Асимметрический синтез гетероциклически замещенных производных (S)- аланина и их биологический скрининг

Елена Кузубова

Асимметрический синтез гетероциклически замещенных производных (S)- аланина и их биологический скрининг

За последние годы потребность в значительных количествах α-аминокислот возрасла в связи с широким использованием их в биотехнологии, медицине, пищевой промышленности, микробиологии и других областях науки и техники. Если в прошлом потребности могли быть удовлетворены путем выделения их из гидролизатов белков или из других природных источников, то со второй половины 20-ого века интенсивно развиваются синтетические направления получения α-аминокислот. Одним из актуальных направлений последних десятилетий - получение небелковых α-аминокислот в виду их широкого спектра применения как в медицина, так и в биотехнологии . В связи с этим, асимметрический синтез хиральных биологически активных соединений с заданной абсолютной конфигурацией атомов углеродного скелета - является одной из ведущих направлений синтеза небелковых -аминокислот. Внимание, уделяемое получению α-аминокислот в энантиомерно чистой форме, привлекает все больше внимание и занимает особое место в современной биоорганической химии. Это связано с их использованием в различных областях медицины фармакологии, пищевой промышленности, в сельском хозяйстве и т.д.

Медицина и здравоохранение

Дипломы

Вуз: Белгородский государственный университет - национальный исследовательский университет (НИУ «БелГУ»)

ID: 60db31d3e4dde5000191e806

UUID: 7287ccc0-bb16-0139-372a-0242ac180005

Язык: Русский

Опубликовано: больше 3 лет назад

Просмотры: 24

10.48

Елена Кузубова

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 386,7 КБ

Поделиться работой

Ереванский государственный университет Институт фармации «ФАРМАЦИЯ» ОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ПРОГРАММА Кузубова Елена Валерьевна ДИПЛОМНАЯ РАБОТА Асимметрический синтез гетероциклически замещенных производных (S)- аланина и их биологический скрининг

Ереван 2021

Студент` _______________________ подпись ФИО Руководитель` _______________ подпись ; уч. степень, должность ФИО «Разрешаю защиту» Зав.кафедры՝ _______________________ подпись ______________________________________________________________________ уч. степень, должность ФИО «_____»___________20___г.

Оглавление ВВЕДЕНИЕ......................................................................................... 4 1. Литературный обзор......................................................................5 1.1. Актуальность и прикладное значение небелковых аминокислот.......................................................................................5 1.2. Методы асимметрического синтеза небелковых аминокислот.......................................................................................8 1.3. Биомиметический синтез аминокислот................................11 1.4. Скрининг целевых амминокислот на антибактериальную активность........................................................................................16 2. Постановка задачи и выбор объектов исследования...............18 3. Обсуждение результатов...........................................................19 3.1. Синтез исходных аминокислотных и дегидроаминокислотных синтонов................................................19 3.1.1. Синтез хирального NiII комплекса оснований Шиффа глицина с и (S)-2-N-(N'-бензилпролил)аминобензофеноном......19 3.2. Асимметрические реакции присоединения по Михаэлю гетероциклических производных индола к активной С=С связи дегидроаланина в хиральном комплексе NiII [(S)-BPB-Δ-Ala]......21 3.3 Биологический скрининг 2-амино-3-(2-метил-1Н-индол-1-ил)пропановой кислоты и 2-амино-3-(3-метил-1Н-индол-1-ил)пропановой кислоты.......................................................................23 4. Экспериментальная часть.........................................................25 4.1. Приборы, материалы и реагенты...........................................25 4.2 Cинтез исходных соединений.................................................25 4.3. Асимметрический синтез ß-замещенных аналогов аланина ........................................................................................................... 27 4.3.1. Асимметрическое нуклеофильное присоединение 3метилиндла к двойной С=С связи комплекса [(S)-BPB-ΔAla]Ni(II)........................................................................................... 27

4.3.2. Асимметрическое нуклеофильное присоединение 2метилиндла к двойной С=С связи комплекса [(S)-BPB-ΔAla]Ni(II)........................................................................................... 27 4.4. Разложение полученных комплексов и выделение целевых аминокислот.....................................................................................29 Выводы............................................................................................. 31 Литература....................................................................................... 32

ВВЕДЕНИЕ За последние годы потребность в значительных количествах αаминокислот возрасла в связи с широким использованием их в биотехнологии, медицине, пищевой промышленности, микробиологии и других областях науки и техники. Если в прошлом потребности могли быть удовлетворены путем выделения их из гидролизатов белков или из других природных источников, то со второй половины 20-ого века интенсивно развиваются синтетические направления получения αаминокислот [1]. Одним из актуальных направлений последних десятилетий получение небелковых α-аминокислот в виду их широкого спектра применения как в медицина [2], так и в биотехнологии [3]. В связи с этим, асимметрический синтез хиральных биологически активных соединений с заданной абсолютной конфигурацией атомов углеродного скелета - является одной из ведущих направлений синтеза небелковых -аминокислот. Внимание, уделяемое получению α- аминокислот в энантиомерно чистой форме, привлекает все больше внимание и занимает особое место в современной биоорганической химии. Это связано с их использованием в различных областях медицины [4], фармакологии [5], пищевой промышленности [6], в сельском хозяйстве и т.д. Цель и задачи исследования. Целью данной работы является асимметрический синтез новых энантиомернообогащенных индолсодержащих аналогов -аланина и их медико-биологических скриннинг. Достижение поставленной цели предусматривает решение следующих задач:  синтез исходых хиральных комплексов иона Ni2+ их оснований Шиффа с глицином и дегидроаланином.  исследования Михаэлю реакций нуклеофилов асимметрического к присоединения электрофильной С=С по связи дегидроаланина в хиральном Ni2+ комплексе его основания Шиффа

с (S)-BPB с образованием β-замещенных α-аминокислот (производных -аланина).  Медикобиологический аналогов -аланина скриннинг полученых ß-замещенных

1. Литературный обзор 1.1. Актуальность и прикладное значение небелковых аминокислот Аминокислоты небелкового происхождения достаточно широко распространены в природе. На сегодняшний день известно более 700 небелковых -аминокислот [7]. Под термином «небелковые» подразумевают аминокислоты, их амиды, иминокислоты, не входящие в состав белков. В сущности, к небелковым аминокислотам относятся функционально замещенные производные белковых аминокислот с различными заместителями. Небелковые амиинокислоты образуются в организме животных, микроорганизмов и растений как конечные продукты вторичного метаболизма, или как промежуточные соединения, а также как результат метаболизма или детоксикации чужеродных соединений [ 8]. Чаще всего они образуются во время повышенной потребности в азоте (образование почек при прорастании семян) или же имеют свойство запасаться в виде растворимых веществ. Также многие аминокислоты, образовавшиеся свойство при обмене антибиотиков [9]. аминокислотам-антагонистам, веществ Они низших способны т.е организмов, действовать являются имеют подобно конкурентными ингибиторами при обмене веществ, либо задерживают определенные ступени биосинтеза аминокислот, также способствуют образованию ложных последовательностей при биосинтезе белков. В свою очередь, как и обычные аминокислоты, небелковые аминокислоты выполняют ряд функций в организме человека [10]: 1) участие в переносе ацилов (карнитин) 2) медиаторная (ГАМК) 3) участие в синтезе гормонов (ДОФА, 5-гидрокситриптофан) 4) участие в синтезе креатинфосфата (креатин) 5) участие в синтезе мочевины (орнитин, цитруллин) Чаще всего встречаются азотосодержащие гетероциклы, хотя многие из них содержат кислород или серу в кольце. Ряд

азотосодержащих гетероциклических аминокислот, получаемый из триптофана, является замещенным в индольном ядре аналогами [11]. Учитывая все известные последовательности белков, триптофан является самой редкой из двадцати аминокислот, встречающихся лишь в 1% случаев [12]. Среди этих аминокислот только четыре обладают ароматическими боковыми цепями и только три из них представляют собой богатые электронами кольца. Имидазол в боковой цепи гистидина беден электронами. Фенилаланин и тирозин встречаются примерно в 4% и 3% случаев соответственно. Как и в гистидине (~2,5% встречаемости), индольная боковая цепь триптофана представляет собой азотсодержащий гетероцикл. Как тирозин, индол представляет собой донорную субъединицу водородной связи, то есть N-H, в дополнение к богатому электронами поведению гетероциклического кольца, которое может вовлекать его в различные супрамолекулярные взаимодействия. Эти особенности делают индольное кольцо триптофана редким, но очень особенным химическим каркасом для пептидов и белков [13]. Исследования последних лет показывают, что многие небелковые -аминокислоты входят противораковых, в состав гипертензивных современных и высокоактивных болеутоляющих препаратов, средств, применяемых для борьбы с алкогольной и наркотической зависимостью, и других важных фармакологических средств. Особое место среди них занимают α-метилзамещенные α-аминокислоты, которые, как специфические ингибиторы многих ферментов, способны необратимо связываться с активным центром ферментов ковалентной связью. Этот принцип применяется в биохимии и энзимологии для выяснения механизма аминокислоты действия обладают антисептической ферментов. мощной активностью, радиопротекторным действием α-замещенные антигипертензивной противоопухолевым αи и В частности, включение α-метил-L- диоксифенилаланина в состав лекарственного препарата ДОФА [ 14] позволяет исключить нежелательные побочные процессы при лечении болезни Паркинсона, α-метилтриптофан применяют при лечении стафилококковых инфекций, α-метилтирозин является ингибитором

фермента тирозингидроксилазы, обуславливающего превращение тирозина в 3,4-диоксифенилаланин - важный промежуточный продукт биосинтеза адреналина [15]. Небелковые различных лекарственных Леуциностатин применяются -аминокислоты А, препаратов. обладающий Так, также сильный противоопухолевой в синтезе антибиотик активностью, содержит три остатка (S)-α-метиламинопропионовой кислоты. O-метилL-треонин применяется активного для пептида аминозамещенные антибиотиков синтеза важного физиологически 3-О-метилтреонинокситоцина. производные аминокислот Туберактиномицина, входят -Nв Блеомицина, состав Эдеина, Капреомицина, А-19003 и т.д. (S)-Замещенные цистеины применяются для синтеза цистеинсодержащих физиологически активных пептидов [16]. Включение D-allo-изолейцина в состав антибиотика Dactinomycin D придает препарату Симпатомиметический является составной антиканцерогенную препарат частью активность [17]. N-карбоксифенилпролиллизин антигипертензивного препарата Лизиноприл. Производные L-лизина, L-оксипролина и D-фенилаланина входят в состав противораковых препаратов[ 18] Leuprolide, Octreotide, Tuftsine и т.д. Известно также, что введение в пептидную цепочку субстанции лекарственных препаратов соответствующего небелкового вместо белковой аналога α-аминокислоты повышает устойчивость лекарства к расщеплению протеолитическими ферментами, что ведет в свою очередь к пролонгированию его действия [ 19]. К числу небелковых α- аминокислот воздействующих на организм относятся β- галогеналанин, циклосерин, винилглицин и др. Одним из перспективных радикалов для ввода в небелковую αаминокислоту является индол [20]. "Привилегированная структура" данного вещества является основание для открытия новых лекарственных кандидатов [21]. Также тот факт, что индольное ядро входит в состав алкалоидов, триптофана и растительных гормонов послужил толчком к массовым поискам производных индола, породив огромное количество биологически активных природных и

синтетических широким продуктов диапазоном антагонисты с обширным терапевтических 5-гидрокситриптаминовых каннабиноидных рецепторов и спектром мишеней применения [22]: агонисты рецепторов, ингибиторы и и агонисты ГМГ-КоА-редуктазы, модуляторы биорецепторов [23]. На сегодняшний день список препаратов, содержащих субструктуры аминокислоты триптофана и индола достаточно широк. Например, эрголины представляют собой класс производных индола, которые связываются с 5-НТ1А-рецепторами [24]. Суматриптан был обнаружен среди сотни аналогов серотонина, все они были экранированы на изолированных кровеносных сосудах. Различные исследования подтвердили высокую степень селективности этого соединения для 5-HT1D рецепторов, практически не влияя на другие типы 5-HT рецепторов [25]. Соединение WIN-55,212-2 относится к классу аминоалкилиндолов и действует как мощный агонист рецепторов CB1 и CB2 с небольшим предпочтением CB2. Данный препарат сыграл важную роль в идентификации и характеристике каннабиноидных рецепторов и связанных с ними функций. В настоящее время WIN55,212-2 используется в качестве радиолиганда CB1/CB2 (Рис.1). Интересно отметить, что аминоалкилиндолы не имеют структурного отношения к каннабиноидам и были разработаны как нестероидные противовоспалительные препараты [26]. Рисунок- 1. Строение рецептора CB1/CB2.

1.2. Методы асимметрического синтеза небелковых аминокислот Асимметрическим синтезом называется процесс, в котором прохиральная молекула или ее фрагмент превращается в хиральный с неравным количеством стереоизомерных продуктов [27]. В настоящее время используется следующая классификация асимметрического синтеза (таблица 1): Таблица-1. Классификация асимметрического синтеза. Асимметрический синтез (АС) Участие вспомогательного оптически активного вещества Участие физического асимметризующего агента Катализ

Также существует Синтезы при участии других физических асимметризующих факторов Фотохимические синтезы с участием циркулярно-поляризованного света гетерогенный Гомогенный Вспомогательная оптически активный растворитель Вспомогательная оптически активная группа в реагента Вспомогательная оптически активная группа в превращаемом субстрате Диастереоселективный АС Энантиоселективный АС еще одно разделение ассимметрического синтеза (таблица2): Таблица-2. Частваня классификация асимметрического синтеза. С Асимметрический синтез (АС) Частичный Абсолютный участие оптически активного На оптически активном кварце реагента - Алифатические предельные - Алифатические непредельные - Ароматические - Алициклические Фотохимические участием синтезы с циркулярно- поляризованного света Синтезы при участии других

- Гетероциклические физических асимметрирующих факторов На данный момент абсолютный асимметрический синтез оказался неэффективным методом для получения оптически чистого продукта [28]. В настоящее время самым часто использумым способом для получения α-аминокислот является метод асимметрического катализа. Синтез является каталитическим в том случае, когда в роли хирального индуктора выступает хиральный катализатор, участвующий в процессе в каталитических количествах (молярное соотношение катализатор/субстрат 1/100-1000). Также он сочетает в себе ряд преимуществ: 1) Использование недорогого сырья; 2) Проведение реакций в концентрированных растворах; 3) Воспроизводимость; 4) Легкость разделения реакционной смеси и выделение целевого продукта; 5) Отсутствие необходимости разделения полученных рацематов аминокислот на оптические антиподы; 6) Отсутствие рацемизации ненужного энантиомера. Эффективность асимметрического синтеза оценивается энантеомерной чистотой, а также её называют оптическим выходом или энантиомерным избытком продукта [29]. С практической точки зрения на сегодняшний день наиболее перспективным является диастереоселективный асимметрический синтез. В ходе данных реакций возникают диастереомеры, которые различаются физическими свойствами. Асимметрический синтез при этом может контролироваться как термодинамическими, так и кинетическими факторами. При термодинамически контролируемом асимметрическом синтезе соотношение образующихся диастереомеров определяется различием кинетически асимметрическое в энергии контролируемом наведение конечных состояний. асимметрическом осуществляется благодаря А в синтезе разным значениям энергий переходных состояний, а значит скоростью реакций их образования [30]. Современный органический синтез насчитывает

более нескольких десятков разновидностей методов диастереоселективных асимметрических синтезов. Мы же остановимся на рассмотрении одного наиболее значимого из них. Эффективными субстратами для асимметрического синтеза аминокислот являются основания Шиффа, полученные из эфиров глицина и хиральных перспективным кетонов являестя [31]. метод Установлено, координации что наиболее аминокислотного фрагмента с ионом металла. Именно этот принцип лег в основу метода использованого Ю.Н. Белоконем и сотр., которые брали за основу комплексы NiII основания Шиффа бензилпролил)амино]бензофеноном реакциях асимметрического с с (S)- или глицином или алкилирования. (R)-2-[N-(N’аланином Синтезы в хирального производного и комплексов NiII оснований Шиффа глицина и аланина на его основе приведены на схеме 1. Схема 1. Синтез хирального реагента (S)-BPB и комплексов NiII его оснований Шиффа с аминокислотами (S) N H N (S) COOH 1) SOCl2 BnBr COOH Gly or Ala, KOH Ni(NO3)2 . 6H2O O H N N 2) NH2O (S)-BP Ni N (S)-BPB O H H (CH3) N N MeOH 500C, 2h, 90% O (S)-Pro O O 1) (S)-BPB-Gly -Ni (II) 2) (S)-BPB-(S)-Ala-Ni(II) В синтезированных комплесах NiII присутствие аминокислотного фрагмента, обладающего высокой CH-кислотностью, позволяет использовать их в реакциях асимметрического алкилирования без использования сильных оснований (таких как BuLi, LDA). Комплексы вступают в реакцию с активированными и неактивированными алкилгалогенидами при комнатной температуре. При этом в качестве оснований используются гидроксиды натрия или калия, а также гидрид натрия или карбонат калия. Необходимо подчеркнуть, экспериментального типа что (простая кроме методика ряда преимуществ алкилирования, не требующая использования сильных оснований, и инертной атмосферы), структура используемых комплексов обеспечивает высокую

стереоселективность в процессе алкилирования [ 32]. Благодаря тому, что центральный атом металла в комплексах имеет плоско-квадратную геометрию, хелатные кольца искажаются, и фенильная группа Nбензилпролинового фрагмента экранирует аминокислотный фрагмент со стороны re плоскости основания Шиффа, делая si-сторону плоскости более доступной для атаки алкилирующими агентами. И как результат обеспечивается высокая энантиоселективность >90%. Данный метод синтеза аминокислот был модифицирован несколькими учеными. Например, A.J. Blake и сотр. исследовали стереодифференцирующие строения, способности отличающихся лишь лигандов заместителями аналогичного при атоме азота пролинового фрагмента [33]. Авторы использовали заместители, которые обеспечивают дополнительную координацию с центральным ионом металла в комплексах. Также метод модифировал и А. Попков, предложив использовать комплексы NiII на основе другого реагента (S)2-[N-(2,4,6-триметилбензил)пролиламино]бензофенона [34]. Из приведенной выше информации можно выделить, что метод, основанный на применении комплексов Ni II хиральных шиффовых оснований аминокислот с хиральными реагентами, в частности (S)BPB, которые используются для синтеза наиболее широкого набора энантиомерно преимущество обогащенных в связи с аминокислот, простотой имеет исполнения и огромное доступность реагентов, а также не требует экстремальных температурных режимов. 1.3. Биомиметический синтез аминокислот Общеизвестно, что одной из нерешенных задач на сегодняшний день является прохирального осуществление предшественника асимметрического точно также, как синтеза это из делают ферменты на биологическом уровне, т.е. разработка биомиметического подхода. В настоящее время известно достаточно много хиральных индукторов, которые диастереотопно взаимодействуют с реагирующей молекулой и приводят к образованию асимметричного продукта [35].

В научной литературе представлены методы, использованные учеными для биомиметического подхода при синтезе аминокислот. Например, Иван интерпритацию Деведжев процеса и сотр. переноса предложили следующую карбоксильной группы в гидроксильную, которая в природе происходит на 3-углеродном атоме в рибозном цикле тРНК [36]. В лаборатории данную систему воспроизвели при помощи фосфорсодержащего соединение 2- гидроксипропилфосфоната, в котором заместители по фосфорильной части и особенно наличие вицинальной гидроксильной группы такие же, как и в 3-положении рибоза и в качестве фосфорилирующиго реагента были использованы 2-гидроксиэфиры оксофосфорных кислот [37]. Также, в 1980 году группой японских ученых во главе с Sell1 Shinkai был разработан метод по замене биологической модельной реакции НАДН-зависимых ферментов, основанный на использовании неферментативно модельных соединений НАДН, которые используется для восстановления двойных связей. Что касается двойной связи C=N, то восстановление было достигнуто частично, в присутствии Mg 2+ ион или основания Шиффа [38]. Помимо этого, в основе метода биомимитрического синтеза лежит ацилазный гидролизует процесс. В этом процессе N-ацетил-L-аминокислоту до фермент избирательно соответствующей L- аминокислоты, не касаясь D-субстрата. Рацемические N-ацетилированные аминокислотные субстраты довольно легко доступны через ацетилирование D, L-аминокислот с ацетилхлорид или ангидрид уксусной кислоты в щелочи в реакции Шоттена–Баумана или через амидокарбонилирование. В природе же асимметрический синтез аминокислот осуществляют пиридоксальфосфат (ПФ) зависимые ферменты, которые во многом ответственны за метаболические превращения аминокислот в организме [39]. Принцип их действия в общих чертах известен и состоит в превращении аминокислоты в СН-кислоту при образовании ею основания Шиффа с ПФ-ом. Полученный карбанион претерпевает многочисленные асимметрические превращения, одним из которых

является конденсация с электрофилами, ведущая или к дейтерообмену, или к образованию новых С-С связей, если в качестве электрофила использовать альдегид. Этот принцип давно реализуется в химии для синтеза более сложных аминокислот из их простейших предшественников. В природе ПФ-ферменты катализируют разрыв различных связей в молекуле аминокислоты и специфика каждого фермента определяет, какая именно связь аминокислоты разрывается или замещается [ 40]. К числу этих реакции относятся отрыв -Н аминокислоты с последующим С-алкилированием, последующим β-окси--аминокислот ,β-элиминирование присоединением к активной С=С с связи дегидроаминокислот и т.д. [41]. Многие реакции синтеза -аминокислот в организме катализуются пиридоксалевыми ферментами ,- и ,элиминирования и замещения. Механизм действия этих систем на примере синтеза -аминокислот с заместителями в -положении на основании представлений физической органической химиии и некоторых модельных исследований представлен на схеме 2. Ключевой стадией этого синтеза является образование оснований Шиффа глицина с пиридоксалем на активном центре фермента, что приводит к стабилизации увеличению системы за СН-кислотности счет образования водородных связей. Конденсацией остатков глицина образуется глицинового шиффовое остатка и внутримолекулярных альдегидов к фрагменту основания -окси--аминокислот, которые через промежуточное О-ацетилирование и ,-элиминирование остатка уксусной кислоты превращаются в Шиффовые основание дегидроаминокислот (дегидроаланина и дегидроаминомасляной кислоты). На следующем этапе происходит присоединение различных остатков к электрофильной С=С связи дегидроаминокислотного фрагмента с образованием шиффовых оснований -аминокислот, содержащих заместители в β-положении , гидролиз которых дает оптически активную аминокислоту и пиридоксалевый фермент. По этой схеме в организме синтезируются триптофан, цистеин, цистатион, треонин, тирозин и т.д. При этом хиральное окружение

активного центра фермента апоферментом обеспечивает 100% асимметрический синтез аминокислот L-абсолютной конфигурации [42]. Через образование оснований Шиффа между аминокислотой, содержащей электроотрицательный заместитель в -положении, и пиридоксалем на активном центре ферментов происходит ,- элиминирование и замещение, при котором происходит отрыв водорода и выброс электроотрицательной частицы. Образующая система основания Шиффа ,-дегидроаминокислоты принимает протон в -положении и превращается в систему оснований Шиффа ,дегидроаминокислоты, которая, в свою очередь, претерпевает обычные превращения, описываемые схемой 2. Предполагается, возникающая в что полоса поглощения субстрат-ферментном комплексе при 450-470 нм, -элиминирующих ферментов, связана с хромофорной системой шиффовых оснований ,дегидроаминокислот. Схема 2

Согласно общепринятой точке зрения, отрыв  и  протонов происходит под действием основных групп, находящихся в активном центре ферментов. Наиболее вероятными кандидатами на эту роль являются -аминогруппа лизинового фрагмента или имидазольная группа гистидинового остатка [43]. Исследованием ПФ-фермента занимались такие ученые как: Браунштейн А. Е., Шемякин М. М., Метцлер и Снелл [44]. После многолетних осуществления исследований они асимметрического пришли к выводу, биомиметического что синтеза для β- замещенных α-аминокислот необходимо создать простые модельные

системы пиридоксалевых ферментов, обладающих следующими свойствами:  химическая стабильность и стереохимическая инертность в реакциях аминокислотных превращений [45];  высокая СН-кислотность дегидроаминокислотных осуществления аминокислотных фрагментов, реакции и электрофильность что С-алкилирования необходимо и для присоединения нуклеофилов;  наличие высоких энантиоселективных эффектов, что необходимо для обеспечения стереоселективного протекания реакции [46,47]. Оригинальными в области асимметрического биомиметического синтеза β-замещенных (S)- и (R)- -аминокислот являются работы Сагияна А.С. и сотрудников, основанные на использовании в качестве электрофильного дегидроаминокислотного синтона плоско-квадратных комплексов иона Ni2+ оснований Шиффа дегидроаланина с хиральным амидом (S)-пролина или (R)-пролина [48]. Эти нейтральные комплексы достаточно стабильны и обладают высокой электрофильностью двойной С=С связи дегидроаминокислотного фрагмента. Наличие высоких энантиоселективных высокую эффектов стереоселективность в при этих комплексах обеспечивают нуклеофильном присоединении дегидроаминокислотного остатка (см. схему 3). По этой схеме были осуществлены асимметрические реакции присоединения аминов, тиолов и алкоголят ионов к электрофильной двойной С=С образованием связи дегидроаминокислотных s-замещенных цистеинов, комплексов с β-N-аминозамещенных аланинов, β-замещенных производных аминомасляной кислоты и т.д. При этом, хиральные реагенты на основе (S)-пролина индуцируют асимметрический синтез аминокислот (S)-абсолютной конфигурации, а хиральные реагенты на основе (R)-пролина индуцируют асимметрический синтез аминокислот (R)-абсолютной конфигурации. Стереоселективность синтеза составляет в среднем 90%, что является следствием терминодинамической стабильности диастереоизомеров, содержащих (S)-аминокислоту в случае использования хирального реагента на основе (S)-пролина и диастереоизомеров, содержащих (R)-

аминокислоту в случае использования комплексов на основе хирального карбонильного производного (R)-пролина. После синтеза выделяют оптически активные аминокислоты и исходные хиральные реагенты [49]. сохранением При этом исходной последние хиральности регенерируются и их можно с полным использовать многократно в асимметрических реакциях превращения аминокислот. Схема 3 O N O O Ni N N N O O Ni N O CH2 NuH N N O Ni N Nu i N O Nu HOOC ii iii H2N H O 14  2MHCl,500C (i); Dowex50(ii); crystallization C2H5OH:H2O 1:1(iii) На основе проведенного обзора научной литературы нами было решено, что за основу асимметрического синтеза гетероциклически замещенных производных (S)аланина будет взят метод ассиметрического синтеза, основанный на использовании Ni(II) комплекса основания Шиффа дегидроаланина с (S)-2-N-(N'бензилпролил)аминобензофенономхиральном вспомогательном [50]. 1.4. Скрининг целевых амминокислот на антибактериальную активность Эволюция и распространение антибиотикорезистентности стали одной из главных угроз для общественного здравоохранения во всем мире, а распространение грамотрицательных бактерий с множественной лекарственной главных проблем современности Stenotrophomonas нозокомиальным устойчивостью из . 51 maltophilia патогеном, (МЛУ)-одной является ответственным условно–патогенным за возникновение различных инфекций, с высокой заболеваемостью и смертностью, особенно у пациентов с сопутствующими патологиями, особенно такими как муковисцидоз и иммунодифичитного состояния. Одной из главных характеристик этой бактерии является её низкая восприимчивость к широкому спектру антибиотиков, что влечет за собой трудности в лечении вызываемыми инфекциями . 52

Среди факторов, определяющих низкую восприимчивость S. maltophilia к антибиотикам, можно выделить низкую проницаемость ее мембраны, наличие в её геноме большое количество встроенных генов, которые кодируют модифицирующих SmQnr и устойчивость ферментов, эффлюксные хинолонов насосы, к антибиотикам- белка резистентности наибольшую значимость имеет принадлежность к семейству резистентно-нодуляционого-деления (RND) . Также в своем геноме она имеет две внутренних бета- 53 лактамазы, получившие название L19 и L210, но они не активны в отношении цефтазидима экспрессируются в maltophilia16–18. Кроме сверхэкспрессирующие на том нескольких этого, уровне, на котором клинических было бета-лактамазы изолятах доказано, L1 и они S. что мутанты, и обладают L2 пониженной восприимчивостью к цефтазидиму. Также, недавние работы ученых показали, сверхэкспрессирующие что S. maltophilia бета-лактамазо- цефтазидим-резистентные мутанты, лишенные функционального Mpl, часто отбираются в клиниках В настоящее время для лечения инфекций S. . 54 maltohilia используется лишь несколько терапевтических комбинаций. Исходя из всего вышеперечисленного именно поиск ингибиторов данного микроорганизма является одной из актуальных проблем в медицине и фармации.

2. Постановка задачи и выбор объектов исследования Анализ литературных данных показывает, что лучшим объектом для асимметрического синтеза β-замещенных α-аминокислот является плоско-квадратный комплекс иона NiII основания Шиффа дегидроаланина с хиральным карбонильным соединением (S)-2-N-(N'бензилпролил)аминобензофеноном ((S)-BPB). Комплекс дегидроаланина обладает активной электрофильной двойной C=C связью и легко подвергается комплексов, нуклеофильному с содержанием присоединению β-замещенных с образованием α-аминокислотных фрагментов, при этом происходит высокоселективная конденсация по Михаэлю с комплексов разложения образованием α-аминокислот преимущественно (S)-абсолютной диастереоизомерно чистых диастереоизомерных конфигурации. комплексов После выделяют оптически чистые α-аминокислоты, а исходный хиральный реагент (S)BPB при этом хиральности, Преимуществом регенерируется что позволяет данной с полным его сохранением использовать технологии является исходной многократно. также ее универсальность; она позволяет по одной технологической схеме с использованием одного и того же хирального реагента из самых простых и доступных белковых α-аминокислот получить дорогие и важные небелковые α-аминокислоты самого разного строения. Следует отметить, что нуклеофильные присоединения дегидроаланина в указанном комплексе в основном протекает с количественными химическими выходами (≥90%). В работе для достижения поставленной цели предполагается провести следующие исследования: 1. Синтез и выделение из реакционной смеси NiII комплексов основания Шиффа дегидроаланина с хиральным реагентоми (S)BPB (NiII [(S)-BPB-Δ-Ala]). 2. Подобрать оптимальные условия для асимметрической реакции присоединения по Михаэлю гетероциклических производных индола к активной С=С связи дегидроаланина в хиральном комплексе NiII [(S)-BPB-Δ-Ala].

3. Выделить целевые аминокислоты 4. Исследовать и установить структуру и абсолютную конфигурацию синтезированных небелковых α-аминокислот и их промежуточных комплексов современными спектрального анализа. 5. Осуществить скриннинг полученных аминокислот методами

3. Обсуждение результатов 3.1. Синтез исходных аминокислотных и дегидроаминокислотных синтонов Синтез хирального NiII комплекса оснований 3.1.1. Шиффа глицина с и (S)-2-N-(N'бензилпролил)аминобензофеноном Хиральный комплекс иона NiII с основанием Шиффа глицина и хирального карбонильного соединения бензилпролил)аминобензофенона синтезирован согласно взаимодействием NiII[(S)-BPB-Gly] ранее глицина, (1)) разработанной Ni(NO3)2·6H2O бензилпролил)аминобензофенона (S)-2-N-(N'- ((S)-BPB), в был методике, и (S)-2-N-(N'- среде метанола в присутствии KOH (см. схему 4). Схема 4 + Ni2+ + O N NH Ph O COOH CH2 1) KOH 2) MeOH N NH2 N O (S)-BPB O O Ni H N Ph [(S)-BPB-Gly]Ni(II) (1) Физико-химические параметры синтезированого комплекса (Rf на пластинках ТСХ, измерения) H Н-ЯМР, элементный анализ, поляриметрические 1 однозначно соответствуют литературным данным. Синтезированный комплекс NiII[(S)-BPB-Gly] (1) и был использован для синтеза комплекса дегидроаланина. Выход комплекса NiII[(S)BPB-Gly] составил 89%.

3.1.2. Синтез Ni(II) комплексов оснований Шиффа дегидроаланина с (S)-2-N-(N'бензиплролил)аминобензофенонами Комплекс оснований Шиффа дегидроаминокислот можно получить дегидратацией комплексов β-окси-α-аминокислот. Однако, учитывая то обстоятельство, что ОН-группа β-окси-α-аминокислот является трудно уходящей группой и ее отщепление сопровождается ретроальдольным распадом (разрыв связи С-С), в реакциях дегидратации β-окси-α-аминокислот обычно гидроксильную группу замещают легко уходящей группой. Так, через промежуточное Оацетилирование остатков серина и треонина в хиральных комплексах иона NiII и α,β-элиминирование уксусной кислоты из полученных комплексов О-ацетилсерина и О-ацетилтреонина были синтезированы хиральные комплексы дегидроаланина и дегидроаминомасляной кислоты. При этом на примере комплексов иона NiII с основанием Шиффа (S)- и (R)-О-ацетилсеринов бензилпролил)аминобензофенона элиминирование с и было количественными (S)-2-N-(N'- показано, химическими что выходами происходит в случае (R)-абсолютной конфигурации аминокислотного остатка. Хиральный комплекс NiII с основанием Шиффа (R)-серина и (S)-2N-(N'-бензилпролил)аминобензофенона ранее был получен как прямой реакцией комплексообразования (R,S)-серина (по аналогии синтеза комплекса NiII [(S)-BPB-Gly], так формальдегида к остатку глицина комплекса и конденсацией NiII[(S)-BPB-Gly] в присутствии сильного основания (CH3ONa или KOH в CH3OH), так как это было показано ранее, в присутствии сильного основания индуцируется асимметрическое образование комплексов (R)-β-окси-αаминокислот (см. схему 5). Реакция проводилась при соотношении NiII[(S)-BPB-Gly] / СН2О / 1,5N CH3ONa ≈ 5/1/4,5 Полученный комплекс кристаллизовали из метанола. Выход комплекса NiII [(S)-BPB-(R)-Ser] составил 93,3%. Схема 5

O O N N + N Ni CH3ONa (CH2O)n Ph O [(S)-BPB-Gly]Ni(II) ( 1 ) O O N N CH2OH N + H N Ni N Ph O O O CH2OH N Ni H Ph O [(S)-BPB-(S)-Ser]Ni(II) ( 2 ) [(S)-BPB-(R)-Ser]Ni(II) ( 2 ) (~8%) (~92%) Дегидратация полученного диастереоизомерно чистого комплекса (R)-серина (2) через промежуточное О-ацетилирование остатка серина и α,β-элиминирование уксусной кислотой из фрагмента (R)-Оацетилсерина действием количественно уксусного ацетилирование происходит ангидрида осуществляют и при в среде Na2CO3. СН 3СN При комнатной под этом О- температуре, а деацетилирование – при 70ºC (см. схему 6). Схема 6 O O N N N Ni CH2OH 1) Ac2O 2) Na2CO3 H 3) CH3CN T=25oC, T=70oC O N N Ph O O Ni N O CH2 Ph Ni(II) [(S)-BPB--Ala] ( 3 ) Ni(II)[(S)-BPB-(R)-Ser] ( 2) В процессе дегидратации серина каких-либо побочных продуктов не образуется. растворяют в После CHCl3, удаления промывают концентрируют и сушат под вакуумом. Na2CO3 водой реакционную до нейтральной смесь рН,

Выход комплекса NiII [(S)-BPB-Δ-Ala] на стадии дегидратации превышает 98,5%. 3.2. Асимметрические реакции присоединения по Михаэлю гетероциклических производных индола к активной С=С связи дегидроаланина в хиральном комплексе NiII [(S)BPB-Δ-Ala]. В качестве индольных производных были использованы 2-метил- и 3-метил-1H-индол. Реакцию проводили в атмосфере аргона для исключения процесса окисления. За ходом реакции нуклеофильного присоединения следили методом ТСХ на SiO2 в системе растворителей CHCl3–CН3СOСH3 (3:1). Схема 7 O O N N Ni CH2 N O N H Ph O O R N N Ni H R N N N N Ni H R N N Ph O (4) Ni(II) [(S)-BPB--Ala] ( 3 ) + Ph O O O (5) (S,S)/(S,R) =95/5 R =2-CH3 (a); 3-CH3(b) В начале присоединения образуется смесь двух диастереоизомер комплексов примерно в соотношении de70:30 (S.S)/ (S.R) в пользу более подвижного на силикагеле диастереоизомера (по данным 1 Н-ЯМР и ТСХ). Затем постепенно по ходу реакции присоединения вследствие установления термодинамического диастереоизомерами равновесия увеличивается количество между этого диастереоизомера (таблица 3). Таблица 3. Оптимальные параметры для нукдлеофильного замещения 2-метил индолом. № Основание 1 2 3 K2CO3 K2CO3 K2CO3 Комплекс/ Т, ℃ Основание / 2метил индол (моль экв.) 1:2:1.5 55-60 1:5:3 55-60 1:10:3 55-60 Время (час) 24 48 48 Выход (%) По образованному продукту 0 0 0

4 5 6 7 8 9 10 11 K2CO3 1:20:3 Na2CO3 1:2:1.5 Na2CO3 1:5:3 Et3N 1:1:3 NaOH 1:0.4:3 Cs2CO3 1:0.1:3 КОН 1:0.5:2 КОН 1:1.5:2 Для подборки оптимальных 55-60 55-60 55-60 55-60 55-60 55-60 55-60 20-25 условий 48 24 24 24 4 4 4 48 данной 0 0 0 0 50 35 40 55 реакции были тестированы различные растворители (ДМФ, ТГФ, ДМСО, CH3CN), разное соотношение рагентов, а также основания. Исходя из таблицы, оптимальными условиями для проеведения реакции присоединения 2метил-1H-индол к С=С связи дегидроаланина в хиральном комплексе NiII [(S)-BPB-Δ-Ala] является: CH3CN, KOH в соотношении комплекс/Основание / 2-метил индол 1:5:2. В случае использования 3-метил-1H-индола, пришлось также разработать отдельно оптимальные условия. И это температура 55-60 ℃, растворитель CH3CN, и K2CO3 в соотношение комплекс/Основание / 2-метил индол 1:3:15. Разложение диастереоизомерных комплексов продуктов присоединения индолов и выделение целевых аминокислот С целью выделения целевых аминокислот, основные диастереомерные комплексы были разложены обработкой 6N HCl при температуре 45-50˚С (см. схему 8). После исчезновения характерного для этих комплексов красного цвета, что свидетельствует о полном разложении комплексов, из реакционной смеси выделяют исходный хиральный реагент (S)-2-N(N'-бензилпролил)аминобензофенон ((S)-BPB) осаждением из водных растворов (после удаления органического растворителя вакуумным выпариванием). При этом (S)-BPB регенерируется с количественным химическим выходом (94-97%) и полным сохранением исходной оптической чистоты. Целевые аминокислоты очищают от минеральных солей ионообменным методом и кристаллизацией из водно-спиртовых растворов.

Схема 8 O O N N Ni H R O N N Ph O R H HO N (S) (S)-BPB*HCl NH2 (6) (4) i. 6N HCl/CH3OH/50OC ii. Ky-2*8-H+/ 5%NH4OH iii. C2H5OH / H2O R =2-CH3 (a); 3-CH3(b) ee >99% 3.3 Биологический скрининг 2-амино-3-(2-метил-1Н-индол-1-ил)пропановой кислоты и 2-амино-3-(3-метил-1Н-индол-1-ил)пропановой кислоты Stenotrophomonas maltophilia 9286 Таблица 4. - Биологический скринин синтезированных небелковых амминокислот P. aeruginosa 5249 P. aeruginosa 9056 P. Fluorescens 9150. Антибиотики Контроль Азитромицин Аугментин 2-амино-3-(3метил-1Н-инд-1ол) пропановая кислота концентрации 20ммоль/л + + + 2-амино-3-(2-метил1Н-инд-1-ол) пропановая кислота концентрации 20ммоль/л +/+/+/- Хлорамфенико + л Амоксицилин + +/- Азитромицин + +/- Ципрофлоксац + ин Роцефинил + +/- Стрептомицин Цефиксим Канамицин Контроль чувствительный чувствительный чувствительный + чувствительный чувствительный чувствительный +/- Контроль - - Контроль - - +/- +/-

В ходе проведенного эксперемента было выявлено, что небелковая амминокислота 6b подавляет рост Stenotrophomonas maltophilia 9286, в то время как антибиотики (азитромиццин, аугментин, хлорамфеникол, амоксицилин, проявляют азитромицин, ингибирующей ципрофлоксацин, активности по роцефинил) отношению к не данному организму. В свою очередь небелковая амминокислота 6b не проявляет ингибирующей микроорганизмам: активности P. по Aeruginosa отношению 5249, P. к следующим Aeruginosa 9056, P. Fluorescens 9150. Небелковая амминокислота 6а на проявиляет слабую биологическую активность. исследуемых обьектах

4. Экспериментальная часть 4.1. Приборы, материалы и реагенты Во время проведения данной работы использовали следующие материалы: аминокислоты («Reanal», Будапешт), силикагель (Merck 60 (0.063-0.200 мм, 70-230) ионообменную смолу Ку-2х8, пластинки («Chemapol», Прага), CH3CN, диметилформамид (ДМФА), K2CO3, KOH, NaOH, Na2CO3, CH3COONa, Ni(NO3)2·6H2O, (CН2O)n, HCl, CH3COOН, CH3CНO, (CH3CО)2O, CH3OН, С2Н5ОН, (CH3)2СНОН, CH3COCH3, CHCl3, C7Н16, CH2Cl2,. Нуклеофильные реагенты –2- и 3-метил индол ( Sigma-Aldrich) ДМФА перед использованием очищали согласно [ 55] и [56] соответственно. Метанол очищали и абсолютировали по методике [57]. Раствор CH3COONa готовили добавлением металлического натрия в CH3OН под аргоном при охлаждении. Н-ЯМР спектры снимали на приборе «Merkury-300 Varian NMR 1 (300 MHz)». Температуры плавления были измерены на приборе фирмы «Elektrothermal». Энантиомерная чистота синтезированных аминокислот была определена в методом хиральной жидкостной хроматографии высокого разрешения. 4.2 Cинтез исходных соединений Хиральный комплекс иона NiII с основанием Шиффа глицина и хирального карбонильного соединения (S)-2-N-(N'- бензилпролил)аминобензофенона NiII [(S)-BPB-Gly] (1) синтезировали согласно ранее разработанной методике [ 58]. Для этого 192 г (0,5 моля) (S)-BPB растворяли в 1750 мл СН 3ОН, добавляли 290,7 г (1 моль) Ni(NO3)2·6H2O и 187,5 г (2,5 моля) глицина и при перемешивании при

температуре 40-50˚С добавляли раствор 224 г (4 моля) КОН в 750 мл СН3О.Реакционную смесь перемешивали в течение 2-3 ч при температуре 40-50˚С. За ходом реакции комплексообразования следили методом ТСХ на пластинке «Silufol» в системе растворителей СНСl3– CH3COCH3 (3:1). После завершения реакции реакционную смесь нейтрализовали уксусной кислотой до pH=5-7 и при перемешивании смесь медленно добавляли в 5-7 л воды. Смесь оставляли на 5-6 ч, воду декантировали и фильтровали продукт. После сушки кристаллов получали 221,48 г (0,445 моля) NiII [(S)-BPB-Gly] (1), что соответствует 89% выходу на стадии в расчете на исходное количество (S)-BPB. Физико-химические параметры синтезированного комплекса 1 (Rf на пластинках ТСХ, 1Н-ЯМР, элементный анализ, поляриметрические измерения) однозначно соответствуют литературным данным и подтверждают ожидаемую структуру комплекса глицина. Хиральный комплекс иона NiII с основанием Шиффа (R)-серина и (S)-2-N-(N'-бензилпролил)аминобензофенона NiII [(S)-BPB-(R)-Ser] (2) синтезировали согласно методике. Для этого150г (0,3 моля) комплекса NiII [(S)-BPB-Gly] (1) растворяли в 320 мл метанола и при комнатной температуре при постоянном перемешивании в токе аргона добавляли 31г параформа и 147мл 4,7N CH3ОNa. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3ч. За ходом реакции следили CH3COCH3 (3:1). методом После ТСХ в системе завершения растворителей реакции СНСl3– реакционную смесь нейтрализовали уксусной кислотой до нейтральной pH и оставляли на 1ч (при комнатной диастереоизомерно температуре). чистого комплекса Выпавшие (R)-серина кристаллы фильтровали стеклянным фильтром, промывали 30мл дистилированной воды и сушили в сушилке под вакуумом при 50˚С. Было получено 148г (0,28 моля) хроматографически чистого комплекса NiII [(S)-BPB-(R)-Ser] (2), что соответствует 93,3% выходу на стадии в расчете на исходное количество NiII [(S)-BPB-Gly] (1). Структуру комплекса элементным 2 и абсолютную исследовали анализом, конфигурацию спектральными поляриметрическими синтезированного методами: измерениями. 1 Н-ЯМР, Данные

однозначно соответствуют литературным и подтверждают ожидаемую структуру комплекса глицина. Хиральный комплекс иона NiII с основанием Шиффа дегидроаланина и (S)-2-N-(N'-бензилпролил)аминобензофеноном NiII[(S)BPB-Δ-Ala] (3) синтезировали согласно методике [ 59,60]. Для этого 147 г (0,28 моля) комплекса NiII[(S)-BPB-(R)-Ser] (2) растворяли в 930 мл ацетонитрила и при перемешивании при комнатной температур обавляли 64 г (0,613 моля) безводной Na2CO3 и 224 мл (2,46 моля) перегнанного (CH3CO)2O. Реакционную смесь ~ 2 ч перемешивали при комнатной температуре, а затем температуру подняли до 70ºС и продолжали перемешивать еще 1 ч. За ходом реакции следили методом ТСХ в системе растворителей СНСl3–CH3COCH3 (2:1). После завершения реакции реакционную смесь фильтровали, осадок соды промывали 50 мл СНСl3. Хлороформный раствор промывают вначале 100 мл дистилированной воды, а затем 150 мл 0,1 М раствора Na2CO3 (3 раза по 50 мл). Затем раствор упаривают досуха под вакуумом и сушат в вакуумной сушилке при температуре 50ºС. Было получено 140,7 г (0,276 моля) комплекса NiII [(S)-BPB-Δ-Ala] (3), что соответствует 98,5% выходу на стадии в расчете на исходное количество NiII [(S)-BPB-(R)-Ser] (2). Данные 1 Н-ЯМР, элементного анализа, поляриметрических измерений синтезированного комплекса 3 однозначно совпадают с данными представленными в [61]. 4.3. Асимметрический синтез ß-замещенных аналогов аланина 4.3.1. Асимметрическое нуклеофильное присоединение 3- метилиндла к двойной С=С связи комплекса [(S)-BPB-ΔAla]Ni(II) 5 г (0,0098 моль) комплекса 3 растворяли в 25 мл СH3CN и в токе аргона добавляли метилиндола – 27,2 3,85 г. г (0,197 моль) Реакционную К2СО3 смесь и 0,03 моль перемешивали 3- при

температуре 50-60ºС в течение 3 ч. За ходом реакции присоединения следили методом ТСХ на пластинках SiO2 в системе растворителей СНСl3– CН3СOСH3 (3:1) [62]. После установления термодинамического равновесия между диастереоизомерами реакционную смесь хлороформом и Небольшую хлороформный часть минимальном фильтровали, реакционной количестве 4b , осадок смеси г) 3 ч) промывали упаривали (~1 СНСl3– через К2CO3 фильтрат смеси (~ досуха. растворяли CН3СOСH3 в (3:1) и хроматографировали на колонке с SiO2 (3х20 см), используя в качестве элюента диастереоизомеры с СНСl3– CН3СOСH3 большим значением (3:1). Rf Основные на (4b) SiO2 охарактеризовали спектральными методами анализа. Химический выход составил комплексов 70,8% 95/5. и соотношение Основная часть диастереоизомерных реакционных смесей была использована для получения целевых аминокислот 5b.. 4.3.2. Асимметрическое нуклеофильное присоединение 2- метилиндла к двойной С=С связи комплекса [(S)-BPB-ΔAla]Ni(II) 2 г (0,00377 моль) комплекса 3 растворяли в 15 мл СH3CN и в токе аргона добавляли 0.1 г (0,0018 моль) КОH и 0,0008 моль 3метилиндола – 1.03 г. Реакционную смесь перемешивали при температуре 20ºС в течение 3 ч. За ходом реакции присоединения следили методом ТСХ на пластинках SiO2 в системе растворителей СНСl3– CН3СOСH3 (3:1) [63]. После установления термодинамического равновесия между диастереоизомерами реакционную смесь хлороформом и Небольшую хлороформный часть минимальном фильтровали, реакционной количестве смеси 4a , осадок г) 24 ч) промывали упаривали (~1 СНСl3– через КOH фильтрат смеси (~ досуха. растворяли CН3СOСH3 (3:1) в и хроматографировали на колонке с SiO2 (3х20 см), используя в качестве элюента диастереоизомеры с СНСl3– CН3СOСH3 большим значением (3:1). Rf на Основные SiO2 (4a)

охарактеризовали спектральными методами анализа. Химический выход составил комплексов 95/5. 60,5% и Основная соотношение часть диастереоизомерных реакционных смесей была использована для получения целевых аминокислот 6a. Спектральные данные синтезированных комплексов 4a и 4b (Приложение 1,2): Комплекс 4а: Выход 60,5%, Тплав 190-195℃, [α]D20 = +1950,00(С=0.15, СН3ОН). Спектр 1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д., 300 мГц): 1.95-2.09 (2Н, γ, δ-Hа, Рro); 2.36 (3H, br, CH3); 2.43-2.52 (2H, m, β-CH2 Pro); 3.10-3.31 (2Н, m, γ, δ-Hβ, Рro); 3.41 (1Н, dd, J=9.6,7.4,α-H-Pro); 3.49 (1Н, d, J=12.6,CH2Ph); 4.35 (1Н, d, J=12.6,CH2Ph); 4.43 (1Н, dd, J=7.8,3.5,CH2CH); 4.50 (1Н, dd, J=14.9,3.5, CH2CH); 5.09 (1Н, dd, J=14.9,7.8, CH2CH); 5.94 (1H, br, d, J=7.6); 6.22 (1H, br, CH=CH3); 6.51 (1Н, dd, J=8.2,1.7, Ar); 6.61 (1Н, ddd, J=8.2,6.9, 1.2, Ar); 6.86 (1Н, ddd, J=8.1,7.2, 1.2, Ar); 6.98 (1Н, ddd, J=7.7,7.2, 1.0, Ar); 7.04-7.18 (4H, m, Ar); 7.73-7.34 (2H, m, Ar); 7.37-7.45 (2H, m, Ar); 8.01-8.06 (2H, m, Ar); 8.31 (1H, dd, J=8.7, 1.1, Ar). C Спектр 1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д., 75.46 мГц): 13 12.9 (CH3); 24.0 (γ-CH2 Pro); 30.8 (β-CH2 Pro); 48.9 Pro); 63.4 (CH2 Ph); 70.7 (CH2); 57.3 (δ-CH2 (α-CH Pro); 71.2 (CH); 101.8; 109.4; 119.6; 120.2; 120.7; 121.3; 123.5; 125.8; 127.0; 127.6; 128.5; 128.9; 129.0; 129.0 (2CH); 129.4; 131.5 (2CH); 132.9; 133.1; 133.4; 134.0; 136.9; 137.9; 143.0; 172.3; 176.6; 180.1. Комплекс 4b: Выход 70,8%, Тплав 235-240℃, [α]D20=+1756,70 (С=0.15, СН3ОН). Спектр 1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д., 300 мГц): 1.36-1.48 (1Н, m, H-Pro); 1.70-1.98 (3Н, m, H-Pro); 2.04-2.17 (1Н, m, H-Pro); 2.35(3Н, s, CH3); 2.77-2.85 (1Н, m, H-Pro); 3.17 (1Н, dd, J=9.8,7.5,α-H-Pro); 3.40 (1Н, d, J=12.5,CH2Ph); 4.13 (1Н, dd, J=15.0,3.0,NCH2CH); 4.18 (1Н, d, J=12.5, CH2Ph); 4.32 (1Н, dd, J=3.8,3.0, CH); 4.57 (1Н, dd, J=15.0,3.8,NCH2CH); 6.65-6.71 (2Н, m, C6H4); 6.84 (1Н, br, =CH); 6.90 (1Н, br,d J=8.0, C6H5); 7.04-7.21 (5Н, m,Ar); 7.27-7.33 (2Н, m, Ar); 7.38 (1Н, td, J=7.5,1.3, C6H4); 7.48-7.62 (3Н, m, Ar); 7.94-7.99 (2Н, m, H-2.2-Ph); 8.32(1Н, d, J=8.7, H-6 C6H4). C Спектр 1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д., 75.46 13

мГц): 9.8 (CH3); 22.8 (γ-CH2 Pro); 30. (β-CH2 Pro); 50.0 (CH2); 57.3 (δ-CH2 Pro); 63.5 (CH2 Ph); 70.6 (α-CH Pro); 71.7 (NCH); 110.1 (CH); 112.0 ; 119.0 (CH); 119.7 (CH); 120.6 (CH); 122.5 (CH); 123.7 (CH); 125.8; 127.3 (2CH); 127.7 (CH); 128.8 (2CH); 128.9 (CH); 129.2 (CH); 129.4 (CH); 129.5 (CH); 130.0; 131.6 (2CH); 132.9 (CH); 133.3; 133.7 (CH); 134.1; 137.9; 143.6; 171.1; 177.4; 180.2. 4.4. Разложение полученных комплексов и выделение целевых аминокислот Разложение диастереоизомерных смесей продуктов присоединения к комплексу [(S)-BPB-Δ-Ala]Ni(II) и выделение целевых оптически активных гетероциклически замещенных -аланина проводили действием 6N HCl по ранее разработанной методике [ 64,65]. Смесь диастереоизомерных комплексов в количестве 2 г (0,003 моль) растворяли в 80 мл CH3OH и при перемешивании добавляли 20 мл раствора 6N HCl. После исчезновения характерной для комплекса окраски реакционную смесь упаривали досуха, добавляли 50 мл Н 2О и фильтровали исходный хиральный реагент (S)-BPB. Из водного фильтрата выделяли целевую аминокислоту ионообменным методом, с использованием Аминокислоту катионообменной элюировали со смолы смолы Ку-2х8 5% в Н+ раствором форме. NH4OH, концентрировали под вакуумом и кристаллизовали из раствора этанолвода (1:1). Энантиомерный анализ аминокислоты 6а и 6b проводили методом хирального ВЭЖХ анализа на приборе «Waters separations module 2695», на колонке «Diaspher-110-Chirasel-E» (6,0 мкм, 4,0×250 мм) с подвижной фазой метанол/0.1М NaH2PO4×2H2O в соотношении 20/80. Скорость потока подвижной фазы 0,5 мл/мин. В качестве детектора использовали УФ-детектор при длине волны 200 нм. Аминокислоту анализировали в виде водного раствора при температуре колонок 30oС

(Приложение 1-2). Элементный анализ проводили на элементном CNSO анализаторе «Euro EA 3000». Спектральные данные синтезированных комплексов 6a и 6b (Приложение 3,4): Комплекс 6а: Выход 10.5%, Тплав 250℃, [α]D20=+2.90 (С=0.005, 6N HCl) .Найдено, %: C12H14N2O2 (218,25) C 69.27; H 6.41; N 12.82Спектр 1Н-ЯМР (DMS-D6+TFA, , м.д., 300 мГц): 2.41 (3H, s,CH3); 4.18 (1H, t, J=6.6, CH); 4.57 (2H, d, CH2, J=6.7); 6.91-7.01 (2m, 1H);7.017.11 (1H, m); 7.39 (2H, d, J=8.5); C Спектр 1Н-ЯМР (DMS-D6+TFA, , 13 м.д., 400 мГц): 9.31 (CH3); 45.12 (CH2); 52.52 (CH); 109.21 (CH); 110.4; 118.3; 118.7 (CH);121.4 (CH); 126.2 (CH); 128.8; 136.6; 168.9. Комплекс 6b: Выход 25.3%, Тплав 256℃, [α]D20=+5.00 (С=0.20, 6N HCl) .Найдено, %: C12H14N2O2 (218,25) C 69.27; H 6.41; N 12.82; Спектр 1Н-ЯМР (DMS-D6+TFA, , м.д., 300 мГц): 2.28 (s,CH3); 4.28 (d,CH3, J=5.7); 4.59 (d, CH2, J=5.7); 7.01 (br, dd, J= 8.1,7.1); 7.04 ( s, =CHN); 7.12 (dd, J=8.1,7.1); 7.43 (br, d, J= 8.1); 8.69 (br, NH2); 12.6 (br,COOH).13C Спектр 1Н-ЯМР (DMS-D6+TFA , , м.д., 400 мГц): 9.3 (CH3); 45.1 (CH2); 52.5 (CH); 109.2 (CH); 110.4; 118.3;118.7 (CH); 121.4 (CH); 126.2 (CH); 128.7; 136.5; 168.8. 4.5. Диффузионный (двух слойный) метод определения антибактериальной активности. Материалы: Питательный агар (состав: Пептический перевар живой ткани 5.00г/л, Натрия хлорид 5.00г/л, Мясной экстракт 1.50г/л, Дрожжевой экстракт 1.5 г/л, Агар-агар 15.0 г/л). Культура Stenotrophomonas maltophilia 9286. В стерильные чашки Петри чашки разливают фиксированный объём 2% питательной среды с антибиотиком: Азитромицин -50 мкг/мл, Аугментин - 50 мкг/мл, Хлорамфеникол - 10 мкг/мл, Амоксицилин - 50 мкг/мл, Азитромицин - 50 мкг/мл, Ципрофлоксацин - 50 мкг/мл, Роцефинил - 50 мкг/мл, Стрептомицин - 100 мкг/мл, Цефиксим - 50 мкг/ мл, Канамицин- 50 мкг/мл. После того, как среда застынет, производят посев суспензии клеток ночной культуры по 0,2 мл, путем расплавления столбиков с 0,7%-м питательным агаром. Далее на верхний слой наносим по 3 мкл раствора исследуемого вещества. По

усредненному радиусу зон подавления роста судят об ингибирующем эффекте раствора с использованием статистического метода анализа. Приготовление ночной культуры: В 1 мл питательного бульона засеять петлей культуры и инкубировать в термостате при 30ОС. Аналогичным методом, но без добавления антибиотиков готовим еще 3 культуры Pseudomonas для aeruginosa проверки 5249, Pseudomonas fluorescens 9150. биологической Pseudomonas активности: aeruginosa 9056,

Выводы NiII комплекс является хорошим синтоном для синтеза производных (S)-аланина с содержанием индольного кольца. В ходе проведения исследования нами были подобраны оптимальные условия для нуклеофильного присоеденения 3- и 2-метил – индола. Метильная группа во 2 положении индольного кольца мешает нуклеофильному присоединению, в следствии чего проведение данной реакции требует более жестких условий. В результате биологического скриннинга было доказано, что 2амино-3-(3-метил-1Н-индол-1-ил)-пропановая кислота (6b) подавляет рост Stenotrophomonas maltophilia 9286, в то время как антибиотики (азитромиццин, азитромицин, аугментин, хлорамфеникол, ципрофлоксацин, роцефинил) амоксицилин, не проявляют ингибирующей активности по отношению к данному организму. В свою очередь небелковая амминокислота 6b не проявляет ингибирующей активности по отношению к следующим микроорганизмам: P. Aeruginosa 5249, P. Aeruginosa 9056, P. Fluorescens 9150. 2-амино-3-(2-метил-1Н-индол-1-ил)-пропановая кислота (6а) на исследуемых обьектах проявляет слабую биологическую активность. Следовательно, мы можем сделать вывод о том, что метильная группа во 2 положении негативно влияет на антибактериальную активность.

ПРИЛОЖЕНИЕ Приложение 1 Пример хроматограммы 2-амино-3-(3-метил-1Н-инд-1-ол) пропановой кислоты (условия разделения: Diaspher-110-Chirasel-E 6,0 мкм, 4,0×250 мм; подв. ф. метанол/0.1М NaH2PO4×2h2o 20:80; 0,5 мл/мин; 200нм)

Приложение 2 Пример хроматограммы 2-амино-3-(2-метил-1Н-инд-1-ол) пропановой кислоты (условия разделения: Diaspher-110-Chirasel-E 6,0 мкм, 4,0×250 мм; подв. ф. метанол/0.1М NaH2PO4×2h2o 20:80; 0,5 мл/мин; 200нм)

Литература

1 Акжигитова А.А., Ковалева А.А. Характеристика непротеиногенных аминокислот // Материалы VIII Международной студенческой научной конференции «Студенческий научный фо-рум», 2016. - №1. – С.10-11 2 Хохлов А.П., Доценко А.Н., Перспективы использования аминокислот в неврологии и онкологии // Метаболическая терапия эффективное лечение. – 2003. - №2. – С.20-25. 3 E. Arthur Bella , Alison A. Watsonb and Robert J. Non-protein amino acids Plant soil and ecosystem interactions // Plant Soil Interactions. 2011. - № 342. – С. 31-48. 4 Синдирева А. В. Влияние урожайность и качество селенсодержащих зеленой массы удобрений рапса ярового. на // Электронный научно-методический журнал Омского ГАУ. – 2017. №2(9). – С.1-5. 5 Маршалл,В.Дж. Клиническая биохимия, :-е издание, переработанное и дополненное / В. Дж. Маршалл, С. К. Бангерт. – М. – СПб : БИНОМ – Диалект. 2011. – 408 с., ил. 6 Спенсер питания П.С. Потребление (строчки нейродегенеративных нестабилизированных обыкновенные) заболеваний и (бокового риск продуктов развития амиотрофического склероза) // Анализ риска здоровью. – 2020. - №3. – С.94-100. 7 Белоконь Ю.Н., Малеев В.И., Петросян А.А., Савельева Т.Ф., Иконников Н.С., Перегудов А.С., Хрусталев В.Н., Сагиян А.С. – Изв. РАН, сер. хим., 2002, №8, сc.1464-1470. 8 Ермакова И. П..Физиология растений: учебник для студентов вузов. - Москва: М. : Изд. центр «Академия», 2005. - 640 с. 9 Максимов И.В. Иммунитет растений и способы его повышения. // Вестник Академии наук Республики Башкортостан. – 2010. –Том 15. №3. - С.60-69. 10 Орлова Т. И., Булгакова В. Г., Полин А. Н. Биологически активные нерибосомальные пептиды. II. Механизм биосинтеза нерибосомальных пептидов // Антибиотики и химиотерапия.- 2012. № 57. – С.55-67. 11 Fiore A., Society M.P., Murray P. J.,Tryptophan and indole metabolism in immune regulation // Current Opinion in Immunology. – 2020. - №70. –

С.7-14. 12 Lundblad R. L. Chemical Modification Of Tryptophan // Chemical Reagents for Pro-tein Modification – 2020. - №1. – С..215-238. 13 Кратенко А.С., Вовк К.В., Сокруто О.В., Николенко Е.Я., Александрова Н.К., Ларичева Л.В., Кандыба В.П., Квитчатая А.И., Летик И.В. L-триптофан: кардиопротекторное гипотензивное, действие и особенности гипогликемическое, метаболизма при экспериментальном стрессе. – 2014. – Том17. - №.1 (57). – С.239-341. 14 Sandra W., Dunlop, Rachael A., Rowe, Anthony, Double, Kay L.,Rodgers, Kenneth J., L-DOPA is incorporated into brain proteins of patients treated for Parkinson's disease, inducing toxicity in human neuroblastoma cells in vitro. // Exp. Neurol. – 2012. - № 1 (238). – С.2937. 15 Kumar, Shiv, Bejiga, G., Ahmed, S., Nakkoul, H., Sarker, A., Genetic improvement of grass pea for low neurotoxin (b-ODAP) content. Food Chem. Toxicol. // Int. J. Publ. Br. Ind. Biol. Res. Assoc. – 2011. - № 49 (3). – С.589-600. 16 Dunlop, R.A., Cox, P.A., Banack, S.A., Rodgers, K.J., The non-protein amino acid BMAA is incorporated into human proteins in place of Lserine causing protein misfolding and aggregation. // PLoS One. – 2013. http://dx.doi.org/10.1371/ journal.pone.0075376. 17 Okle, Oliver, Stemmer, Kerstin, Deschl, Ulrich, Dietrich, Daniel R.. LBMAA induced ER stress and enhanced caspase 12 cleavage in human neuroblastoma SH-SY5Y cells at low nonexcitotoxic concentrations. // Toxicol. Sci. Off. J. Soc. – 2012. - №131(1). – С. 217-224. 18 Zhang F., Wang G. A review of non-nucleoside anti-hepatitis B virus agents. // Eur. J. Med. Chem. – 2014. - №75. - С.267-281. 19 Орлова Т. И., Булгакова В. Г., Полин А. Н. Биологически активные нерибосомальные пептиды. I. Механизм биосинтеза нерибосомальных пептидов // Антибиотики и химиотерапия.- 2011. № 56. – С.57-69. 20 Fernando Rodrigues de Sá A., Barreiro E.J., Carlos A.M. F.. From Nature to Drug Discovery: The Indole Scaffold as a ‘Privileged Structure’ // Mini-Reviews in Medicinal Chemistry. – 2009. - №9. – С.782-793.

Yong-Jin Wu. New Indole-Containing Medicinal Compounds. // Top 21 Heterocycl Chem. – 2010. - №26. – С.1–29. Ming-Zhi Z., Qiong C., Guang-Fu Y. A review on recent developments of 22 indole-containing antiviral agents. // European Journal of Medicinal Chemistry. – 2015. - №89. – С.421-441 Орлова Т. И., Булгакова В. Г., Полин А. Н. Биологически активные 23 нерибосомальные пептиды. III. Механизм биосинтеза нерибосомальных пептидов // Антибиотики и химиотерапия.- 2012. № 57. – С.43-55. 24. Rachael A. D., Brendan J. M., Kenneth J. R. The deleterious effects of non-protein amino acids from desert plants on human and animal health // Journal of Arid Environments. – 2014. - №1. – С.1-7. 24 25 Ruggiero R. A., Bruzzo J., Chiarella P., Bustuoabad O. D., Meiss R.P., Pasqualini C.D. Concomitant tumor resistance: the role of tyrosine isomers in the mechanisms of metastases control. // Cancer Res. – 2012. - №72(5). – С.1043-1050. 26 B. Biersack, R. Schobert, Indole compounds against breast cancer: recent developments. // Curr. Drug Targets. – 2012. - №13. – С.17051719. 27 Cardillo G., Tomasini C. Asymmetric synthesis of α-amino acids and α substituted β-amino acids. // Chemical Society Reviews. – 1996. - №25. – С. 117-128. - 10.1039/CS9962500117. 28 Болотин С.Н., Буков Н.Н., Панюшкин В.Т., Волынкин В.А. Координационная химия природных аминокислот. М.: ЛКИ. - 2008. 240 с; 29 John M. Walker. Non-Protein Amino Acids in the Design of Secondary Structure Scaffolds // Article in Methods in Molecular Biology. – 2006. – С.304. 30 Merino P., Tejero T,. Delso I., Ghirardello M. Synthesis of Amino AcidNucleoside Conjugates. // Asian Journal of Organic Chemistry. – 2016. №5. - 10.1002/ajoc.201600497. 31 Saghyan A.S., Mkrtchyan А.F., Dadayan A.S., Petrosyan S.G. Аsymmetric synthesis of enantiomerically enriched (S)-a-aminopropionic acids containing heterocyclic side chains // Tetrahedron: Asymmetry. –

2013. - №24. - С. 229-232. 32 Геолчанян А.В. Асимметрический синтез (s)-2-амино-3-(6-амино-1,2диметил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-ил)-пропионовой кислоты. // Химический журнал Армении. – 2012. - №4(65). – С.506510. 33 Roviello G.N., Mottola A., Musumeci D., Bucci E.M., Pedone C. Synthesis and aggregation properties of a novel enzymatically resistant nucleoamino acid. // Amino Acids. – 2012. - №43. – С.1465–1470. 34 Дадаян А. С., Дадаян С. А., Погосян А. С., Сагиян А. С. Синтезиисследование новых хиральных Ni (II) -комплексовоснования Шиффа бета –аланина. // Химический журнал Армении. – 2014. - №12(67). – С.233-238. 35 Velíšek J., Kubec R.,Cejpek К. Biosynthesis of Food Constituents: Amino Acids: 4. Non-protein Amino Acids – a Review // Czech J. Food Sci.- 2016. - Том.24. - №3. - С.93–109. 36 Peter B., Nunna E., Arthur B., Alison A. Toxicity of Non-protein Amino Acids to Humans and Domestic Animals // Article in Natural Product Communications . – 2010. - Том5. - №3. - С.485-504. 37 Su Jie, Su Fan, MingFang, Shangyang, Нao Aiyou. Selection of Amino Acids and the Biomimetic Synthesis of Amido Bond in the Presence of βCD. // Synthetic Communications. – 2014. - №44. - 10.1080/00397911.2013.850093. 38 Shinkai S., Hamada H., Dohyama A., Manabe O. ChemInform Abstract: NADH model reduction: biomimetic synthesis of α-amino acids from αketo acids. // Chemischer Informationsdienst. – 1980. - 11. 10.1002/chin.198031305. 39 Devedjiev I., Bairyamov S., Videva V. Biomimetic synthesis of esters of natural amino acids. // Heteroatom Chemistry. – 2008 - № 19. – С. 252255. 40 Li Li, Liu Jianbo, Yang Xiaohai, Huang J., Wang K. Biomimetic synthesis of highly biocompatible gold nanoparticles with amino acid- dithiocarbamate as a precursor for SERS imaging. // Nanotechnology. – 2016. - №27. - 105603. 10.1088/0957-4484/27/10/105603. 41 Dunlop R.A., Cox P.A. Misincorporation of a non-protein amino acid into human proteins // Institute for Ethnomedicine. - 2013. - №8. – С.1-8.

42 Shinkai S., Hamada H., Dohyama A., Manabe O. Biomimetic synthesis of α-amino acids from α-keto acids. // Tetrahedron Letters. -1980. - №21. – С.1661–1664. - 10.1016/S0040-4039(00)77779-3. 43 Capra Julien. Biomimetic synthesis of biologically active nitrogencontaining compounds. – 2011. 44 E. Arthur Bella , Alison A., Watsonb and Robert J. Non-Protein Amino Acids: A Review of the Biosynthesis and Taxonomic Significance // Natural Product Communications. - 2008. - Том.3. – №1. – С.93-100. 45 Chuang L., Zhongyi J., Zhenwei T., Yixiao L. Biomimetic synthesis of inorganic nanocomposites by a de novo designed peptide. // RSC Advances. – 2014. - №4. – С. 434-441. - 10.1039/c3ra44630a. 46 Roviello G.N., Musumeci D., D’Alessandro C., Pedone C. Binding ability of a thymine-functionalized oligolysine towards nucleic acids. // Bioorg Med Chem. – 2014. - №22. – С.97–102. 47 Ran Lu, Hongpeng Li, Chao Ge. Regioselective Biomimetic Synthesis of Dimeric Oxyresveratrol. // Derivatives. Synlett. – 2020. - №31. - 10.1055/ s-0040-1707257. 48 Сагиян А. С., Багдасарян А. С., Манасян Л. Л. Высокоселективный асимметрический синтез (s)-о-метилсерина. // Химический журнал Армении. – 2008. - №1(61). – С.79-85. 49 Saghyan A.S., Simonyan H.M., Petrosyan S.G., Geolchanyan A.V., Roviello G.N. Thiophenyl-substituted triazolyl-thione L-alanine: asymmetric synthesis, aggregation and biological properties // Amino Acids. – 2014. - №14. – С. 1-8. 50 Saghiyan A.S., Dadayan S.A., Petrosyan S.G., Manasyan L.L. New chiral NiII complexes of Schiff’s bases of glycine and alanine for efficient asymmetric synthesis of a-amino acids // Tetrahedron: Asymmetry. – 2006. - №17. - С. 455–467. 51 . Blanco P, Corona F, Martínez JL. Участие транспортера эффлюксной помпы RND SmeH в приобретении резистентности к цефтазидиму при стенотрофомонадной мальтофилии. Sci Rep. 2019 Mar 20;9(1):4917. doi: 10.1038/s41598-019-41308-9... PMID: 30894628; PMCID: PMC6426872.

52 Kaye, K. S. & Pogue, J. M. Infections Caused by Resistant Gram-Negative Bacteria: Epidemiology and Management. // Pharmacotherapy. – 2015. № 35. - С.949–962. 53 Lira, F., Berg, G. & Martinez, J. L. Double-Face Meets the Bacterial World: The Opportunistic Pathogen Stenotrophomonas maltophilia. // Frontiers in microbiology. -2017. - № 8. - С.2190. 54 Jeon, Y. D. et al. Risk factors for mortality in patients with Stenotrophomonas maltophilia bacteremia. // Medicine (Baltimore). – 2016. - № 95. – С. 4375. 55 Walter M., Ramaley L. – Analyt. Chem., 1973, v. 45, №1, рр.165-168. 56 Гордон А., Форд Р. – Спутник химика. Издат. «Мир», М., 1976. 57 Bates H.H., Mullaly J.M., Hartley H. – J. Chem. Soc., 1923, v. 123, pp. 401-406. 58 Belokon Yu. N., Tararov V. I., Мaleev V. I. Improved procedures for the synthesis of (S)-2-[N-(N′-benzylprolyl)amino]benzophenone (BPB) and Ni(II) complexes of Schiff's bases derived from BPB and amino acids. Tetrahedron: Asymmetry, 1998 v. 9, p. 4249-4252. 59 Геолчанян А.В. Асимметрический синтез (s)- β -[3-(o-нитрофенил)4-фенил-5-тио-1,2,4-триазол-1-ил]- α –аланина. // Химический журнал Армении. - 2011. - №2(64). – С. 218-224. 60 Belokon Yu. N., Saghiyan A. S., Djamgaryan S. M., Bakhmutov B. I., Belikov V. M. Asymmetric Synthesis of β-Substituted α-Amino Acids via a Chiral Ni(II) Complexes of Dehydroalanine. Тetrahedron, 1988, vol. 44, issue 17, p. 5507-5514. 61 Сагиян А.С. Энантиомерно чистые небелковые аминокислоты. Способы получения. М., Наука, 2010. 62 Шекеева К.К. Технология отделения аминокислот бумажной хроматографией. // Вестник Казахского Национального медицинского университета. – 2018. - №1. – С.331-334. 63 Шекеева К.К. Технология отделения аминокислот бумажной хроматографией. // Вестник Казахского Национального медицинского университета. – 2018. - №1. – С.331-334. 64 Мкртчян Г. M. Асимметрический синтез энантиомерно обогащенной (s)-2-амино-3-(2-тиоксотиазолидин-3-ил)пропионовой кислоты. // Химический журнал Армении. – 2013. - №1(66). – С.84-89.

65 Геолчанян А.В. Асимметрический синтез (s)- β-(3-бутил-4-пропил-5тио-1,2,4-триазол-1-ил)-a-аланина. // Химический журнал Армении. – 2011. - №1 (64). – С. 47-53.

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв