 6), коммерчески доступного. В качестве алкилирующих агентов использовались: н-бромбутан, ди(трет-бутил)дикарбонат, хлорметилэтиловый эфир, н-бромпропан, 2-бромпропан, соответственно. Рис. 10. Схема синтеза 4,5 замещенных нитробензальдегидов IV-VIII 23

3.2 Синтез 18 F-фторированных замещённых нитробензальдегидов IVА- VIIIА На рис. 11 приведена общая схема 18 F-фторирования нитробензальдегидов IV-VIII. Поскольку стадия радиофторирования является первой в многостадийном синтезе 6-[18F]- L-ФДОФА (см. рис. 5), то достижение высокого радиохимического выхода (РХВ) играет определяющую роль. Из литературных данных известно, что оптимальным растворителем для проведения этой стадии является ДМФА, тогда как в ДМСО выходы радиофторирования значительно ниже [19]. Поэтому реакцию радиофторирования изучаемых предшественников IV-VIII проводили в ДМФА при высоких температурах (155°С, 10 мин), типичных для реакций нуклеофильного фторирования ароматических субстратов с нитро-группой в качестве уходящей группы. Эффективность радиофторирования оценивали по данным радиоТСХ, методика описана ранее в 2.3.; радиохроматограммы приведены на рис. 12, а данные - в табл.2. O O RO H RO [К/К2.2.2]+ 18F- RO H ДМФА, 155 °С, 10мин RO NO2 18 F Рис. 11. Общая схема реакции нуклеофильного радиофторирования Таблица 2. Эффективность реакции радиофторирования 4,5 замещённых нитробензальдегидов IV-VIII Структурная формула бензальдегида IV V O H NO2 BocO BocO VII O O BuO BuO VI H NO 2 EtOCH2O O H EtOCH2O VIII NO2 C3H7O C3H7O O H iC3H7O NO2 iC3H7O H NO2 Эффективность 18F-фторирования (по данным радиоТСХ) 75±5 (n=5) 3±1 (n=3) 79±11 (n=10) 24 92;97 (n=2) 79;87 (n=2)

raytest Isotopenmeßgeräte GmbH fil e: BA B U11A method: F date: 11.11.2015 time: 15:14:13 count ti me: 200 s smoothing constant: 1.0 mm H V: 850 V LL: 300 keV U L: 1000 keV origi n: 0.0 mm solvent front: 99.9 mm raytest Isotopenmeßgeräte GmbH fil e: BA 10071A method: F date: 10.07.2014 time: 16:08:01 count ti me: 200 s smoothing constant: 1.0 mm H V: 850 V LL: 300 keV U L: 1000 keV origi n: 0.0 mm solvent front: 99.9 mm 700.0 18F-BA 8000.0 600.0 18F- 7000.0 IVА 6000.0 500.0 5000.0 C nts C nts 400.0 4000.0 300.0 18 - 3000.0 F 200.0 18F- 2000.0 VА 100.0 BA 1000.0 0.0 0.0 0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 mm 60.0 70.0 80.0 90.0 100.0 0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 mm 60.0 70.0 80.0 90.0 100.0 18 F-BA raytest Isotopenmeßgeräte GmbH fil e: BA P RIF method: F date: 02.12.2015 time: 14:51:21 count ti me: 200 s smoothing constant: 1.0 mm H V: 850 V LL: 300 k eV U L: 1000 keV origi n: 0.0 mm solvent front: 99.9 mm 700.0 VIА VIIА 600.0 C nts 500.0 400.0 300.0 18 F-примесь 18 F- 200.0 100.0 0.0 0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 mm 60.0 70.0 80.0 90.0 100.0 18 F-BA raytest Isotopenmeßgeräte GmbH fil e: IPR B A 3A method: F date: 03.02.2016 time: 15:50:11 count ti me: 200 s smoothing constant: 1.0 mm H V: 850 V LL: 300 keV U L: 1000 keV origi n: 0.0 mm solvent front: 99.9 mm 7000.0 VIIIА 6000.0 5000.0 C nts 4000.0 3000.0 2000.0 18F- 1000.0 0.0 0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 mm 60.0 70.0 80.0 90.0 100.0 Рис. 12. Данные радиоТСХ анализа реакционных смесей, полученных при радиофторировании соединений IV-VIII (элюент - система 1, см. 2.3): IVА- 4,5-бис(бутокси)-2-фторбензальдегид; VА- 4,5-бис(третбутоксикарбонилокси)-2-фторбензальдегид; VIА - 4,5-бис(этоксиметокси)-2фторбензальдегид; VII А- 4,5-бис(пропокси)-2-фторбензальдегид; VIIIА - 4,5-бис(изопропокси)-2-фторбензальдегид. 25

Согласно данным таблицы 2, из изученной в данной работе серии замещённых нитробензальдегидов наиболее высокий выход в реакции фторирования достигался в случае соединения VII. 18 F- Эффективность радиофторирования была достаточно высокой (более 70%) и в случае соединений IV, VI и VIII. Что касается соединения V, ввиду малого РХВ (~ 3%) это соединение далее не изучалось. 3.3 Сравнение результатов радиофторирования соединений IV-VIII и значений химических сдвигов атомов углерода В ранних работах по синтезу меченых фтором-18 бензальдегидов [20] было показано, что эффективность радиофторирования коррелирует со значениями химических сдвигов в спектрах 13С ЯМР, определяемых электронной плотностью в центре нуклеофильной атаки. Это нашло подтверждение и в недавней работе [28]. Таблица 3. Химические сдвиги атомов углерода 4,5-замещённых нитробензальдегидов I, III - VIII Соединение 13 C химические сдвиги, ррм № атома углерода Альдегидная 1 2 3 4 5 6 группа I 125.27 143.59 108.17 153.22 152.31 110.67 187.89 III 126,3 144,38 111,79 151,24 150,35 114,62 186,42 IV 125,27 143,59 108,17 153,22 152,31 110,67 187,89 V 124,12 120,24 145,85 149,21 129,48 120,24 186,27 VI 126,15 144,26 114,49 150,49 151,38 111,67 187,47 VII 125,25 143,56 108,19 152,27 153,18 110,68 187,83 VIII 125,35 143,43 110,88 151,98 153,10 113,14 187,86 26

В таблице 3 приведены данные 13 C ЯМР спектроскопии серии бензальдегидов. Этот метод является достаточно чувствительным для определения электронной плотности на атомах углерода в ароматическом кольце с учетом sp2 и sp3-гибридизации эфирных групп [20]. В серии соединений IV-VIII, обладающих структурным сходством, прослеживается корреляция между эффективностью радиофторирования и величиной химического сдвига при С-2 атоме углерода бензольного кольца, активного центра, на котором и происходит замещение нитрогруппы на фтор-18. Химические сдвиги атомов углерода в данном положении для соединений IV, VI, VII и VIII находятся в пределах 143-146 ррм (табл.3) и соответствуют высоким выходам радиофторирования (табл.2). Однако в случае V химический сдвиг 13 С в положении 2 имеет меньшее значение на 24 ррм, т.е. сдвинут в высокое поле, что говорит об увеличении электронной плотности в реакционном центре, и снижении радиохимического выхода. Данные результаты можно объяснить различием в донорно-акцепторным влиянии защитных групп соединений IV, VI, VII и VIII по сравнению с V, где имеющиеся карбокси-группы имеют электронно-акцепторную природу. Более высокий и стабильный выход фторирования VII по сравнению с IV, VI и VIII возможно связан также со специфической сольватацией субстрата с ДМФА в присутствии межфазного катализатора криптофикса. 3.4 Кислотный гидролиз. Как уже отмечалось, стадия снятия защиты является критичной в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА и определяет во многом возможность автоматизации метода в современных модулях синтеза. Таблица 4. Условия снятия защитных групп для соединений IV, VI-VIII (t = 10 мин) IV VI O O BuO BuO VII H NO2 EtOCH2O EtOCH2O VIII O H NO2 C3H7O C3H7O 27 O H iC3H7O NO2 iC3H7O H NO2

Условия снятия защитных групп Снять не удалось 6N HCl, 120⁰C 57 % HI, 160⁰C 57 % HI, 130⁰C В таблице 4 приведены условия снятия защитных групп в молекуле «защищенной» 6-[18F]-L-ФДОФА, синтезированной исходя из предшественников IV, VI, VII и VIII. Согласно полученным данным, бутокси-защита предшественника IV ни при каких изученных условиях гидролиза не снимается. Снятие защиты в случае пропокси- и изопропокси-производных VII и VIII, соответственно, требует жестких условий: 57% HI, 160°С и 130°С. Более полному выполнению поставленной задачи выполняет нитробензальдегид VI с этоксиметокси-защитой, для удаления защитной группы достаточно нагревания в разбавленном водном растворе кислоты (6N HCl, 120°С), что вполне пригодно для автоматизации синтеза. В то же время в случае VI достигается достаточно высокий выход в реакции радиофторирования, что позволяет считать структуру данного соединения оптимальной для использования в качестве предшественника в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА и, возможно, других РФП класса [18F]ФАА, содержащих сходный ароматический фрагмент. 28

Выводы - изучена эффективность реакции радиофторирования серии новых 4,5-замещённых нитробензальдегидов, используемых в качестве предшественников в синтезе 6-[18F]- L-ФДОФА; - по данным 13 С ЯМР отмечена корреляция значения эффективности радиофторирования и величины химического сдвига атома углерода активного центра, на котором происходит замещение нитро-группы на фтор-18; - для каждого из изученных нитробензальдегидов найдены условия снятия защитных групп на последней стадии синтеза 6-[18F]- L-ФДОФА; - показано, что 4,5-диэтоксиметокси-2-нитробензальдегид (VI) обеспечивает высокую эффективность радиофторирования и возможность снятия защиты в мягких условиях и может быть использован в синтезе 6-[18F]-L-ФДОФА в качестве предшественника. 29

Благодарности Выражаю огромную благодарность за помощь в выполнении и подготовке выпускной квалификационной работы моим научным руководителям – Красиковой Раисе Николаевне и Орловской Виктории Владимировне, а также Федоровой Ольге Сталлитовне. Большое спасибо всему коллективу лаборатории радиохимии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института мозга человека им. Н.П. Бехтеревой Российской академии наук (ИМЧ РАН): Ваулиной Дарье Дмитриевне, Кузнецовой Ольге Федоровне, Гомзиной Анне Анатольевне. 30

Список цитируемой литературы [1] L.G. Strauss, J. Nucl. Med. 1996, V. 23. PP 1409-1415 [2] C. Huang, J. McConathy, J. Nucl. Med. 2013, V. 54. PP 1-4 [3] W.B. Ittner, M.M. Ter-Pogossian, Rev. Sci Inst., 1951, V.22, PP 638-641 [4] M.E. Phelps, E.J. Hoffman, N.A. Mullani, M.M. Ter-Pogossian, J Nucl. Med. 1975, V.16, PP 210-224 [5] M.M. Ter-Pogossian, M.E. Phelps, E.J. Hoffman, Radiology 1975, V.114, PP 446-453 [6] M.E. Phelps, J.C. Maziotta, H.R. Schelbert, New York, 1985, P. 704 [7] R.L. Wahl, J.W. Buchanan, Philadelphia, 2002, P. 462 [8] С.В. Медведев, Т.Ю. Скворцова, Р.Н. Красикова, Санкт-Петербург, 2008, С. 319 [9] Г.Е. Кодина, Р.Н. Красикова, Методы получения радиофармацевтических препаратов и радионуклидных генераторов для ядерной медицины, Учебное пособие для ВУЗов, Москва, ИД МЭИ,2014, С. 281 [10] P.W. Miller, N.J. Long, R.Vilar, A.D. Gee, Angew. Chem. Int. Ed. 2008, V. 47, PP 8998 – 9033 [11] R. H. Mach, S.W. Schwarz, PET Clin. 2010. V.5. PP 131-153 [12] R. M. Lambrecht, R. Neirinkhx, A. P. Wolf, Int. J. Appl. Rad. Isot., 1978, V. 29, P. 175 [13] M. Guilliame, A. Luxen, B. Nebeling, Int. J. Radiat. Appl. Instrum. Part A, 1991, P. 749 [14] R.J. Nickles, M. E. Daube, T. J. Ruth, Int. J. Appl. Rad.Isot., 1984, V. 35, P. 117 [15] В.В. Орловская, О.С. Фёдорова, Р.Н. Красикова, Радихимия, 2015, Т. 64, С.1518-1535 [16] J.R. Mercer, J. Pharm. Pharmaceut. Sci. 2007, V. 10, PP 180-202 [17] G. Firnau, R. Chiracal, E.S. Garnett, J. Nucl. Med., 1984, V. 25, PP 12281234. [18] Н.А. Гомзина, Д.А. Васильев, Р.Н. Красикова, Радиохимия, 2002, Т. 44, С. 366-337 31

[19] C. Lemaire, L. Libert, A. Plenevaux, J. Aerts, X. Franci, A. Luxen, J. Fluorine Chem. 2012, V. 138, PP 48-55 [20] Y.-S. Ding, C.-Y. Shiue, J. S. Fowler, A. P. Wolf, A. Plenevaux, J. Fluorine Chem., 1990, V. 48, PP 189-205 [21] M. Attina, F. Cacace, A.P. Wolf, J. Label. Compd. Radiopharm, 1983, V. 20, PP 501-514 [22] R. Krasikova, Curr. Org. Chem., 2013, V. 17, PP 2097-2107 [23] H.H. Coenen, P.H. Elsinga, R. Iwata, M.R. Kilbourn, M.R.A.Pillai, M.G.R. Rajan, H.N.Jr. Wagner, J.J. Zaknun, Nucl. Med. Biol. 2010,V.37, PP 727-740 [24] Дж. МакОми, Защитные группы в органической химии, Мир, Москва, 1976, C. 391 [25] O. Couturier, A. Luxen, J.F.Chatal, Eur. J. Nucl. Med. Molec. Imag., 2004, V. 31. PP 1182-1206 [26] Р.Н. Красикова, О. Ф. Кузнецова, О.С. Федорова, И.К. Мосевич, В.И. Малеев, Ю.Н. Белоконь, Т.Ф. Савельева, А.С Сагиян, С.А. Дадаян, А.А. Петросян, Радиохимия, 2007, Т. 49, С. 449-454 [27] R. Krasikova, V. Orlovskaja, O. Fedorova, V. Maleev, T. Savelieva, Yu. Belokon, The Quart. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2014, V. 58, PP 63-64 [28] В.В. Орловская, О.С. Фёдорова, Е.П. Студенцов, А.А Головина, Р.Н. Красикова, Радиохимия, 2016, №2, С. 507-512. 32

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв