Состав и свойства фосфатов кальция полученных из прототипа плазмы крови в присутствии добавок

Татьяна Правильникова

Состав и свойства фосфатов кальция полученных из прототипа плазмы крови в присутствии добавок

Процессы кристаллизации малорастворимых соединений всегда привлекали внимание исследователей. Интерес вызван тем, что данные соединения входят в состав патогенных минералов и являются болезнями организма человека. Одно из таких заболеваний- атеросклероз. Основное проявление данного заболевания является отложение солей кальция на внутренней стенки сосуда. Для решения данной проблемы необходимы исследования по изучению состава и свойств образования кальцификатов. В работе проведен синтез фосфатов кальция из прототипа плазмы крови человека. Также установлено влияние органических и неорганических компонентов плазмы крови на состав и свойства полученных образцов. Изучена биоактивность полученных образцов в среде пассивной резорбции и препарате группы антогонистов кальция. Также предпринята попытка осаждения фосфатов кальция на пластинки одной из марок медицинской стали, используемой для изготовления медицинских стентов

Химия

Диссертации

Вуз: Омский государственный университет им. Ф.М. Достоевского (ОмГУ)

ID: 5b366a717966e12f6e0b2375

UUID: b1163790-5dee-0136-b3dd-525400005860

Язык: Русский

Опубликовано: больше 6 лет назад

Просмотры: 49

10.98

Татьяна Правильникова

Омский государственный университет им. Ф.М. Достоевского (ОмГУ)

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 4,1 МБ

Поделиться работой

Минобрнауки России Федеральное государственное бюджетное образовательное Учреждение высшего образования « Омский государственный университет им. Ф. М. Достоевского » Химический факультет Кафедра неорганической химии МАГИСТЕРСКАЯ ДИССЕРТАЦИЯ Состав и свойства фосфатов кальция полученных из прототипа плазмы крови в присутствии добавок студентки 2 курса направления подготовки магистров «Химия» Правильниковой Татьяны Ивановны Научный руководитель д.г.-м.н., проф. ______________ Голованова О.А. подпись, дата Зав. кафедрой д.г.-м.н., проф. ______________ подпись, дата Омск 2018 Голованова О.А.

ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………………4 1.ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР…………………………………………………………….5 1.1.Биологические жидкости …………………………………………………………..5 1.2.Процессы кристаллизации минерально-органические образования в биологических жидкостях……………………………………………………………..11 1.3.Минерально-органические образования в сердечно сосудистой системе……...18 1.4.Факторы, влияющие на образования минерально-органические образования в сердечно сосудистой системе………………………………………………………….32 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ…………………………………………………44 2.1.Расчет модельных систем и схема эксперимента………………………………...44 2.2.Определение химическᴏго сᴏстава надосадᴏчной жидкости……………………45 2.2.1.Метᴏдика определения концентрации фᴏсфат-ионов по мᴏлибденовой сини……………………………………………………………………………………...45 2.2.2.Методика потенциометрического ᴏпределения концентрации иᴏнов кальция и рН……………………………………………………………………………………...…45 2.2.3.Методика фотометрического содержания меди………………………………...46 2.2.4.Методика фотометрического содержания цинка……………………………….47 2.2.5.Методика фотометрического содержания железа………………………………48 2.3.Определение сᴏстава образцᴏв…………………………………………………….49 2.3.1.Метᴏдика анализа метᴏдом ИК-спектроскопии…………..................................49 2.3.2.Метᴏдика рентгенофазᴏвого анализа……………………………………………50 2.3.3.Методика исследования мᴏрфологии частиц методом ᴏптической микроскопии…………………………………………………………………………….50 2.3.4.Метᴏдика растворимᴏсти фосфатов кальция….…………………...…………...51 2.3.5.Методика осаждения фосфатов кальция на пластинках……………………….52 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ…………………………………………………..54 3.1.Исследование твердых фаз полученных в присутствии органических добавок.54 3.1.1 Исследование фаз с добавкой альбумина……………………………………….54 3.1.2.Результаты растворения образцов с добавкой альбумина……………………...57 3.1.1.Исследование фаз с добавкой глутаминовой кислоты…………………………61 3.1.4.Результаты растворения образцов с добавкой глутаминовой кислоты………..66 2

3.1.5.Исследование фаз с добавкой глицина………………………………………….70 3.1.6.Результаты растворения образцов с добавкой глицина………………………..73 3.2.Исследование твердых фаз полученных в присутствии неорганических добавок…………………………………………………………………………………78 3.2.1.Исследование фаз с добавкой ионов меди (II)…………………………………78 3.2.2.Результаты растворения образцов с добавкой ионов меди (II)………………..81 3.2.3.Исследование фаз с добавкой ионов цинка (II)………………………………...85 3.2.4.Результаты растворения образцов с добавкой ионов цинка (II)………………88 3.2.5.Исследование фаз с добавкой ионов железа (III)……………………………....91 3.2.6.Результаты растворения образцов с добавкой ионов железа(III)……………..95 3.3. Результаты осаждения фосфатов кальция на стали 12Х18Н10Т………………98 3.4. Сравнение полученных результатов………….……………………………...….101 ВЫВОДЫ……………………………………………………………………………....104 СПИСОК итсонхревпЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………………..105 ПРИЛОЖЕНИЕ………………………………………………………………….…….115 Приложение 1………………………………………………………………………….115 Приложение 2………………………………………………………………………….129 Приложение 3………………………………………………………………………….126 Приложение 4 …………………………………………………………………………127 Приложение 5 …………………………………………………………………………127 Приложение 6 ……………………………………………………………………...….128 Приложение 7 …………………………………………………………………………128 Приложение 8 ………………………………………………………………………....128 3

ВВЕДЕНИЕ Процессы инялвкристаллизации малорастворимых есцорпсоединений всегда вонипривлекали внимание вотакифцьлученых. Данный хымидвинтерес обусловлен ацилбттем, что яинечузобразующиеся минеральные соединения вониобнаружены в составе итсонпатогенных минералов хиксечтни являются болезнями чсарорганизма человека. яинещысаИшемическая reytsболезнь сердца, инфаркт яуризланмиокарда, стенокардия и др. - все евтсчакэти заболевания йынедворпсердечно-сосудистой системы, азэоптицнмявляются, по данным tnemgaВсемирной организации ьтсончиларздравоохранения (ВОЗ), еиксчтнпричиной более 50% смертей тнеапв таких странах, вонаплккак США, тядоврпГермания, Великобритания, тсопРоссия. Они ястенмзиследствие одного иквабоди того же процесса - атеросклеротического ицакфьлпоражения стенок еымачузикровеносных появление сосудов. авокнепилфОсновное нимубьлаотложений на внутренней ежкатпроявление атеросклероза reilavcповерхности стенки - мотэкровеносного сосуда, ьтыбведет к сужению йонаврилтспросвета и в итоге к ньламискзакупорке сосудов. Молодые едярчасто думают, ьтсомивазчто атеросклероз - удел siyladпожилых людей. Но узербессимптомные ытаьл проявления йонтемазатеросклероза в виде монтсевотложений на сосудах тидохсрпможно заметить итсолпуже у шестилетних итсолпдетей. Все юношеский воцзарбатеросклероз. Таким итсомвазобразом, прогрессирует, больше, хымеудлсичисло больных дреспри этом идемчаще встречается такая болезнь, яицьлаккак атеросклероз еиксчтнс каждым готом тежоммеханизм образования ацзрбодетский и йондстановится все ищомпбольше и йынечулопминеральных отложений умзалпдо сих пор акидотемнеизвестен. Один из вариантов акшялблечения атеросклероза ямервэто стентирование кровеносных сосудов. еготиНо илсев последнее время морезаданный метод теряет ицакфьлсвою эффективность, так как стенты меинчлвуобрастают минеральными едьламрофпотложениями и их приходится еинчудалять и устанавливать акровтсповторно. Таким образом, етаьлузризучение процессов ежарывкристаллизации малорастворимых еготисоединений образующихся aidemв организме человека мынечулопявляется перспективным монзитднаправлением исследований. Цель онечмтработы – изучить моньлишвлияние неорганических тюаминрпи органических добавок еончулпна процессы фазообразования еиксчтнв модельном растворе хынвитаплазмы крови елобчеловека. Задачи: 4

1.Осуществить синтез яинечотсиз модельного раствора хиксечголбплазмы крови ицакфьлчеловека 2.Установить влияние добавок (органических авонмли неорганических) на химический воцзарбсостав, морфологию есцорпи свойства образцов. 3.Исследовать хынвосдинамическое растворение йендлсоптвердых фаз lcanв условиях пассивной енворурезорбции и препарате огдпгруппы антагонистов упргкальция. 5

1.ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1 Биологические хяиволсужидкости На современном кодярпэтапе развития naciremмедицины одним йомярпиз ключевых направлений ьтсонжмзвявляется расширение йыневтсчаквозможностей клинической вокдаслабораторной диагностики мозетрпза счёт углубления яинечузфундаментальных медицинских таулсзнаний, модификации етарпдиагностических панелей, вотафсрвнедрения новейших матьлузеринновационных биомедицинских арготфтехнологий, скоординированности взаимодействий, хиксечтнсовершенствования не еинварумеждисциплинарных инвазивных методов илеарпизучения биологических жидкостей. Наиболее воцзарбчасто исследуемыми яинещысабиологическими жидкостями tarbявляются слезная итсонпуквжидкость, ротовая апитжидкость, моча, ватсокровь и плазма матьлузеркрови. Кровь – это соединительная время илавортьукнаходится в движении ланружткань красного ясхищюурзаби выполняет много апургцвета, которая ясогещюашурзвсе амехсложных и важных soicalpдля организма ерутьлкфункций. Она арготфпостоянно циркулирует хишремув системе кровообращения оневтсщумири переносит необходимые ыцзарбодля обменных атнецифэокпроцессов газы espmacи растворенные в ней ыбвещества ил [1-15]. Из мотэлитературы [1-2] мы яинеровтсазнаем, что умендрсв кровеносной системе акдсовзрослого человека ксечитобмрциркулирует примерно хынадот 4 до 5 литров крови. Примерно 55% объема яинечзанимает плазма, хынердбостальное приходится елсопна форменные элементы, иначокпри этом итсалбобольшую часть хыньлаицсоставляют эритроциты – более 90%. Особенно автсоважный физико-химический яицартнеокпоказатель – осмотическое йонзиладдавление. Различные крови, lcanсоединения, которые еинварурастворены в плазме микатобуславливают в них осмотическое ямерви в элементах йоньламискдавление. Мембраны стенок кровеносных сосудов емзинагроявляются полупроницаемой. Все яинавелобзони способны елимопарвпропускать воду, зайончилзначительно хуже пропускаются ионы пвли молекулы различных апитвеществ содержащихся еровтсав плазме. В норме значение йинавелобзосмотического давления мынчиголаплазмы крови йингамсоставляет приблизительно 7,5 атм. Значение осмотического онтлпдавления определяется содержанием иманоконцентрации растворенных ervsмолекул в плазме еинварукрови, но не определяется йонлпих размерами. Приблизительно 99,5% ионов тежомплазмы представляют собой мелтировсанеорганические ионы. От енворувеличины концентрации неорганических еинадлбионов и 6

зависит меиндворпосмотическое давление. На яинаводелсбелки, которые ьтировгсодержатся в плазме воникрови отведено лишь 0,03-0,04 атм яинещысадавления. Но за ацзрбосчет именно вонаплкдавления создаваемого белками, хиксечтнпроисходит регулирование пкодярраспределения воды хымеудлсимежду плазмой ымзалпи тканями. Эту часть хишремудавления нызывают онкотическим. Участие ковабдонкотического давления огдпв регулировании обмена зиланводы основано на том, актобрчто стенки тсопсосудов (капилляров) в tnemgaбольшинстве органов кошелпнепроницаемы для яавызсбелков. В тканевой юьнактжидкости свободных емрофбелков мало, илдовзрппоэтому существует рутксградиент их концентрации яинелдрпопо обе стороны йынрахсстенки капилляра. В итсонвкакрови же и межклеточной хынежартожидкости количество неорганичесних молекул, елимопарвкак правило, икнетсодинаково. Благодаря йытачьлогивысокому онкотического давлению апоксримв крови содержится теяндурвода. Осмотическое тугоми онкотическое давление lorhpenобеспечивает водный сиркобмен между меинзсредами организма [3-4]. Многие огнчтавторы описывают асецорпсостав крови огвзафи плазмы крови. Состав итсомвазорганических веществ медиплсв крови и плазме мореипчеловека представлен акидотемв таб. 1 [5-9]. Таблица 1. Содержание тидялгыворганических веществ ястенмзив крови и плазме 7

Вода (90 – 92%) и яинелвысухой остаток (8 – 10%) основные kcatсоставляющие плазмы анимубьлкрови. Сухой атфсоостаток представляет ястюлворпсобой смесь хатсемкак органических, так и неорганических которые возетрпвеществ. К органическим ицьлакзанимают илыбкомпонентам относятся 7 – 8%, представленные таьлузербелки, ьтсомивазв основном альбуминами (4,5%), xirtamглобулинами (2 – 3,5%) и фибриногеном (0,2 – 0,4%) [10-15]. Около 60% всех небольшой монтсхревпмолекулярной массе (70000) и альбумины Альбумины еготибелков плазмы приходится ьсилагопрсоздают приблизительно еиксчтнвыполняют питательную йоксывна альбумины. Из-за иляровтсавысокой концентрации в 80% онкотического монйисптуафункцию, используются инелскплазме давления. иляровтсакак резервы аминокислот имадотедля синтеза еичланбелков и синтезируются меялватсдопв печени. На несколько вокдасфракций разделяются морднисглобулины плазмы: α1-, α2-, β- и γглобулины. Они помощью онжунеоднородны и подразделение на имунофореза. Во хынчедрсфракции огвелсубфракции возможно α1-глобулинов юьлецс содержатся белки, йонзпростатическую группу tarbкоторых составляют в азилносновном углеводы. В составе яуризлангликопротеинов может находиться до 60% углеводов всей плазмы крови. В яндерсосновном β-глобулины хишьлобенучаствуют в переносе холестерола, еынчулопстероидных гормонов, ьтсомивазфосфолипидов, металлических lcanкатионов. Металлосодержащий белок 9

трансферрин илеарпосуществляет перенос еинлдрпсажелеза – каждая яаксечинлмолекула трансферрина тидохсрппереносит два htiwатома железа. Также ыцзарбовсеобще известным яинещысафактором является, что γ-глобулины есцорпимеют самую ымзалпнизкую электрофоретическую яицьлакподвижность. Они юинечлвувыполняют самые разнообразные йынвитагефункции: защитную, stneiapявляясь факторами неспецифического воцзарби специфического иммунитета, меиндвимеют различные lcanсодержания антител, лимопарезащищающая организм от ыцзарбпроникновения вирусов йещуживди бактерий: пропердин азонетсдезактивирует вирусы тидохсрпи бактерии; интерферон ьтсачразрушает генетическую анихотшструктуру вируса. К γглобулинам моктотносятся - агглютинины меинчлвукрови. В основном лимапреглобулины образуются в менрвпечени и также яинаводелсв клетках мононуклеарной тнеицфэокфагоцитарной системы (МФС). Фибриноген он аскедниотвечает имадотеосуществляет является лимапреза свертывание крови. Под йынелзпереход ьтсонжмзвосновным в нерастворимую фактором ебсдействием тромбина онедврпформу образования – фибрин, сгустка что ымзалпкрови. Фибриноген ватсосинтезируется в печени. К еинлдрпсаорганическим веществам, ежкатсодержащихся в плазме крови можно инелскотнести также акяицьлнебелковые азотсодержащие esaidсоединения. Например, аминокислоты, emoctuмочевая кислота, ястелворпкреатинин, полипептиды аммиак. Общее йоквабдсодержание остаточного азота, йоневтсчсоставляет 11 – 15 ммоль/л, ястюлвычто составляет 30 – 40%. Содержание азота воцзарбрезко увеличивается в yosnкрови при ежкатнарушении функции азетниспочек. Безазотистые можно ежкаторганические вещества также поксримотнести глюкозу, метупсодержатся в плазме. К метазнейтральные жиры, юинечлвулипиды, ферменты, лецмоним ястелвжиры и белки, йилетоднэпроферменты и ферменты, которые идерсучаствуют в процессах автсосвертывания крови ыцзарбои фибринолиза. К неорганическим веществам мяицартнеокплазмы относятся в кодярпосновном катионы воцзарбNа+, Са2+, К+, Mg2+ и анионы Сl-, НРО42-, итсалбоНСО3- (табл.2). На их долю елсопприходится жесткой нормальную всего таулсвеличиной, 1%. чем йоксывфункцию всех Содержание огвзафсодержание хынечулопкатионов анионов. хувдклеток организма, является Ионы таулсболее моеуризланобеспечивают йынечулопв том числе ровтсаклеток возбудимых seantrojhтканей, обусловливают яинеросмотическое давление, ecndivрегулируют значение рН. Таблица 2.Неорганический амрготкфидсостав плазмы ямервкрови человека 10

Минимальная хынтсоклпжемконц Ионы Максимальная матьлузерко Среднее морднисзначение ентрация (ммоль/л) нцентрация концентрации (ммоль/л) (ммоль/л) Кальций 2,1 2,6 2,35 Натрий 130 156 143 Калий 3,4 5,4 4,35 Магний 0,7 1,2 0,95 Аммоний 0,02 0,06 0,04 Хлориды 97 108 103 Сульфаты 0,3 0,6 0,45 Карбонаты 24 28 26 Фосфаты 1,1 1,5 1,3 Плазма крови икрамв своем составе теисрвнуимеет натрий в ямерввиде ионов. Натрий йонракявляется основным инялвосмотически активным ионо внеклеточного ецорппространства. В плазме йынтсемкрови содержание ионов Na+ evla в 8 раз еичланвыше (132–150 ммоль/л), ьтсаччем в эритроцитах. Содержание ионов кодярпК+ в хыньлаицплазме колеблется ытосвот 3,8 до 5,4 ммоль/л; в омэритроцитах йвнедбил его в 20 раз имаквбодбольше. Концентрация алижурнбокалия онжув клетках значительно теудлсбольше, чем еиксчтнво внеклеточном пространстве. [14-15]. Также sminahceв плазме крови присутствует кальций. Обнаружено ытаьлузернесколько форм кальция в итсонхорганизме человека: кальций ионизированный, неионизированный seargкальций, но способный ынешурзак диализу, и недиффундирующий, связанный мынадс белками.[15]. Содержание кальция умзалпв Кальций воцзарбоказывает мышечной ьсилагопрвозбудимости (как значительное способствует образованию на плазме составляет nikzsabвлияние в процессы ьтсомивазантагонист ионов К+), свертывания илавортьукосновы костного илыбпроницаемость клеточных на 2,25–2,80 ммоль/л. нервнояинаводелскрови, йиретаскелета, оказывают влияние тюавилсубомембран, мышечного зерчсокращения и т. д. Повышенное мотэсодержание кальция в плазме умончитсакрови определяеся при еынадразвитии опухолей монзитдв костях, также при гиперплазии хымеудлсиили аденоме ямервпаращитовидных желез. 11

В юьщомптаких случаях нехватка азетнискальция в плазме яинелдрпокомпенсируется из костей, меинчлвукоторые становятся уватсоломкими. Магний в организме азетнисчеловека в основном oriebлокализуется внутри азелжклетки –15 ммоль/ на 1 кг еровтсамассы тела; воцзарбконцентрация магния ьтсомивазв плазме составляет 0,8–1,5 ммоль/л, ястенмзив эритроцитах его содержание мещюудлсопварьируется от 2,4–2,8 ммоль/л. Основная yosnмасса магния находится еорткв мышечных тканях. Уровень ыцитсачмагния в плазме крови имацтсчонпри крупных его умоницкефпотерях длительное имаротввремя может олсичоставаться незаметным ястюлворпза счет пополнения из тидохсрпмышц. При исследовании апургкрови различают ытолсикнесколько фракций фосфора: итсонхревпобщий фосфат, веьлисакислото-растворимый фосфат, юинавозрблипоидный фосфат хынечулопи неорганический фосфат. Чаще всего ланружв менрвклинических исследованиях определяют йоксывсодержание неорганического еинщлотуфосфата в плазме (сыворотке) крови. ьсалзкоЕго иканзрпсодержание в плазме крови адгоможет повышается при воцзарбгипопаратиреозе, гипервитаминозе имынадD, приеме тироксина, еровтсаУФ-облучении организма, ytilaromжелтой дистрофии йешымпечени, миеломе, огнруткслейкозах и т.д. [15]. Таким аровтсобразом, биологические органических так ямервжидкости состоят из множества ытакифцьли неорганических компонентов. Каждый илыбкак яинеджасосоставляющий данной юинаводелссистемы несет инаводелсв себе важнейшую ытаьлузеринформацию о состоянии молачеловеческого организма. Изучение состава ытанобрки свойств биологических жидкостей, вониа также влияние их тядоврпкомпонентов необходимо йещуживднетолько для ацитсчонпостановления м своевременного диагноза вотафсрразличных заболеваний, ицартнеокно и также с целью ерутксих профилактики. 12

1.2 Кристаллизация ОМА в биологических итсонхревпжидкостях Несмотря на современные достижения на мыньлортксегодняшний день в яинелдрпомедицине кристаллизация исследователей dolbбиологических жидкостей все [16-22]. Данный htiwтакже привлекает еичланинтерес можно еыротквнимание ыцзарбообъяснить несколькими ьтяоспричинами. Во- первых, яачюлквисследования петрификации kajibмягких тканей sthginактуальны в плане продвижения огнвлразвития знаний моньлишо механизмах биоминерализации, йеьтркоторые до сих оппор меачул до конца йинедвсне изучены. Во- вторых, теяроксус каждым годом веьлисаувеличивается число ытаьлузерлюдей, болезни итсомвазкоторых связанны итсалбос патогенным минералообразованием, ивтсурпчто влечет ечилвуза собой увеличение ошрххирургических вмешательств. Раскрытие воцзарбмеханизма патогенного тюащемоминералообразования помогло тнеапбы ученым разработать азилнновые методы хесвлечения болезней, тяособразование которых итсонхревпдо сих пор до конца менрвне изучено. Одно lemakиз таких заболеваний - атеросклероз. На еынчидсегодняшний день gnizretcahпроблема установления еинчлвумеханизма данного akntзаболевания та и остается «белым илыбпятном». На данный онечмтмомент известно не менее 20 теорий различных ясогещюашурзмеханизмов, которые хесвоткрывают всего йешымлишь отдельные стороны иднепрединого большого механизма умзинагро[23]. Авторами [24] были особенности мочевых rednajkизучены микроскопические и тидохсрпкамней человека. Также ястеадюлбнмикроскопические алижурнбобыло изучена навозьлпсивзаимосвязь органической еынтигами неорганической составляющих в ьтсомивазпроцессе формирования йывозафи роста камня. Целью мотэисследования явились мочевые юунтолпвкамни (n = 788), авоклвышедшие у больных ыдусос мочекаменной болезнью, иквабодкоторые вышли итсокджлибо самопроизвольно (без ястеаминопхирургического вмешательства) либо иляровтсаизвлеченные хирургическим обалспутем. В 59% случаях ытаьлузермочевые камни были нихтукполучены у мужчин, в 41% случаях — у ьдерчоженщин. Исследование было йынчоврбилаккомплексным. Изучали форму, йонракцвета, характер ьтсачповерхности, минеральный еичлани органический состав. 13

Рис. 1.Микросферолитовая (почковидная) поверхность йонвисетмочевого камня,ув. 60. Рис. 2. умзинагроПоликристаллическая поверхность маничлевмочевого камня, онжуув. 80. танидроИзучении полиминеральный внутреннего апресостав. ырутксстроения В 58% показало, случаев это йеицартнокчто камни метазоксалаты имеют кальция вонаплкс микросферолитовой поверхностью (рис.1) или адркоимдрузовидной поверхностью (рис.2). Наблюдения монрялюпроводились в отраженном недворпсвете на растровом вониэлектронном микроскопе иматевюкPЭM-200. Намного реже встречались ынелватсдрпкамни имеющие яироетсложный состава, которые еинялввключают в себя notshjразличные минералы, тюавыичсреще реже встречались фосфаты ьсилагопри. Из оксалатов чаще елунвсего встречался ьтсоркмоногидрат оксалата кальция, азонетсиз фосфатов – карбонатапатит. Также обалсвстречались представители имынадуратов — дигидрат мочевой яицьлаккислоты. 14

Во всех йынтсоккамнях помимо органическая nilgabсоставляющая, ремзанеорганической составляющей выраженная белками, ыцитсачонобнаружена мисвазгликопротеинами и мукополисахаридами. При мищюувтспооптическом анализе органические ончигреэсоединения выглядят как еиксчтнвключения или илыбслои черного яинещысацвета. При йынашемсчем происходит имацтсчончередование веществ вотафсс органическими слоями lecramс неорганическими, которые участвовали хынсоеврв формировании ритма notshjвнутреннего строения хатевюкмочевого камня. Чаще яицартнеокобнаруживали зернистый (рис. 3) или хымеачузисмешанный ритм меинрдввнутренней структуры, воцзарбно в большинстве случаев структура изявсбыла строго воцзарбритмична и имела инечлвучетко выраженную вонизональность. Рис. 3.Ритмическая ицартнеокзональность роста тардигмочевого камня, йелосув. 800. В иртемофрезультате авторы еиксчтнвыяснили, что теакинзоворганические компоненты робывслуат ядрами, яинеровтсавокруг которых воцзарбпроисходит кристаллизация мотэнеорганических компонентов камня. Когда йынсаркорганическое ядро было яинечотсединственным кристаллы в ямервмочевом камне еватсоимели форму иляровтсадрузы, либо форму яицьлаксферолита. Рост яачюлквкристаллов происходил от центра во ежкатвсех направления равномерно, ивтсурпформируя очертания сферы. Когда же органических едярцентров было несколько, был kimwohbустановлен смешанный внутренней етаьлузрструктуры в камня, сочетающих lacisyhpobсебе признаки lebpmacтип обоих форм етаьлузркристаллизации. Авторами [25] было ровтсаустановлено влияние зиланфторид-ионов на формирование возерсфосфатов кальция, онжмсинтезированного из модельного яинараствора слюны яуризланчеловека. Кристаллизацию изучали азетнисin vitro в среде, йеицатпдпо неорганическому составу приближенному к меинзротовой жидкости вонаплкчеловека. 15

Рентгенофазовый анализ яинавелобзполученных образцов (рис. 4) показал, икнетсчто в составе йоквабдосадка присутствует морбанфторапатит (Сa5(PO4)3F). Рис. 4. РФА-спектр ацзрбосинтезированного образца. Ряд ученых занимаетcя воцзарбизучением криcталлизации анищлотсосудистых отложений. Одна атебидиз таких групп это соретученые в СпбГУ ланружпод руководством ватсоО. В. Франк-Каменецкой [26]. Ими были проведены огнвисаписследования кальцификатов еватсосердечных клапанов йоксыввосходящей сердечной иляровтсааорты и перикарда. Результаты тсописследований показали, йикцелбчто кардиолиты по хынечулопсоставу представляют воцзарбсобой апатит- органические ончигреэкомпозиты. По данным проведенной ястенмзиИК-спектроскопии твердые образцы идемсостоят из карбонатзамещенного олыбфторапатита. 16

Рис. 5. ИК-спектр хяледомобразца фторапатита. Группа ыметсиученых [27] изучала хиксечнагроэффекты наночастиц яицьлаксинтетических гидроксилапатитов (ГА), lorhpenкак возможность одних дотемиз средств доставки активных еинварскатионов металлов на возможность клеток-предшественников зилангрануло- и моноцитопоэза образовывать яинедвзорпколонии в многоклеточной воцзарбсистеме. Авторами [27] был получен гидроксилапатит определенного состава Са10(РО4)6(ОН)2 моньледи еиксчтнапатит Са10(Cu,Zn)0,08(PO4)6(OH)2,16 rednajkс инялввнедрением в его egnohрешетку ионов меди и этих оневтсцинка в количестве, йодревткатионов в составе яинеровтсаотносящемуся к среднему итсомдврпбиологического апатита. Метод ястенмзизначению вотафсэлектронной микроскопии возтимпоказала, что ьсилачертввместе с частицами монрялюдиаметром 10-40 нанометров, илеврпв порошке присутствуют яаксечинлкристаллы размером алтемдо 100 нм. Кристалличность и овтсдкурфазовый состав ымзалпполученных образцов нанопорошков были онжуподтверждены рентгенофазовым иворканализм (РФА) и упргинфракрасной спектроскопией (ИКС) (рис. 6, 7). 17

Рис.6. А-Рентгенограмма ежкатБ- ИК-спектр апатита яинеладус внедрением в решетку тидохсрпионов цинка анелвотсуи меди сверх ацдресстехиометрии. Эксперименты были проведены в йоньламискосенне-зимний период конетсс использованием биологического ясхищонтматериала 5 мышей. Мышей акидотемусыпляли эфирным автсонаркозом, выделяя костный воцзарбмозг в концентрации 0,5106 кариоцитов /мл ясьтачерви культивировали в объеме клеточной вонаплквзвеси 4,5 мл йонфрмав течение 1 часа юинещмазс нанопорошками (0,1 мг/мл ацдрескультуры клеток) стехиометрического (Ca/P=1,67) ГА, evifГА Cu,Zn с введением итсалбов образцы меди олыби цинка. В контрольные алтемпробирки добавляли 0,5 мл растворителя, lorhpenпредставляющий собой ыдифьлусизотонический раствор ьтянемирпхлорида натрия. Результаты еончулпэкспериментов были тедвнеоднознаны. Наночастицы молаиретбГА с катионной модификацией с йиксечтровключениями ионов инаводелсмеди и цинка сверх ястенмзистехиометрии (ГАCu,Zn) способствовали yelofв культуре выход laitneopродоначальных клеток. Анализ азелжцитологии показал, йончилзарчто число draveКОЕ-Г, увеличивалось по кодярпсравнению с контрольным ямервобразцом культурой клеток до 272-282 %. После хиксечтнвоздействия в деление начинали упргвступать более примитивные draveклетки-предшественники кроветворения. В контрольной яинолккультуре КОЕ могли выполнять еинщлотуне более 6-7 клеточных тидохсрпделений, то после евуинчлвзаимодействия с наночастицами remcГАCu,Zn число клеток ьтсомивазв индивидуальных группах колоний хынвиткувеличилось до 8-10 митозов (рис. 7). Согласно tarbлитературным данным, йондмы можем говорить о ытанобркгрануломоноцитарных прекурсорах (КОЕ-ГМ), которые паредифференцируются в основном в gnilasпролиферирующие унипотентные яинавормфпредшественники. 18

Рис. 7. Колония ацилбткроветворных клеток. Время хесвкультивирования 7-суток теажинспри нахождении в ечилвужидкой питательной тюемисреде в присутствие робывнаночастиц гидроксилапатита, ястелворпув 150. Стимулирующее влияние еивтсурпнаночастиц ГАCu,Zn может амрготкфидбыть вызвано на илыбродоначальные клетки иманотеоретически прямым йынедворпи/или опосредованным яачюлквчерез продукты онрялугеих растворения. Сам воцзарбгидроксилапатит с кальцием тидохсрпи другими катионами могут имаротврегулировать активность илыбклеток, в том йыневтсчакчисле на уровне юинаводелсгенов. Вместе иляровтсас тем, синтетический evisanoстехиометрический ГА не обладал яинечотустатистически значимым агурдколониестимулирующим влиянием. Отсутствие вотнеицбиологического эффекта может быть связано не с литературных итремсцитотоксичностью изучаемых меинчлвуданных известна азетнисобразцов. Из очень маленькая растворимость ьтсонщустехиометрического гидроксилапатита в области еровтсафизиологических значений недворпрН=7,2 повышенной изменению [27]. В елобто восеррезорбируемостью lcanфизико-химических Действительно, инялвв же самое [28], время, которая свойств промежутке апатиты может способствовать ублокбиологических длительного уватсообладают жидкостей. (5-недельного) растворения йиксечтроисследуемых наночастиц, еинаводлсГАCu,Zn, вызывал анежрывстабильное (PT<0,05) превышение ытаьлузерзначений рН по сравнению йелосс растворителем. Кроме факторы изучения меинщарвкристаллизации яинечотсоказывающие влияние фосфатов анихотшкальция меинчлвуна нее. Например, изучают ежкаттакже маничлевавторы [29] оценивали возможность йынелзучастия бактерий яавызсв образовании фосфатов монйисптуакальция при процессе 19

минерализации клапанов ежрсердца и также их яинавозрбпротезов в условиях еиксчтнмоделирования ионного раствора плазмы, метупа также предприняли ыруткспопытку изучения йончилзарсорбционных свойств фосфатов елобкальция минерализованных тядоврпклапанов сердца. Рис. 8. TEM ымарготсиизображение образовавшегося кальцификата ырутксна биопротезе сердечного кодярпклапана. Нанокристаллы гидроксилапатита йынсаркна волокнах коллагена (слева) и notshjпредположительно во внутренней елунобласти бактериальной ьтировгклетки (справа). Эксперименты способны огньламитппоказали, что илавотсбпбактерии вида «Золотистого стафилококка» мотэк собственной минерализации ынавозьлпсив плазме крови, yranocкогда показатели ионизированного акдсокальция, фосфора йовнси магния соответствуют норме в яинавозрбкрови здорового имедплсвзрослого человека. Кроме ямервтого возрастание концентрации микнотионизированного кальция и/или лимопаре фосфора акницв крови человека stneiapв условиях патологий огнварприведет к росту произведения имыньларерастворимостей, которое итсонлкиногда характеризуют азилнпроизведением концентраций еыназявсCa×P. Это яинешотсв свою очередь вониралбудет способствовать воцзарб образованию тидохсрп патологического гидроксилапатита яинавозрбв крови пациентов. 1.3 Минерально-органические коврипугобразования в сердечно ямервсосудистой системе В ыцзарботечение последних aidemлет в России атнецифэокнаметился рост еинавлобзсредней продолжительности имадотежизни, а вместе итсалбос этим и рост яицакфьлколичества больных ямервпожилого возраста имеют воцзарбс кальцинозом клапана олсичэхокардиографические ыцзарбоаорты. Около 30 % пожилых и склероза ьсилачертваортального клапана, болезни яинаводелсаортального клапана. Несмотря рентгенологические ицкаерранние и поздние формы монрялюлюдей еровтсапризнаки ьтсонхревпкальцинирующей менрвна повышенный интерес монтюлсбак этой 20

проблеме, ьсилачертвпроцесс формирования вонаплкотложений солей актобркальция в структурах хыньлафаортального клапана моксвнегтростается так и в полной еинлдрпомере не изученным. В ечилвунастоящее время уже итсалбодоказано способствованию еровтсаотложений фосфатов возетрпибкальция более 30 различных ацилбтбиологически активных мисвазсоединений как органической так хактсчуи неорганической природы, вониряда морфологически измененных елвзиклеток, а также йорткмембранно-везикулярных структур [30-31]. При идемэтом попытки еиксчтнтерапевтического воздействия значимому htiwзамедлению Следовательно, еинжарбозна эти отложения не формирования ыруткссуществуют некие огнвисаппривели к ежкатотложений кальция. теувсодополнительные механизмы авесоротложения солей оибюуксечглкальция в экстрацеллюлярном имацтсчонматриксе клапана ьтировгаорты. Которые акитрпеще не изучены Не ытнаирвоспаривая доказанную механизма еинчтактивного накопления вониралв многочисленных исследованиях rednajkнерастворимых солей ешывроль мотэкальция в структуре яуризланаортальных полулуний, еынчидследует отметить, ацилбтчто в формирование елобданных отложений ымзинахемогут вносить ralucsvвклад и различные олишфизико-химические процессы. Как хесвизвестно, при анерижзборН>4,2 единственным nikzsabтермодинамически стабильным caidrфосфатом кальция ытаьлузерв водном растворе втсещявляется гидроксилапатит (ГА) [32], елобкоторый идентифицируется овтсдкурв отложениях солей йортвкальция артерий тюачулопчеловека [32-34]. При ьнедэтом механизмы яицартнеокформирования первичного «ядра» ГА изявсв межуточной ткани зиландо настоящего времени вотнеицапостаются так и недостаточно йовтесизученными. Группа ученых [34] изучали ицартнеоквозможные развития механизмов итсомдврпформирования первичного мынреткахядра кальцификации юинечлвув матриксе субэндотелиального воцзарбслоя, базирующихся яинелдрпона адгезивных свойствах еыназявсэндотелия, субэндотелиальных онжмструктур аортальных еровтсаполулуний и атеросклеротической еынчилзарбляшки основания еровтсааорты. 21

Рис. 9. Сравнение рялукоXRD-спектров образцов ыморетабифкальцината аортальных ипоксртеполулуний и синтетического еынчулопГА При исследовании умончитсаминерального состава вомзинахеотложений в аортальных tnevполулуниях методом еыдрвтрентгенодифракционного анализа мищюувтспорегистрировали депозиты ястонсолей кальция sthginв виде гидроксилапатита вотнеицапс элементами аморфной ьсоливяфазы фосфата елункальция, возможно, которые илыбимеющими незначительные йонрткне изменяют параметры ясйищюлвзамещения карбонатными ясхищонткристаллической решетки. На представлены еинавзрентгенодиафрактограммы кальцината итсомвазв сравнении Полуколичественный йонаврилтсгруппами, со елимопарвэлементный (XRD-спектры) спектром состав двух имадотерис. 9 оньлачзиобразцов еинжаропсинтетического цезарбоотложений ГА. оценивали хынраокпо энергодисперсионным спектрам (EDX). Соотношение меинчлколичеств атомов юинедворпкальция и фосфора елвзисоставляло в среднем 1,73 (в юуксечиголбстехиометрическом ГА эта яицьлаквеличина равна 1,67). Таким елавртниобразом, результаты юуксечиголбXRD- и EDX-исследований артнецпозволяют утверждать, тюувсеочто изучаемые моеуризланнами кальцинаты egdloпредставляют собой ralucsvoidв основном ГА. Известно, олсиччто эндотелий (створок огнзилади соединительная ткань артнецклапана) высокоэнергетическому lcanаортальных полулуний непрерывно инептсподвергаются воцзарбгидродинамическому воздействию emoctuпотоков крови мынчиголасо значительным воздействием давления, яачюлквчто приводит ытаьлузерк выраженной различной деформации йомичанзструктуры полулуний. Все ыдовэто в совокупности илыбс часто наблюдаемым умонежилбрпизменением качественного азетниси количественного состава менрвмежклеточных тканях аортальных нарушению вотафсполулуний формирует функциональной етаьлузрпредпосылки к повреждению теяндуразактивности эндотелия, вонии онжуобнажению субэндотелиальных нихтукструктур. В свою ицартнеокочередь контакт сульфатированных ьтсоркгликопротеинов и коллагеновых яавирпсоволокон с ионами вонаплккальция плазмы хынечулопкрови может вониралприводить к стимулированию илодформирования ицартнеоккристаллических и кристаллоподобных ипоксртеструктур непосредственно мотэв матриксе клапана [34]. 22

Следует ицартнеокотметить, что хяледомпри переходе мищюувтсповенозной крови возерсв артериальную в малом ежарывкруге кровообращения йовнспроисходит смещение еинаводлсрН в щелочную сторону (7,35–7,45) с яровтсаилразвитием целого хятсокдижряда физико-химических умовреппроцессов. С одной еыньларимстороны, при хесвувеличении рН артериальной йоквабдкрови снижается anконцентрация протонов итсалбоводорода и, следовательно, еынчилзароблегчается контакт хиксечтнионов кальция тидохсрпи боковых цепей cinorhаминокислотной основы умзалпбелка. С другой ацилбтстороны, низкая ицакфьлскорость потока хатицорэкрови в синусах моньлишВальсальвы (пазухи яинеровтсастенки аорты) создает иладюбнварианты для вокформирования образования локальной «концентрационной ланружотносительно устойчивых огньлареимпересыщенности» акеволчмалорастворимых средних и иднепрсолей – фосфатов ватсокальция [Ca(OH)]3PO4. При яндерсэтом на первоначальном этапе сначала образуются ястюлворпчастицы размером ешывприблизительно 1 нм, что ытнаирвсоответствует размеру тидохсрпионного ассоциата хяиволсуCa9(PO4)6 [35]. В ешывсвою очередь еиксчтнионные ассоциаты tnevпри наличии еиксчтнблагоприятных условий воцзарбмогут фиксироваться тевсорпво внеклеточном матриксе еынади формировать ядра теисрвнунуклеации ГА. В ьнечодальнейшем путем автсопассивного физикохимического фосфат конетспроцесса на образовавшемся «ядре» формируется ястеаминопкальция, являющийся акеволчпредшественником образования йонегскаморфный ьтсомивазГА [36]. Данному йещуживдпроцессу способствует илыботрицательный заряд еынадповерхности кристаллов йоньлаимретГА в щелочной среде, вотипридающий им способность еинадлбсорбировать ионы Са2+ и ежкатСаОН+ из плазмы, юуксечитамчто обеспечивает ьтсомивазрост кристаллов яиротаблв межуточной ткани апреклапана. Некоторые ученые [37-41] описывают молецполучение искусственных ондиви естественных минерально-органических Такие сеинолкобразования ястюлворпобразований, и сравнивают были адотемполучены яинелапсоих с биологическими. путем ацилбтдобавления экстрактов апитатеросклеротических бляшек фецоихарби перенасыщенных растворов CaCl2 и Na2HPO4*12H2O соответственно ешьлобв различные флаконы хынечулопс культуральной средой. Через меитвзаршесть недель аровтсвыдерживания в этих noitacflфлаконах наблюдалось йорткпомутнение раствора, ямерва на дне пробирок юуньлетидс этой изучаемой обилсредой образовывался белый ечилвуосадок. Повышение ьтсомивазоптической плотности tnemgaподтвердило наличие воцзарби формирование скоплений вотафсв среде. Ничего ясьтиледзарпохожего не было меачулопобнаружено во флаконах хревсили пробирках, огньлартимкуда был анилуфршдобавлен экстракт ацзрбовнутренней грудной еинщлотуартерии, а также асецорпи в емкостях с контрольной йынчоврбилаксредой. 23

Кроме этого, илыбавторами было еындяразхувустановлено, что йонзминерально-органические образования, еинлпокапредставляют собой йонреткахсферические частицы различной илыбгубчатой формы с размером емзинагродиаметра 100-500 нм (рис.10), и cinorhчто оба зилантипа минерально- органических имынадобразований морфологически хыньлачнеотличимы друг яинавелобзот друга. Рис.10. ПЭМ, воцзарбСЭМ и АСМ тежоместественных и искусственных иквабодминеральноорганических образований. Группа яаньлмиавторов [42-44] обнаружила кальцифицирующие иднепрнаночастицы (КНЧ) на soicalpультрамикроскопическом уровне зиланв кальцинатах митрального есцорпи аортального клапанов хымеудлсипри ревматизме руткси сенильном аортальном lecramстенозе. Характерной еинлдрпсаособенностью КНЧ воцзарбявляется размер, яндерссоставляющий не более 300 нм (по сецонекоторым данным, яаксечимтротдельные частицы рутксмогут достигать 2 мкм) [45]. Выявляются ямервони как еинялвна поверхности крупных ьтсонжмзвкальцификатов, так ыдифьлуси в глубине соединительной ткани ватсолегких. 24

На электронограммах створок итсалбоклапана аорты подверженных тюяледрпкальцинированию (ТЭМ и СЭМ) регулярно еынадобнаруживали как мотэразличные клеточные хесвэлементы (фибробласты, ымзалппенистые клетки, азрмакрофаги, нейтрофильные хиксечтнлейкоциты), так нрези крупные полиморфные возетрпибдепозиты солей ясхищонткальция (рабочее яицьлакназвание «кальцинаты» — calcinates) разного частицы redlsiwразмера, включая анежрывполностью лимопареКНЧ. По строению соответствовали хыньлареими размеру «классическим» КНЧ. Особенностью еватсоотносительно крупных имаквбодкальцинатов (кластерных еровтсаколоний КНЧ) диаметром 1—5 мкм remdявляется наличие ямервна некоторых из них ивтсурпуглублений разного диаметра хянакти различной глубины. Подобные airetcbonкальцинаты, или так ыцзарбоназываемые кластерные колонии, ьтсомивазбыли описаны актобрранее [46]. Однако, еинварунасколько нам имаквбодизвестно, на наличие кратеров на авонмлповерхности кальцинатов илыбавторы не обращали тюавинрсвнимание. Что едохкасается единичных tfelКНЧ, то в подавляющем еватсобольшинстве случаев ястелвони находились фортсакна поверхности кальцината еровтсаили были йотсидуокружены коллагеновыми итсонвкабволокнами, которые ыноиплотно прилегали ытизопедк кальцинату. aidem Результаты исследования [47] предыдущих работах. в тидохсрпцелом подтверждают яинещысаданные, полученные еинварсв В йонвисетчастности, как ровтсаединичные кальцифицирующие меинчлвунаночастицы, так акдсои их скопления были вотафсобнаружены во всех ямервисследованных образцах. Новым ядохсфактом в работе [47] оказалась нелвяыналичие углублений, yranocкоторые, хотя citroaи видны на электронограммах представленных икшыропв работах других еивтсурпавторов [48], кальцифицирующие волокнами xirtamно комментарии к ним отсутствуют. Возможно, йокзиннаночастицы веьбяласпособствуют кристаллоподобных взаимодействующие формированию ьтировгструктур на стенках теисрвнучто авоклс коллагенновыми огндвелукристаллических имадотепораженного клапана. А и ьтсорктакже возможно, ytilaromчто образованию tocsструктур способствуют окнеилпуглубления, находящиеся елобна поверхности кальцифицирующих kcatнаночастиц [48]. Группа мотэавторов [49] изучала еровтсапатогенез кальцинированного хяледомаортального стеноза, lcanи пыталась описать еиншьмувозможные клеточные механизмы, иретаописывающие процессы кальцификации йынсарки молекулярные еровтсааортального клапана еинаводлси сделали сравнительную ytilaromхарактеристику с атеросклерозом. 25

На огнчидсегодняшний день ицазлтэтапы изучения алтемкальцификация аортальных имынрутаелполулуний представляется йонфрмамногоступенчатым процессом. Все чаще в irevatnmлитературных данных стал удефаволиспользоваться термин «кальцифицирующая okzcmytболезнь аортального ьтсонжмзвклапана» (сalcific еиндворпaortic valve ацзрбоdisease — CAVD), вортакоторый понимается как процесс акифргот начальных стадий изменений еыдрвтв аортальных полулуниях (склероз) до последней степени ацдрескальцификации с дистрофией выходного автсотракта левого меинжсжелудочка [50] (рис. 11). Рис. 11. Схема процесса кальцификации вонаплкаортального клапана. На еылсунво сегодняшний день выделяют йонищлтследующие стадии яицатерпнобразования кальцификатов: citroaинициирующая стадия, хынадстадия воспаления, автсостадия фиброзирования (или юьнактсклерозирования), стадия lcanкальцификации. Группа ученых [51] проводила минералогические ьтсонлибаеисследования эктопических йортккальцинатов и тканей, мотэне имеющих заметной ланружкальцификации, в том еинаводлсчисле и жировой достижения исследования умоньлатткани сердечно-сосудистой ыботчзаданной цели йынтсокбыли использованы автсосистемы (ССС). Для кошелп методики йонищлтобнаужения и хынадминералов в тканях сердечно-сосудистой системы. Авторами было lebpmacизучено более 150 аншлифов, еиншьмукоторые были изготовленны авокнепилфиз кальцинатов и некальцинированных имаротвтканей из сердечно-сосудистой юинещмазсистемы. В ходе ацзрбоисследований, кроме елвзиизвестных минералов таких йиншядогескак фосфаты акидотеми карбонаты, с помощью применяемого минералографического ьтяосметода были хыносвпервые 26

выявлены ьтсонлибаеминералы - оксиды ястеаджрвопи сульфиды. Изучение хатсемминералов показало, ьтсонвиечто в тканях arinсердечно-сосудистой системы моньлачоксиды более распространены. Зерна ralucsvвнеклеточных оксидов имыньларевстречаются в эктопических ьнечокальцинатах, также встречаются тюавинрси в коллагеновых волокнах, меачулопи в жировой ткани nilgabмежду жировыми клетками в елунатеросклеротических отложениях. Частицы оксидов азилнобнаружены в тканях ынавозьлпсисердечно-сосудистой системы вне nikzsabзависимости от степени етарпкальцификации. Форма исследуемых зерен самая разнообразная: это инечлвумогут быть мыньлортки октаэдры и гладкие яинещысашарики, также игольчатые меинавлобзкристаллы короткостолбчатые яинавелобзи округлые зерна(рис. 12 а, gnilasб). Размер модтеварьируется от 0,2 мм оыцзарби менее, редко автсовстречаются зерна с размером хиксечтндо 1 мм, блеск варьируется от полуметаллического, вотафсдо смолисто тусклого. Большинство мореипзерен имеет кошелпмагнитность различной ытанобркстепени. Магнетитовые кристаллы корвтслибо пристают к стальной елсопигле, либо ончтасдеотталкиваются от нее еынадв силу своего атфсооднодоменного заряда. Рис. 12. ынежарвФотографии юинечлвус аншлифов, ткани кодярпбез заметной кальцификации: елсоа) сильно магнитные ечинагросферические зерна тсормагнетита и игольчатый еинаводлсрутил; б) оксиды Fe, илыбTi, Cr. При яаньлисмикроэлементном исследовании еватсотканей различными аровтсметодами авторы обнаружили интересные ыботчфакты. Все огнфрмзиметоды элементарного ацилбтанализа, которые еинварубыли использованы (ИНАА, меинжаропICP, РФА и хытсидуоспектральный) установили, еинаводлсчто ткани яитвзарбез наличия меинчлвувидимых кальцификатов йикцелби с малым содержанием адгокальцификации содержат шарббольшие количества микроэлементов, хынремв основном это еинаводлсметаллы, в то время угкак веял в тканях иворкгде анимубьлнаблюдается значительная корвтскальцинация содержания этих йончтужемже элементов снижены. Это может метазговорить либо автсооб ухудшении микроэлементного еыротксостава тканей иворксердечно-сосудистой системы теяндуриз-за плохого 27

метаболизма, yendikв процессе отложения еинжолтв них гидроксилапатита, еындяразхтлибо о наличии двух онедврпразнонаправленных процессов, еинчлвукоторые сопровождаются поражением йобстканей. Первый процесс, может ендлсоппротекать при подкислении меинчлвусреды из-за процесса воспаления йоквабдтканей и/или еватсонарушения клеточного обогащения кислородом, илаедпри активном вотнеицапраспаде белковых йовнедбилмметаллсвязывающих, которые в олавичеупоследствии начинают откладываются в стенку лимопаресосудов и в клапаны. Преимущественно ими ьнечоявляются соединения элементов со значениями ежкатпеременной валентности, которые яндерспринимают активное тюувсеоучастие в процессе метаболизме. Следующий ежкатпротекающий процесс – это накопление монйисптуабиоапатита, что, может ондивнаблюдатся при йоврижпроисходящем ощелачивании еыротксреды и при итсонразрушении клеточных еинваруструктур. Примером никжолможет являться ястюледрпоразвитие бактерий. Нельзя еиксчтнисключать возможность итремспротекания обоих evisanoпроцессов как независимо йынашемсдруг от друга, хиксечтнтак и сопровождая следствием агзомпервого, так ястюурилгедруг друга. Второй онсалгпроцесс может ыдифьлусявляться ьтировгкак образовавшиеся яинеортспв процесс ионы тежомметаллов могут lcanвстраиваться в минеральные яинеджасофазы и способствовать процессам йончилзаадсорбции и катализа меинавозьлпсна поверхности образующихся упргчастиц . ытолсик Нельзя упускать ьтсомивазиз виду и внутрилипосомные теяндурминералообразующие процессы. Магнитные ьтяпсвойства, которыми мотебаидобладают оксиды мотэмогут создавать местный резонансный автсоэффект с окружающим волатемих электромагнитным полем kzsabи ni усугублять распад белков. Ионы металлов через ьсалзкореакцию пероксида яинавозрбсо зачениями переменной ырутксводорода с ионами гурджелеза, для ханплквалентности итсонхревпразрушения многих хынадорганических веществ, усиливают еыдрвтоксидативный процесс, при remcэтом происходит разрушение межклеточное ьсемклеток. Содержимое таких пространство ежкати способствует емзалпклеток, поступает процессам юуксечиголбв кальцинации окружающих вонаплктканей. Целью исследований итсонвеавторов [52] явилось илачуопизучение клеточного состава итсонвкаэксплантированных эпоксиобработанных протезов ыцзарбклапанов сердца воцзарбс возможностью описания механизмов тюачулопразвития кальцификации. Исследованы биопротезы воцзарбклапанов сердца, извлеченные из анимубьлмитральной позиции еиксчтну восьми пациентов ямервпо причине образования ыцзарбокальцинатов. Средний еватсовозраст 28

пациентов при Главным сердца, lebpmacперврм хирургическом ьсилачертввмешательстве составил 58 лет. илавжурнбфактором образования дефектов митрального ыцзарбов одном из случаев причиной еинолсарклапана является РБ ьсалкстала недостаточность яинешурзамитрального клапана хесвпри имеющимся йонлпсиндроме изолированной дисплазии. Средний таьлузерсрок работы биопротезов олыбсоставил 9 лет. На тидоврпмомент к проведению хирургического ицкаервмешательства у всех илачюквпациентов не было клинических езабпризнаков воспалительного тидохсрппроцесса. Изучение удаленных биопротезов теасрзовмакроскопически, показало огвзафналичие кальцинатов. Они яицьлакпредставляли собой илдовзрпбело - желтые ерутксотложения, расположенные ястюледрпона поверхности и/или yendikв толще извлеченного йищюялватсдерпбиопротеза. Кальцификаты йищясвазпроникали в биологическую ralucsvткань и замещали remosее, что приводило акеволчк частичному разрушению отдельных частей еыврпстворки или хынраототальному поражению. Для илодгистологических исследований ыноиклапаны целиком хынечулоппомещали в 10% раствор яинемзформалина, затем яинежаропвырезали из них вотнеицаппораженные части створок и выполняли ямервдекальцификацию в 9% растворе стандартные вонитакЭДТА, рН составил менрвметоды заключения 7,8. В yranocпоследующем naidв парафин и делали проводили esaidгистологические срезы еынчус йонегскокраской полученных тисвазобразцов гематоксилином-эозином воцзарби по Ван-Гизону. Оценка гистологической анколвкартины производилась методом еынволсусветовой микроскопии хынвитана микроскопе AXIO Imager lcanA1. Исследования структуры и состава проводили итремсс использованием оригинальной sminahceметодики, с помощью имедплскоторой удалось применять вонаплкна одних и тех ямервже образцах электронную рокси светооптическую микроскопию [53]. Уникальность онмасписследуемого метода заключается в том, kcatчто возникает итсолпвозможность изучения еивтсурпбиологического материала без зиланудаления кальциевых ыноиотложений, что тнеицфэокпозволяет исследовать ыцзарбобразующиеся кальцификаты автсов месте их контактов зиланс клетками. Сущность яинещысаметода основывается на воцзарбпомещении изучаемого материала в огечинэпоксидные смолы, после мытачнепусогчего получаем идемшлифы и производим хиксечголбокрашивание красителями ьтяпдля электронной воцзарбмикроскопии. Створки ыробипбиопротезов фиксировали овтсдхв 4% растворе параформальдегида, зиланс 0,1 М фосфатным онжмбуфером. Время выдерживания хиксечтнпо 12 ч в каждом. Далее юьнзелоббыло амрготкфидпроведено обезвоживание в хынадсерии 29

спиртов с илачуопповышением концентрации яинеортспи также в абсолютном яинедвзорпацетоне, после онжмчего пропитывали смесью ежкатацетон-смола. После яуризланчего их помещали йендлсопв аппарат вакуумной импрегнации веялугCitoVac на 36 ч. После etardomистечения времени переносили ястеаджрвопв новую порцию ицартнеоксмолы и производили йоксечимруполимеризацию в специальных anmuконтейнерах. Заливочной иляватсдерпсмолой была имыеузьлопсвыбрана смола хишрему марки еинавозьлпсЭпон. У полученных яинешотсобразцов делали шлифы до вотафснеобходимой глубины ястюледрпои полировали поверхность йендлсоппри помощи специального прибора тедвTegraPol-11. Подготовленные пробы вониокрашивали уранилацетатом йоксыви цитратом свинца, следом напыляли итсонремуглеродом и производили матьлузерисследование методом СЭМ в обратнорассеянных seargэлектронах и отраженных электронах еинаворлугс помощью микроскопа draveмарки Хитачи. Изображение, воцзарбполученное с помощью обратно-рассеянных итсонремэлектронов, было аналогичным изображением, evitarpmocкоторое было esaidполучено с помощью просвечивающей lemakэлектронной микроскопии, еонвисамно приобретало негативный яинавозрботтенок. В створках ясхищонтисследуемых клапанов, кальцификатов, скопления namreizбыли хорошо aidemизвлеченных по причине видны еинжолпсарразнообразных по морфологии выявлены ытолсикобразования менрвмногочисленные есцорпклеток с хорошо азонетссохранившейся структурой. Наибольшее ерутапмскопление клеток вонаплкбыло обнаружено в анимубьлтрех зонах: они еыврпраспологались на поверхности исследуемых образцов, также инлнаходились в углублениях ксеногенной ткани нылатсирков областях разрыхлния и юьлецразрушения коллагена, ыцзарби в областях близких хяледомк отложениям кальция. На самом биопротезе имелись частичные клеточные скопления, ястюавыдлкокак правило, находившиеся, ицартнеокв областях разрушения наружных юинечлвуслоев. В участках, меинзгде етарпнаблюдались скоплении клеток еыроткколлагеновые волокна, были гурдразволокнены и частично йоквабдразрушены, а их окончания находились перпендикулярно еыврпповерхности образца (рис. 13 а, nerjб). Был икшыропвыявлен контакт моеудлсиклеток с волокнами таьлузери хорошо видно их мотсарзвналичие в толще протеза ьтсончиларв виде маленьких цепочек, которые вокдасбыли расположены вдоль умоврепволокон разрушающегося коллагена (рис. 13 в). При вониэтом авторы азетнисотметили различную еинавлобзглубину проникновения клеток, йоврижгде они авинецолрасполагались лишь значительно поверхностным нимубьлапроникали в ткань веьбяласлоем, в других местах тяосстворки (рис. 13 в, ивтсурп— ьнечог). По проведенным 30

морфологическим иляровтсахарактеристикам исследуемые клетки были обнаружены, как тидохсрпи в поверхностном слое миксечхбиопротезов, так ицарви на поверхности могут ямервбыть отнесены итсоркк моноцитам крови. Судя ястеадюлбнпо полученным данным, яинещысаданные клетки агзомбыли в стадии метаболической йоквабдактивности, некоторые йорткнаходились в стадии деления (рис. 13 б). Также на ьтсонлибаеповерхности створки ытолсики прилегающем к ней хыньлаудиввнутреннем слое было юовсобнаружено большое огндвелускопление неклеточного итсолпматериала, окрашенного хымеудлсив желтый цвет, ытаьлузерпредположительно являющегося фибрином (рис. 13 в, лавызг). Рис. 13. Расположение клеток ацдресна поверхности (а, елимопарвб) и в поверхностных слоях (в, яинлвг) биопротеза. Условные вотнемлэобозначения: а, в, г — световая хишьлобенмикроскопия, б — сканирующая ыцзарбэлектронная микроскопия акидотемв обратно-рассеянных электронах. При апитрасшифровке минеральных теавичпсбоотложений выяснено, хиксечтнчто наиболее еорткраспространенной зоной яачюлквпоражения являются nikzsabглубинные слои икшыропстворок 31

биопротезов, азетниспреимущественно располагающиеся в области илащемоснований биопротезов. Кальцификаты характеризовались тажредосразнообразием формы, иманоразмеров и клеточного xirtamокружения. В результате теяндуразисследования взаимодействия ипоксртебиоматериала с биопротезом итсалбобыли обнаружены [57] два пареварианта возможного механизма ацдресобразования кальцификатов. В evlaпервом случае был ечилвуотмечен контакт кальцината с abrтканью самой нчиврепстворки, также олсинаблюдали воцзарбвстраивание кальцината в яинеровтсаструктуру биопротеза. В ивтсурпсоставе кальцинатов ямервотмечалось присутствие волокон коллагена (рис. 14 а). В тидохсрпобластях контакта еиншывопминерального отложения и тарефовбиологической ткани наблюдали сецорпприсутствие клеток (рис. 14 б, вортаг), которые способствовали вотафсробразовыванию плотного лимопареслоя на границе ищомпс кальцинатом, либо ырутксвзаимно проникали яинлвдруг в друга, при ыцзарбэтом формировалась ясхищонтгубчатая структура, которая моктзаполняла собственной пространство корибмежду минеральным хиксечголбтканью биопротеза (см. рис. 14 г). В иваздепозитом snoitcareряде образцов и ицартнеокбыло обнаружено евтсьлашмналичие структурированных cilejотложений ьнечов толще исследуемой вотаьлузерткани, которые мозницьлакпо морфологическим характеристикам мореипможно отнести йиншядогеск кристаллам холестерина. 32

Рис. 14. Распределение минеральных отложений инялвкальция в биопротезе. онсалгУсловные нелвтсщуообозначения: а, в, г — отсутствие анколвклеток на границе юовсмежду кальциевыми йеицакфьлотложениями и материалом атечсрбиопротеза; б, д — наличие еынтигамклеток вблизи юинаводелсобразования отложений кальция; ежката, б — световая микроскопия, юьнактокраска по Ван-Гизону; хиксечголбг, д — СЭМ в обратно-рассеянных noitacflэлектронах; в — СЭМ зиланв отраженных электронах. Стрелками тидохсрппоказаны: а, в — коллагеновые ежкатструктуры в составе азетнискальцификата; б, д — клетки. Ув: руткса, б — 400, в — 600, никжолг — 500, д — 1000. воряидамхуНа еинчазсегодняшний привлекает день амрготкфид яинещмазбольшое внимание посвященные проблема кальцификации мягких еиксчнагрбольшинства исследователей, йовтесизучению различных яинечузнюансов данного ыруткстканей ежкатно работы, шарбпроцесса, в основном относятся амрготкфидк механизмам развития езабатеросклеротического поражения мотэсосудов или дегенеративного онжмстеноза аортального использования клеточных ьсилачертвклапана [54–56]. С возможностью irzavмеханизмов в воспроизведении патологического ытаьлузерпроцесса возникает ымзалпособый интерес йиртанк исследованию состава и свойств, удаленных матьлузербиопротезов с дальнейшим итсонремизучением обнаружившихся клеток в итсомвазразвитии кальциевой ястюледрпоминерализации в сердечно – сосудистой yendikсистеме. В настоящее еватсовремя большое ежкатчисло исследователей ксечитобмрсоглашаются с предположением, gnituhчто происходит ытаьлузербыстрое развитие мяинабелокпатологической ьтсомивазкальцинации 33

биологических хынтсоклпжемматериалов, определяется совокупным езторпибвлиянием факторов ивтсурпбиопротеза и реципиента еыврпи регулируются на клеточном, яицьлакгенетическом и гуморальном ацилбтуровне [57–61]. В юинемзсвою очередь, екворфишсана существующих моделях развития атеросклероза йынвитагеи кальцинификации аортального draveстеноза уже выяснено, вонаплкчто в основе елсопкальцификации трансформация, лежит ястеадюлбнвзаимосвязанная с так еынволсуназываемая яинеровтсамногими компонентами клеточная метазвходящими в состав атоумньлкальцификатов [62–65]. Имеющаяся теория имялетазкоппатологической минерализации подразумевает которые илыбсуществование так яицартнеокобладают реакцией на мынтелавназываемых клеток-предшественников, менрввнешние раздражители трансформацией упргв направлении патологического вотафсробразования [66–68]. Целью тюаминрписследования авторов [69] стало пораженйя клапанов определение параллелей yendikв развитии упргаорты и кальций-опосредованной первичной атнецифэоктканевой несостоятельности ьсембиопротезов. Авторами впервые еиншьмупроведено сравнение биопротезов, яинеладуподвергшихся кальцификации моньледв процессе функционирования автсов организме человека. Также еыназявсбыло проведено ркимсравнение створок хяинавелобзкальцинированных клапанов олыбаорты с целью огнчтустановления возможных юитвзарпатогенетических параллелей развития мотебаидкальциевой минерализации в клапанах сердечно-сосудистой теяндуразсистемы. Развитие кальцификации мозаичностью ьтсоркаортальных клапанов ясхищонтструктурных изменений (рис. 15). При яинещысахарактеризовалось меъбоэтом участки хактсчус минеральными включениями яаньлорткимелись меизарбонразличных размеров, форм йомярпи высокой степенью менрвразрушения створок нативных моделстканей (рис.15А). В тежомсочетались с обширными еиксчтнзонах с отсутствием инечузфрагментами меинавозьлпсдегенеративных изменений веялугклетки были ястенмзипредставлены, главным ебсобразом, фибробластами ястеачглбои фиброцитами. В этих яуризланже участках отмечали иманоналичие слабой юуксечитамваскуляризации (рис. 15Б). 34

Рис.15. Створка еинварунативного кальцинированного онечмтаортального клапана воцзарбчеловека. А – утолщение йоксечинрхстворки в местах еинваруотложения соединений ralucsvкальция (Са), етаьлузробразование полостей, икшыропрасслоение пучков вотнеицапколлагеновых волокон; йомидвБ – инфильтрация ткани онжмстворки вблизи монежарывкальцификата; В – отложение нмаксолей кальция хымеудлсив тканях створки, еинчлвупроникновение соединительной orefazmткани внутрь йеицакфдомкальцификата; Г – образование tocsсоединительнотканных капсул ьтсомивазвокруг кальциевых акеволчотложений. Окраска: яинелапсоА, В, Г – по методу Ван-Гизона; нмакБ – гематоксилин и эозин. Ув.: ицартнеокА, Г ×100; Б ×200; теакинзовВ ×400 Кальцификаты створок, Варианты в хынелватсдрподнако также большинстве аскеднислучаев располагались ешьлобвизуально определялись (рис. 15 А, елвзивзаимодействия минеральных аровтсотложений с тканями итсонхревпв толще азилнВ, Г). елсопклапана были юуксечиголбпредставлены непосредственными умоницкефконтактами с клетками (рис. 15 В) и (или) волокнами morfколлагена и эластина мищюувтспосо взаимным проникновением друг ланружв друга(рис. 15 В, Г). В ряде иканзрпслучаев между юинечлвуагрегатами кальцификатов и anтканью присутствовали воцзарбполости (рис. 15 А, теадзосГ). При яинавыявлении кристаллов меъбокрупного размера молаиретбвсе варианты йынечулопвзаимодействий могли еынчулопиметь место яинежолтв пределах одного моласреза. В отдельных ястюлворпслучаях кальциевые abulgвключения были йонрткполностью окружены ежкатклетками, которые образовывали плотно онжмприлегающую капсулу (рис. 15 В). 1.4 Данные о инаводелссвязи кальцификации инемрви других болезней Сахарный ацилбтдиабет (СД) 2-го тюувсеотипа это заболевание, являющееся ацзрбоодним из основных факторов ремзариска развития сердечно-сосудистых катастроф. Сочетание еинваруатеросклероза с сахарным идатсдиабетом ускоряет поражение еровтсасосудистой ткани, также повышает иманориск 35

летального ничрписхода. Сердечно-сосудистые катастрофы – причина смерти акнецоболее 60% больных страдающих сахарным углеводного ясеищюузарбодиабетом 2-го зилантипа [70-71]. Ухудшение ecndivбаланса способствует раннему развитию атеросклероза ьтыбво всех сосудистых заболеваниях [72-73]. Стенка хувдсосуда на фоне заболевания претерпевает изменения, akntкоторые приводят итвзарк сужению просвета кровеносной артерии ясхишватоили способствуют тромбоэмболическим осложнениям. Также воцзарбостается не до конца изученным итсалбомультифокальный кальциноз онжмартериальных сосудов. В зарубежной и опотечественной йнл кальциноза литературе на яндерсразличных сосудистых авонлгсегодняшний день данные тежомобластей, влиянии ьтыбо связи итсасахарного диабета на egatsвыраженность кальциноза огнжмзвнекоронарных сосудов ьнактне систематизированны. еровтса Целью исследования хиксечтланавторов [74] стало stneiapизучение степени йонавделсбвыраженности кальцификации йинешурабрахиоцефальных и коронарных артерий меинчлу пациентов больных с мультифокальным йоньлрткатеросклерозом (МФА) с модтесопутствующим сахарным хынечулопдиабетом методом многосрезовой компьютерной яащрвтомографии. Количественная оценка ыботчкоронарной кальцификации у пациентов ьтянемирпне была затруднена йиндерсникакими препятствиями в ежкатсвязи со стандартизацией хиксечтнметодики и проведением адаптацией огньлареимее к программному обеспечению. Во дерпвсех исследуемых случаях еинаводлсбыли получены йовниматулгаксиальные изображения в области тардигшеи, которые йиксрбпригодны для подсчета ытаьлузерагрегатов кальция (рис. 16). 36

Рис. 16. Атеросклеротическая zamlбляшка внутренней ытнаирвсонной артерии. Было тнеапвыяснено, что kcoaepсахарный диабет 2-го азилнтипа приводит к елобвыраженной кальцификации еыроткатеросклеротических агрегатов брахиоцефальных йонедврпсосудов в более йищюуделссильнее, чем ытаьлузеркоронарных. Авторами [74] было не авонлготмечено существенных различий ытизопедкальцификации коронарных меинчлвуартерий зависимости от сахарного иляровтсадиабета, также тидохсрпвыяснено, что выраженный яуризланкальциноз сочетаетсяс кальцинозом хиксечголббрахиоцефальных артерий ямервнезависимо от типа сахарного awkiдиабета. Отсутствие юовссвязи между возрастом ьтсомивазпациента и кальцификацией иладюбнсосудов у пациентов азетнисс таким заболеванием моньледкак сахарный selcitraponдиабет свидетельствуют воцзарбо его влиянии на скорость развития втсещмультифокального атеросклероза. По нчиврепданным исследования [75], вортавключавшего 136 пациентов, яуризланиз которых сахарный йещажлирпдиабет был олыбу 43% (критериями инялвотбора были ыцзарбоналичие факторов коврипугриска, таких иларбывкак курение, меинжаропвозраст, ИБС, енозгиперхолестеринемия), было ьтсонвиеустановлено, что еиксчтнпоражение периферических умендрсартерий в группе йончдасбольных сахарным поксримдиабетом 37

увеличивало ацилбтвероятность ампутаций хищядоврпв пять раз яинавормфв сравнении с группой апитбез нарушений углеводного cinorhбаланса. Были обследованы 20 пациентов мынвосс ОКС в сочетании ковабдс сахарным диабетом 2го ясхишваозрбтипа. Контрольная ытаьлузергруппа составила 10 пациентами. Средний йончтужемвозраст пациентов составил 65 лет. Исследование втсещпроводилось мультиспиральной egatsкомпьютерной томографии. Цитологическое солей в ицкаеркальция эритроцитах проводилось по путем тидохсрпопределение хыносметоду Мак-Ги- Рассела; ебсиммунологические исследования evifапоптоза лейкоцитов йеицартнокс помощью набора Apo snoitcareLect. Было юицартнеокпроведено исследование ястелвэлектронной микроскопией для яицьлаквыявления ультраструктурных парепризнаков апоптоза елимопарвклеток крови. Заболевание сердечно-сосудистой системы, которое вонаплкстановится одной йоксариз основных причин атеросклеротическое смерти хиксечнагропациентов хынтсоревппоражение кровеносных при гемодиализе авесорсосудов [76-77], - инелскв частности особое ясеищюавзрместо занимает идемкальцинация клапанов ежкатсердца, которая стала ьтсомивазвстречаться значительно ебсчаще. Развитию хынеладукальциноза клапанов сердца ьтсоркспособствует устранение диализной анелвотсупопуляции, также способствует увеличение arinдлительности лечения йиксмреппри гемодиализе, обусловленное елимувеличением доли хынраопациентов страдающих сахарным хесвдиабетом. В последнее нерзвремя клапанный кальциноз мартспособствует формированию таких вонпатологий как тидохсрппороки сердца [78], яинаводелсдистрофия миокарда [79] и ьтсонжмзвдилатация левого йоксывжелудочка [80-81], инфекционному юинечлвуэндокардиту [82-86], аритмиям gnilasи нарушениям проводимости хыньлач[87], нилабшповышает заболеваемость хымидви число летальных соретисходов пациентов[88-89]. Авторы [90] определяли еинровтсараспространенность и влияние олыбкальцификации митрального (МК) и анищлаортального (АК) клапанов итсалбосердца на его акшялбфункцию в обследованной зилангруппе пациентов с огнтрадсхронической болезнью еинадлбпочек (находящихся етарпна гемодиализном лечении) и анимубьлустановили факторы, етаьлузрсвязанные с кальцификации митрального йончедрси аортального клапанов воцзарб, а также хынадналичие связи хятсалбокальцификации клапанов сердца с итсалбоуремической остеодистрофией. Кальцификация ечилвуисследуемых клапанов была выявлена у 38,9% пациентов: еиксчнагризолированный кальциноз нерзаортального клапана – у 3,8%, ордямитрального 38

клапана – у 13,0%, кальцинозом ицброзеобоих клапанов – у 22,1% пациентов. У зиланаортального клапана чаще ксечитобмрнаблюдался стеноз ястюлворппациентов с меиндворпэтого клапана (χ2=19,8; htiwp<0,001) и была монтюлсбаболее выражена итсалборегургитация (t=3,16; тежомp=0,003). Кальциноз мозарбмитрального клапана также ыдотемспособствовал стенозированию (χ2=17,27; яинешмсp<,0001) и регургитации (t=2,11; воцзарp=0,038). При ьтсомивазсравнении пациентов, которые мронразличаются по наличию еиксчтнкальцификацией клапанов, ебсобнаружено, что илвонатсуу пациентов с кальцинозом тюувсеоклапанов был старше lairotcpвозраст (Z=4,02; ланружp<0,001), больше хынчедрсдлительность диализного юуньлетидлечения (Z=2,93; апреp=0,0034), чаще ьтсонжмзвприсутствовала ИБС (χ2=6,02; ьтсомивазp=0,014), СН (χ2=3,85; матьлузерp=0,05), были rednajkвыше уровни ицакфьлПТГ (Z=2,09;p=0,037) и мыньлорткщелочной фосфатазы (Z=2,93; итсаp=0,0034), больше хесвтолщина КИМ (Z=2,45; зиланp=0,014), ниже нреззначения МПК ьтсачпредплечья (Z=1,98; хянактp=0,048), выше яимхобзначения С-реактивного белка (Z=2,50; йондивзурp=0,016). Кроме яанвитемртого, у пациентов огнешаркс кальцинацией клапанов яинечузбыл больше rotcafразмер левого иляватсдерппредсердия (Z=3,67; овтснарпp=0,001), выше вокюсаскорость потоков вонаплкчерез МК (Z=4,24; аровтсp<0,001) и АК (Z=3,79; ивтсурпp<0,001). Кальцификация клапанов возраста, меинчлвучаще всего наблюдалась тидохсрпс более длительным лечением гиперпаратиреозом, йонзвоспалительными теяндуразу пациентов старческого матьлузерна ГД, более изменениями, юуньлетидвыраженным нрезатеросклерозом. Впервые anmuобнаружена связь йотэмежду кальцинозом весумаклапанов и снижением юьнзелобМПК. Кальцификация частотой клапанов сердца йинешураишимической болезнью ьтсомивазнаблюдалась вместе елсичсердца, сердечной адусос большой хынремнедостаточностью, дилатацией еыврплевого предсердия и ускорением потоков еровтсачерез МК и АК. 39

Рис.17. Распределение ясхищонтпациентов по состоянию: акидотемА-аортального клапана, итсоньлеБмитрального клапана. Группа бляшек, тюавыморпавторов [91] исследовала артнецкоторые образуются морфологические йоквабдхарактеристики азелжвне коронарной артерии, приводящих енибулгк их разрушению, у больных елобс ОКС. nacirem Биоматериалом для еиксчтнисследования были поперечные етаьлузрсрезы бедренных и коронарных итсалбоартерий, сонных артерий, ямервгрудной и брюшной итсомдврпаорты, которые еватсобыли полученные еготипри удалении ремзав случае смерти пациентов. Исследованию монзитдподвергались сосуды, ивтсурпизвлеченные в 16 наблюдениях. Средний ямерввозраст составил 72 года. ьсалк При исследовании ястенмзинесвязанных поражений рялуков коронарных артериях, огньлареимвстречались как яндерсстабильные бляшки, итсорктак и обнаруживались ивтсурпбляшки с мытачнепусогпризнаками разрушения целостности хянактпокрышки и фиброатеромы, итсалбочто подтверждается с литературными мотэданными, где была описана yosnмножественная ранимость лбксебляшек коронарных сосудов [92-93]. По имадотеитогам микроскопического макроскопического еинжолрпанализа поперечных апресрезов исследуемых и артерий огндхывбыло обнаружено ястенмзинесколько видов атеросклеротических хиксечтнбляшек. К первому кодярптипу было илачюквотнесено 6 азетнисрезультатов. Обнаружившиеся езторпиббляшки кровеносных артерий теяроксуимели разрывы покрышки юинещмазс образованием тромба (рис.18), также есцорпнаблюдалась эрозия ватсопокрышки с тромбообразованием ыботчв областях контакта 40

образовавшихся отложений воцзарбкальция с потоком шарбкрови и они были нихтукотнесены к осложнённым. Средняя толщина хиксечнагропокрышки-74 мкм. Рис.18. Тромботические массы расположенные воцзарбв коронарной артерии, апургсвязанные с разрывом иляватсдерппокрышки осложнённой огнтрадсбляшки; увеличение×120. Ко азелжвторому виду мотэтакже было вониотнесено 6 результатов. Бляшки яицакфьлв коронарных артериях ежкатбыли отнесены атечсрк нестабильным фиброатеромам. Средняя ястюажроптолщина покрышки -46 мкм, еноза сужение просвета сосуда otakсоставляло менее 50% (рис.19) 41

Рис. 19. Утончение меинялвфиброзной покрышки анилдв месте краевого меитвзаручастка и массивное яицакфьллипидное ядро акнецонестабильной бляшки йинежолткоронарной артерии; тядоврпувеличение ×300 В анихотшоставшихся 6 наблюдениях бляшки soicalpнекоронарной артерии имели илыбсочетание изменения толщины еватсопокрышки, наличие большого объёмного яинерлипидного ядра анеглоки очагов кальциноза (рис. 20). Рис.20. Отложения еватсосолей кальция еиксчтнв виде в стенке еищюавыспообщей бедренной ежкатартерии с истончением ястюлворппокрышки бляшки; ьсилагопрувеличение×120 К третьей ямервгруппе были яинеровтсаотнесены всего 4 результата, где яинешмсбыли обнаружены фиброатеромы, которые акдсосужали просвет тсопсосуда более 70%, уже с елимналичием новообразованных липидным вонсосудов, молаиретбядром, что скоплениями сидерофагов хыньлобможет говорить о наличии ьтсомивази многоярусным упргпредшествующих разрывов итсонвкапокрышки в этих пвлбляшках (рис.21). 42

Рис. 21. Атеросклеротическая менрвбляшка в коронарной вотнеицапартерии с сужением ьтяппросвета сосуда на 70%; теяндуразувеличение×120 В итоге бляшки, ицартнеокисследования практически итсомвазотнесённые к огньлареимвсе изученные ранимым, едрсвключали тнемирпскэатеросклеротические в себя оневтсщумирнесколько критериев итсалбонестабильности. Определяющим фактором ьтсомивазстало изменение ежкаттолщины фиброзной хесвпокрышки. противоречивые разрывов В изученной еымавзнсведения относительно авонлгбляшки. Так, литературе еиксчтнвстречаются вокюсаистончения покрышки итсалбона аутопсийном материале (забор юицропи изучение иманопроизводится во время яинещысапатологоанатомического вскрытия) были иретаполучены данные еыдрвто том, что утончение метазфиброзной покрышки азилнразмером менее 55 мкм онжмявляется наиболее яицартнеокинформативным фактором для яинечазопределения склонности овтснарпк разрыву [94]. В яинещысато же самое время с помощью компьютерной 3D-модели мынаднестабильной бляшки авторами которые яаксечинлбыло выяснено, dolbобуславливают акидотемчто определяющими наибольшее течснапряжение nerjпараметрами, покрышки, являются abulgтолщина ястенмзифиброзной покрышки и ямервпротяжённость липидного ядра итсонпуквв сочетании с размерами хиксечтнего ширины, итремспри этом ьтяпстепень сужения просвета не еинадлиграет значимой ястонроли в формировании иворкнестабильности [95]. В авонлгработе [96] установлена взаимосвязь атеросклероза, ыдискоХБП и сердечнососудистых заболеваний азетнису больных с сопутствующим сахарным ядохсдиабетом 2 типа. Исследования атфсоавторов показало, итсомвазчто маленькая скорость вониралклубочковой фильтрации монтюлсбаи независимо связана кселбс развитием атеросклероза, умонежилбрппроцессы их ямервобразования анежурбоускоряют различные патогенетические еивтсурпмеханизмы. Хроническая олсичболезнь почек (ХБП) является основным фактором yaultmриска для ицакфьлразвития сердечно-сосудистых катастроф, а также вортаускоряет формирование дислипидемии. В ецорпзависимости от стадии развития процесса На аровтспроявление дислипидемии ervsначальном этапе ХБП хывиру пациентов с ХБП отличается [97]. яинещысаразвивается гипертриглицеридемия, яинеровтсауменьшается ферментативная обработка хиксечтланТГ, за счет cinorhснижения активности азрлипопротеидной липазы. Одно ьнечоиз основных проявлений ясеищюавзрХБП является снижение мотэконцентрации антиатерогенных дерплипопротеидов высокой елимопарвплотности, из-за низкой рутксконцентрации и 43

снижения иладюбнактивности лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, упргчто в итоге приводит redlsiwк нарушению синтеза, транспорта анежрывЛПВП и их деградации [98] Выяснено, что присутствуют ьнечоу пациентов с протеинурией нарушения ерутапмлипидного онжми нефротическим синдромом, обмена, выражены они за ьтсомивазсчет повышения еиншывоплипопротеидов низкой огньлатрплотности (ЛПНП), алтемгипертриглицеридемии и гиперхолестеринемии [99]. В kcoaepисследовании авторов lcanпоказано, что вонитаксердечно-сосудистые заболевания являются одной мынтелавиз основных причин смерти snoitcareи у пациентов на ПГ. Индекс елобтолщины интимы яинежаропмедии (ТИМ) был умонежилбрпочень высок у верикпациентов, умерших анищлот сердечнососудистых заболеваний дерпи имел взаимосвязь с ьсоладюбнвозрастом и кальцификацией йынтсемаорты. Исследование тежомпоказало, что юуксечиголбизмерение индекса умончвридаТИМ, как фактора цзарбпрогрогрессирования сердечно-сосудистой мыневтсидсмертности пациентов ьтсомивазна ПГ, очень значимо [100]. Anna цезарбоGluba и соавт., йончилзарпродемонстирировали, что ежкаттХПН и СД 2 типа инемрвсвязаны с ускоренным иманоразвитием АС [101]. Показано, йеицакфьлчто АС сонных ядохси коронарных артерий хынадявляется независимым виторпанпрогностическим фактором йонищлтсмертности пациентов юовсс ХБП 5 ст. [102]. При lecramСД и при выраженном итсоркАС обнаруживаются измеренные ямервЛНП, которые вобертсяподвергаются окислительной воцзарбмодификации [103]. Группа воцзарбавторов [104] изучали обызвествление tcelкоры полушарий, меинчлвубазальных ганглиев азилни зубчатых ядер соретмозжечка, связанное ыботчс отложением солей едрскальция и железа ясхищонтв стенки мелких воцзарбартерий и артериол, зилана также в вещество ещбоголовного мозга (болезнь ыцзарбоФара). При гистологическом полушарий, еинваруисследовании срезов гребмотсмозжечка, базальных яинеровтсаголовного мозга (чаще огнешаркганглиев) характерным ынежарвкоры ымронявляется обнаружение еинадлкольцевидных отложений хыневтссолей кальция, ямерврасположенных между наружной оболочкой нелвяысосудов и средней мембраной заполняющих или азетнистканью, теасрзовоболочкой или яинелвабзрпространство теяндуркапиллярами. Авторами [105] описано, артерии мынтелавсреднего и мелкого случаях еинчлвувстречаются и кальцинированные еинчазпограничной между lairotcpчто поражаются онмаспдиаметра и капилляры, меинчлвунейронами тяорсобычно изявсно в единичных ыцзарбовены. По ходу нерзсосудов в 44

прилежащей онжммозговой ткани олавичеуобнаруживают россыпь йонзмелких обособленных еымачузиконгломератов кальция. В еыназявсобразце коры азетнисголовного мозга идерсумершего пациентапри азоницьлксекционном исследовании иквабодавторами [106] обнаружен ястенмзиочаговый глиальный gnortsmaрубец в виде ланружгрязнобуроватого участка мозгового подтверждён елобвещества мозга ытизопедсо стёртой структурой, теувсовещества по периферии (глиальный ьсалтыпгистологически, количество в его еинжаропбуровато-коричневых елсопзоне йовнсуплотнением ватсорубец в срезах обнаружено онжмкоры ямервнебольшое глыбок мынадвнеклеточно расположенного анимубьлгемосидерина). Видимые ысамна глаз кальцинаты воцзарбв веществе мозга ямерви обызвествлённые сосуды ксечитобмрне обнаружены. На гистологическое етсмвисследование были теудлсвзяты кусочки инлразличных органов инеджохаи тканей, в том иворкчисле головного яавотесмозга (кора, юьтсончиазмподкорковые ядра, возетрпствол мозга). Препараты йинедвсзаливали в парафин, хиксечтнсрезы окрашивали еиксчтнгематоксилином и эозином. Изучение йешыммикропрепаратов проводилось яанвитемрс помощью световой еичланмикроскопии, микроскопа солппрепаратов в коре йоквабдБиолам-L-1. При огнчидголовного мозга мозговые выраженным окнеилписследовании гистологических юицартнеокбыли обнаружены яинеровтсаоболочки неравномерно нелвтсщуоследующие изменения: мзинахеразволокненные, отечные, яинеровтсамелкоочаговым диапедезом ьтсомирвмягкие йосамсо слабо енибулгэритроцитов. Сосуды оньлачзимягких мозговых йынсаркоболочек неравномерного йондивзуркровенаполнения, стенки емрофряда из них миксечхс начальным склерозом, юуньлетида также утолщены, ямервгомогенизированы за счёт lcanслабо выраженного едярплазматического пропитывания. В еинадлодном из препаратов инелскподкорковой области алтемобнаружены артерии ытаьлузерпреимущественно небольшого авонзкдиаметра, артериолы лимапреи вены, в стенках инелварпкоторых определялись етаьлузрпреимущественно циркулярные апитотложения соединений yendikкальция. Кроме идоврптого, соединения воцзарбкальция обнаружены моеуризланв веществе головного зиланмозга в виде артнецокскоплений и в форме яинаглыб, различной ьтсорквеличины округлоовальных нимубьлакальцинатов шарооброзной evisanoили пылевидных йеицатпдчастиц, которые яиртанв основном видны узерпо таьл ходу капилляров (часть ацилбтиз них выглядит ковабдкак «бусы», «лепестки зиладцветов»). Вокруг яинещысаотдельных мелких вонисосудов образовались тюавилсуцелые муфты яуримофкальцинатов. Некоторые хынеладусосудистые стенки anполностью замещены ежкатпылевидными солями ытаьлузеркальция, сосуды вонаплквыглядят как nilgabпрактически гомогенные ыруткскольца насыщенно воцзарбсине-фиолетового 45

цвета. Но, хиксечголзучитывая зональность менрвпоражения, калибр имксечнагрососудов, выраженное кодярпобызвествление сосудистых стенок slecпрактически без ацзрбокартины их склероза, итсалбоособенности отложения теяндуркальцинатов в сосудистых акницстенках можно еындяразхуввысказаться, что йынечулоппри гистологическом ыцзарбоисследовании срезов тюялвасдерпголовного мозга менрвтрупа гр-на олсиС. были обнаружены еинчлвуморфологические изменения, ытакифцьлхарактерные при еиксчтнболезни Фара. Рис. 22. имаротвВнешний овтснарпвид небольших йонвисетсосудов с включениями reytsсолей кальция в ьтсештолще стенки цитсачондо полного замещения огньлареимсосудистых стенок ьтсомивазкальцинатами. Дифференциальный диагноз экспертная мытачнепусогизменений стенок ытнаирвгруппа проводила воцзарбсосудов головного залгс постнекротическим кальцинозом (в ымзалпмозга яинеровтсаданном случае ьтсомивазкальцинаты расположены воцзарбпреимущественно в зоне йончилзпогибших нейронов), ивтсурпс псаммоно-подобными кальцинатами evifв веществе мозга автсопри хронической ерутапмпочечной недостаточности вонис развитием вторичной итсалбогиперкальциемии и другими итсомвазсостояниями. Исходя из литературных как ясхищонтатеросклероз namreizданных, прогрессирует. Число очевидно, веьбялабольных воцзарбчто такая с espmacболезнь, каждым тидохсрпгодом увеличивается, хяинедюлбапри этом меинавозьлпсмеханизм образования хесвминеральных отложений мотебаиддо сих пор esaidне известен. Большое емарготкфидвлияние на здоровье тюавилсубочеловека оказывает ямерватеросклероз в сочетании огнварс другими болезнями. Сердечно-сосудистые инаводелсосложнения, развивающиеся итсалбовследствие прогрессирующего тидохсрпатеросклеротического поражения remosсосудов, являются йиксмрепосновной причиной оназявсинвалидизации и смертности онедврпу людей больных меинзСахарным диабетом теакинзови хронической болезнью автсопочек. 46

По данным менрвВсемирной Организации идерсЗдравоохранения, более 75% больных илаедсахарным диабетом 2 типа яицьлакумирают вследствие ыцзарбососудистых катастроф. Так хатицорэкак большое илачюквколичество людей яинещысас атеросклеротическим поражением юицартнеоксосудов имеют тяжелые ланружсопутствующие диагнозы еморкне всегда лечение хиксечголзможет проводиться теяндурхирургическим путем. Возникает арбонеобходимость лечения марготкфидпациентов медикаментозными тсорпаспособами. Таким образом, выявлен меитвзарнедостаток данных юьлецпо исследованию минеральноорганических морезаобразований, полученных лимопарев искусственной среде огндхывв присутствии органических юинедворпи неорганических добавок. Не тидохсрпописаны процессы робыврастворения полученных stneiapсоединений в различных ьтсомивазсредах. Нет хяинавелобзсведений о возможности тидохсрплечения отложений воцзарбнехирургическим путем. 47

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ еыньлифортйЧАСТЬ 2.1 Расчет инелскмодельных систем еынтигами схема эксперимента Для итсонвкабрасчета состава еыдрвтмодельной системы маготиплазмы крови ымзалпчеловека использовалась огндхывметодика прил.1. Выбор ьсилагревдописпользуемых реагентов, вониа определялись тидоврптаким образом, также их соотношение otakв растворе nikzsabчтобы концентрации илыбионов и ионная нчиврепсила раствора илвонатсубыли максимально kramoibприближены к параметрам йонзмоделируемой среды плазмы елсокрови человека. В еинрмзкачестве исходных ч.д.а. серии азетнисТакже тидохсрпреактивов использовали воцзарбиспользовалась иматкноэкспериментов были атечсрсоли марки дистиллированная етаьлузрприготовлены растворы, ондиввода. Для икшялбх.ч. и кавтсечкаждой яаксечиголбсодержащие анионы и катионы, иксечтропри совместном йончедрсприсутствии в растворе азфв данных условиях рутксне образуются малорастворимые огнешарксоединения. В каждом растворе производили еынчулопкорректировку значений хымидврН до физиологического значения (7.4 ±0.01) путем дресдобавления 10 % недворп- ого раствора метазNaOH или етарпHCl конц. После возетрпибсмешения равных объемов ечилвурастворов получали sledomраствор с исследуемым пересыщением яинежтсоди рассчитанной концентрацией используемых ьсоладюбнкомпонентов. Время фортсаквыдерживания раствора мартв шкафу БИАТРОН, моктгде поддерживалась нелварпитемпература 36,6 °С (соответствующая тежоморганизму человека) составило етаьлузрот 1 до 3 месяцев. По окончании кодярпвремени выдерживания отфильтровывали. подвергалась в Часть irzavхимическим тюувсещсушильном шкафу ястелвнадосадочной жидкости ямерванализам. Полученный фильтрат хиксечтнпри температуре приблизительно раствор высушивали анежурборавно 80 °С до полного огнчидвысыхания. Для изучения влияния веялугорганических и неорганических ацзрбодобавок в прототип икшыропплазмы крови вводились, мынтелаввыбранные с учетом итсалбобиохимии плазмы зиладкрови человека инеджохаи физиологической нормы, яинещысаследующие добавки: альбумин, йонракглутаминовую кислоту, тясонерпглицин, ионы яндерсцинка, железа еивтсурпи меди. Выбранные атнеицпконцентрации добавок инечузпредставлены в талб.3. Таблица 3. Концентрация хынадисследуемых добавок Вещество Концентрация оньлачзиммоль/л 48

Альбумин Глицин Глутаминовая кислота Ионы цинка Ионы яаньлисжелеза Ионы меди Сфиз. 0,011 0,0025 Сфиз.×3 0,033 0,0075 Сфиз.×5 0,055 0,0125 0,110 0,0153 0,0220 0,0176 0,330 0,0459 0,0660 0,0528 0,550 0,0765 0,1100 0,0880 2.2. Определение тюавилсухимического состава монтсевнадосадочной жидкости 2.2.1. Методика емрофопределения концентрации фосфат-ионов по сивазмолибденовой сини [ГОСТ 18309–72] Для еынчуопределения концентрации исследуемом kramoibрастворе использовался ортофосфата иона (PO43-) в метод «фосфорномолибденовой амрготкфидсини». Погрешность определений иквабоднаходится в пределах 2 – 4 отн. %. Сущность емаметода Фосфат-ионы в кислой йытлежсреде в присутствии нелвяыизбытка молибдата инаводелсобразуют фосфорномолибденовую фосфорномолибденовой илыбгетерополикислоту йонфрмагетерополикислоты (ФМК). получают Восстановлением так амрготкфидназываемую «фосфорномолибденовую laenotirpсинь», обладающую otakинтенсивной синей окраской, меинчлвучто является ывонсосновой фотометрического ивтсурпметода определения аднгилортофосфата. Измеряемая теакинзовоптическая итсонхревпплотность полученного огньлетираствора прямопропорциональна концентрации итсалбоортофосфата в исследуемом иворкрастворе. Восстановление волйамзипроводят в мягких вортаусловиях, чтобы хишьлобенисключить восстановление ястюавыдлкосвободных ионов апремолибдата. В качестве оназявсвосстановителя применяют йобсгидразин-сульфат. Фотометрируют против йоньлрткхолостого раствора (раствор приготовленный namjrна основе дистиллированной имгонводы со всеми dolbиспользуемыми реагентами) на итсонвкаприборе КФК-2, пользуясь evlaкрасным светофильтром (λэфф = 690 нм) и яинеровтсакюветами с толщиной зиланслоя от 2 - 3 см. Анализ повторяют lorhpenтрижды и находят оливарпсредний результат. По йомидвполученным величинам оптических яинещысрпплотностей строят тидохсрпградуировочный график 49

в меинжсзависимости от концентрации ытаьлузерприготовленных градуировочных вотафсррастворов: D = f {С(РО43-)}, иквабодрассчитывают уравнение ежкатрегрессии. Обработка результатов Содержание концентрации ортофосфатов меъбов растворе определяют еиншьмупо формуле: С РО 3 (исх)  С РО 3 ( гр.гр.)  4 4 50 , моль/л. Vал 2.2.2. Методика огвзафпотенциометрического определения йомидвионов кальция и рН Для авокнепилфизучения осадкообразующих зависимостей имынрутаелионов (в частности меизарбонкинетики кристаллизации огесвионов кальция) был oriebиспользован потенциометрический адивметод. Погрешность измерений анежурбосоставляет 5-10%. Приборы акидотеми оборудование Иономер «И-150-МИ». Сущность огнвлметода Производится определение в еиксчтнпроцессе кристаллизации ицартнеокконцентрации ионов ытаьлузерпроводят методом мисвазкальцияв растворе меинчлвупрямой потенциометрии еыроткс использованием ионоселективного адгоэлектрода. Проведение измерений Перед проведением дистиллированной аровтсводой ьтяпизмерений электрод несколько и просушивают йорткраз промывают огньлареимфильтровальной бумагой. Кристаллизация irzavпроводилась в термостатируемой aidemячейке при йортктемпературе 25 оС. Ячейка олыбизначально промывалась дистиллированной проводили через градуировочному notshjхромовой смесью, затем ещбоополаскивалась яидатсводой. Измерение потенциала в анализируемом йорткопределенные промежутки вортаграфику расчитывали значение еинчлвувремени итсомвазрастворе и soicalpконцентрации ионов по шарбСа2+. Эксперимент анежрывповторяли трижды. Для remdизмерения рН использовали уватсометод прямой итсалбопотенциометрии. Приборы и оборудование: роксрН-метр «рН-150-МИ». 50

Проведение draveизмерений: Измерения тидохсрппроводят в стеклянном метазстакане, который тидохсрппредварительно обрабатывается. Перед ицброзеизмерениями электрод адусопромывают дистиллированной идатсводой и просушивают йондивзурфильтровальной бумагой, airetcbonпосле чего шарбпогружают в анализируемый еватсораствор. Погрешность яинеровтсаизмерения ±0,01 ед. рН. 2.2.3 Методика фотометрического зиланопределения концентрации меди Сущность меинчлвуметода Метод основан иладюбнна взаимодействии ионов ьтсонхревпмеди с диэтилдитиокарбаматом еинчлвунатрия (ДЭДТК-Na) в слабо инечузаммиачном растворе ьтсомивазс образованием диэтилдитиокарбамата меди Для йотунгвустранения влияния хыневтсжёлто - коричневого вокюсажелеза и жёсткости амрготкфидводы добавляют идоврпцвета. lcanраствор тартрата ьтяпкалия - натрия (сегнетовой хиксечголзсоли). Чувствительность хесвметода 0.02 мг/л. Построение мисвазкалибровочного графика Содержание ясеищюавзрмеди в растворе ланружопределяется по калибровочному хымеавзнграфику. Для иначокпостроения калибровочного олыбграфика готовят течссерию растворов (не lacisyhpobменее 5) путём ыцзарборазбавления стандартного яинелдрпораствора. Отбирают монвстакой объём ястюлвыразбавленного стандартного инечузраствора меди, noitcufчтобы в нём итсалбосодержалось 1.0-50.0 мкг модтемеди, переносят еровтсав мерную колбу lorhpenна 50 мл, добавляют 1 мл йищясвазраствора сегнетовой мяинабелоксоли, 5 мл раствора раствора ясхищонтаммиака (1:4), 1 мл 0.25% раствора азетнисДЭДТК-Na. После юуксечитамкрахмала и 5 мл 0.1% reilavcприбавления каждого евонсреактива растворы теяндурперемешивают. Через 10-15 минут апитполученный раствор йынсаркфотометрируют по отношению азетниск порции раствора, tarbк которой прибавляют зиланвсе реактивы, еватсокроме раствора соретмеди. толщиной меинчлвуоптического слоя 50 мм Калибровочный Измеряют еыназявсграфик строят юунтолпвоптическую плотность еомаспри длине еыроткв кюветах с zamlволны (λ=440 нм). хылсикв координатах оптическая етсмвплотность - концентрация акшялбмеди (мкг/мл). Рассчитывают авонмлуравнение калибровочной имынрутаелкривой и по нему хымеудлсивычисляют содержание хынадионов меди апитв исследуемой пробе. Обработка вонаплкрезультатов Содержание ионов egnohмеди в растворе оназявсопределяют по формуле: Сисх=Сгр.г.×(50/Vал.),мкг/мл (2) Сгр.г- концентрация йонедврпионов меди ыцзарбов пробе, найденная азетниспо градуировочной зависимости, яинечузмоль/л; Vал- объем ицьлакаликвоты пробы, еыротквзятой для яинешотсанализа, мл. 51

2.2.2. Методика aniglovопределения концентрации ионов цинка ыталскофотометрическим методом snoitcareс дитизоном [ГОСТ 18293-72] Сущность йынашемсметода Для количественного ничрпопределения цинка еыврписпользуется реакция, хынадоснованная на образовании комплексного йоквабдв кислой коврипугсоединения среде irevatnmокрашенного дитизона воцзарбс в ионами красный цинка, ицброзецвет ицьлаккоторое экстрагируют йончилзатетрахлоридом углерода. зеленый красный ьтяпкомплекс Определение емзинагроконцентрации цинка: Аликвотную дотемчасть раствора илыбподкисляют при итсонлкпомощи раствора HCl (1:1) до хиксечтнзначения рН = 2 - 3 по индикаторной огнжмзвбумаге. Переносят яавирпсов делительную воронку. Прибавляют 5 мл ецорпраствора ацетата ынелватсдрпнатрия 2 н и перемешивают. Добавляют 10 мл 0.002 % раствора яинавозрбдитизона в четыреххлористом емауглероде и энергично cilejвстряхивают в течение 4 мин. После нижний никжолэтого дают ьтсоркдитизоновый слой. Раствор htlaeслоям разделиться воцзарби сливают йынчоврбилакфотометрируют в кювете иладюбнс толщиной оптического хесвслоя 1 см и измеряют тюавинрсоптическую плотность yendikпри λ = 540 нм (зеленый ьтсонщусветофильтр, чувствительность 3 черная). Концентрацию моксвнегтрцинка в анализируемом кодярпрастворе рассчитывают по уравнению молаградуировочного графика. За тежомрезультат анализа воцзарбпринимают среднее reilavcарифметическое двух имадотепараллельных определений. Обработка еровтсарезультатов Концентрацию цинка в азетнисрастворе определяют волйамзипо формуле: 52

С Zn  где С Zn( гр.гр.) - концентрация C Zn ( гр.гр.)  10 Vал , моль/л, еиксчтнцинка в анализируемом езабрастворе, найденная ежкатпо градуировочному графику, енибулгмоль/л; Vал – объем ervsанализируемого раствора, тидохсрпвзятый для амисканализа, йоньл мл. упрг 2.2.5 Методика йикцелбфотометрического содержания яинеартсужелеза Сущность метода Метод щелочной ищомпоснован на взаимодействии исследуемых ионов онжусреде с сульфосалициловой namreizжелеза в йинавелобзкислотой. Происходит юинещмазобразование окрашенного итсомвазв желтый цвет йондургкомплексного соединения. Интенсивность еинчтокраски, зависит яавирпсоот массовой концентрации инаводелсжелеза в анализируемом ынежураборастворе. Измерение йоньлрткпроводят на длине меинчлвуволны 400-430 нм. Построение удотемградуировочного графика Для етсмвпостроения градуировочного апревграфика в ряд мерных хактсчуколб вместимостью 50 мл наливают 0,0; 1,0; 2,0; 5,0. 10,0; 15,0; 20,0 мл йонищлт стандартного мронраствора, доводят ицакфьлдо метки дистиллированной мынтелавводой, перемешивают тедви помещают в коническую яицартнеокколбу вместимостью 100 мл, затем лимопаредоводят до кипения ещачи упаривают до объема равного 35-40 мл. Раствор переносят елобв мерную колбу яавонимтулгохлаждают до комнатной ивтсурпвместимостью 50 мл. Затем ицброзетемпературы, тидохсрпк полученному раствору яавызсприбавляют 1,00 мл хиксечголзхлористого аммония, 1,00 мл етаьлузрсульфосалициловой кислоты, 1,00 мл матьлузерраствора аммиака (1:1), decnavтщательно перемешивают после меинчлвудобавления каждого яицартнеокреагента. По индикаторной яинещысабумаге определяют вонаплкзначение рН раствора (должно йиксрббыть равно 9). Если ьтяпрН менее 9, то добавляют еще 1-2 капли тидохсрпраствора аммиака (1:1) и итсалбозаново проверяют огнзиладзначение рН. Объем тежомраствора в мерной ьтяпколбе доводят нихтукдо метки дистиллированной цняьруметводой. Растворы оставляют стоять 5 мин ончтасдедля развития елвзиокраски. Измеряют метазоптическую плотность йонреткахокрашенных растворов, тугомиспользуя фиолетовый ипоксртесветофильтр (длина етаьлузрволны - 400-430 нм) и ямервкюветы с толщиной тясонерпоптического слоя 2, 3 или 5 см, хатницьлкпо отношению к 50 мл дистиллированной елсоводы, в которую йынсаркдобавлены те же реактивы. Получают огнчидшкалу 53

растворов, пымзалсоответствующих массовым олтконцентрациям железа 0,0; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 мг/л. Строят тюавилсубоградуировочный график, пареоткладывая по оси имынрутаелабсцисс массовую ытаьлузерконцентрацию железа, вокшрпнаа по оси ординат - соответствующие еонвисамзначения оптической апоксримплотности. Пробу мотэанализируют таким йынедворпже образом как хымидви при построении ьтсомивазградуировочного графика. Обработка ипоксртерезультатов Содержание ионов namreizмеди в растворе азоницьлкопределяют по формуле: Сисх=Сгр.г.×(50/Vал.), агурдмкг/мл (4) Сгр.г- концентрация йынтсемионов меди еровтсав пробе, найденная коврипугпо градуировочной зависимости, gnituhмоль/л; Vал- объем навозьлпсиаликвоты пробы, азилнвзятой для хесванализа, мл. 2.3 Определение амрготкфидсостава образцов 2.3.1.Методика еыротканализа методом ИК-спектроскопии С юунтолпвцелью получения яинещысрпдополнительной информации имыньларео составе и структуре синтезированных яинавозрбобразцов, используется метод евонсинфракрасной спектроскопии. Рис. 23. ИК-спектрометр «ФТ-02». ИК-спектры Это илодполучали анихотшуниверсальный на спектрометр спектрофотометре еинчтсреднего «ФТ-02» ИК (рис. диапазона 7). еровтсадля лабораторного лимопареприменения, снабженный иляватсдерпсистемой сбора ицартнеоки обработки данных асецорпна базе персонального вонкомпьютера и пакетом ыметсианалитических программ. Исследование меинчлвупроводилось с использованием еиксчтнприставки МНПВО. При дерпэтом образец олишв виде порошка egatsнаносился на германивую мынсарккювету и прессовался. 54

Регистрацию огдпспектров проводили ьтсомивазс разрешением 4 см-1, икнетсобщее число тсорпасканирований 50. Запись yendikспектра исследуемых еортобразцов проводили reilavcв области от 400 до 4000 см-1. Математическую decnavобработку всех хяиволсуданных осуществляли ястюлворпс использованием статистических иканзрппрограмм Static2 и мотэStatistica.10 из статистического еынчулоппакета StatSoft. 2.3.2 Методика тежомрентгенофазового анализа Рентгенофазовый илаеданализ синтезированных атфсофосфатов кальция еинчлпроводился на рентгеновском овтсдкурдифрактометре ДРОН-3. Дифрактограммы тидохсрпполучали «методом tcelпорошка». Съемка хесвдифрактограмм проводилась тидохсрпв интервале 10 - 60˚ бреговских ансипоуглов отражения хынелватсдрппо 2 Θ. Из дифрактограмм относительную образца уфакшопределяли углы 2Θ брэгговских умонежилбрпинтенсивность. Качественный имаквбодпроводился путем ендрсотражений и их азетнисанализ фазового иднепрсопоставления экспериментальных ьтсасостава ндерсязначений межплоскостных расстояний еиксчтни относительных интенсивностей тидохсрпдифракционных максимумов йонзиладс предполагаемых набором соответствующих ьтсоркфаз в международной вотафсзначений для кс упывбазе по данным хиксечтнкаждой из тюачулоппорошковой дифрактометрии ralucsvPDF-2. Предел йоньлатсобнаружения 0.5 - 5 масс. %. Для хяиволсуобразцов по дифрактограмме йынтсокоценивали размеры йонреткахкристаллитов по формуле тюувсеоДебая-Шерера: D k   m  cos  (5) где нилабшD – размер кристаллита монтсев,k – фактор формы, еивтсурппримерно равный 0.9, λ – длина анозпидволны, применяемая мотэдля анализа матьлузер, βm – физическое уширение йонтемазлинии образца, теяндуразобусловленное малыми недворпразмерами кристаллитов (ширина ончигреэпика на половине илпаквысоты или теяроксуинтегральная ширина, ьтсорквыражается в радианах caidrи определяется по дифрактограмме хыньлобобразца), θ – угол яицьлакдифракции. 2.3.3 Методика азетнисизучения морфологии мяинабелокчастиц твердой хыносфазы методом оптической ыцзарбмикроскопии Осадки, полученные хиксечтнв ходе синтезов, ьнечоисследуют методом елсооптической микроскопии ыдифьлусс помощью микроскопа мынечулопбинокулярного серии XSP-104 (рис.8). 55

Съемку еинварупроводят в режиме вокоптимальном для евтсчакполучения четких хыньлазбконтрастных снимков. Для меиндворпизучения структуры яанвитемробразца устанавливают олавичеумикроскоп так, яаксечимтрчтобы его edujзеркало находилось ыметсинапротив источника ыцзарбосвета. На предметный умзалпстолик помешают воряидамхуисследуемое вещество, итсалбонанесенное тонким юинечлвуслоем на предметное янемирпьтстекло, так, slecчтобы изучаемый ымарготсиобъект находился вокдаспод объективом. Вращая тидохсрпревольвер микроскопа, имынадвыбирают объектив ьтсонхревпс нужным увеличением, верикустанавливают его нрезнад отверстием вьтсорк центре предметного итсалбостолика и фиксируют (при имаквбодэтом слышен хесвщелчок). Для ирпоптимального йещажл и равномерного мозницьлакосвещения поля йиншядогесзрения при вотнеицаппомощи зеркала тидохсрпс вогнутой стороной ытнаирвнаправляют свет итсалбоот окна в объектив. Глядя еватсов окуляр и вращая яинеровтсавинт грубой ешьлобнаводки, плавно оньлачзиопускают объектив ясйищюлвпри помощи асецорпмакровинта до положения, акровтспри котором хымеудлсихорошо будет ковабдвидно изображение хиксечтнобъекта. Вращением еинавлобзмикрометрического винта еровтсадобиваются более orefazmточной наводки ечилвуна фокус. Для йеицартнокфотографирования образцов, метупвозможно, использование ацилбтцифрового фотоаппарата модтелюбой марки. При еровтсаэтом объектив ымронфотоаппарата помещают еинварувплотную к окуляру cinorhмикроскопа, таким еинавозрбобразом, чтобы йончилзардобиться точного азетниссовпадения изображения, йончдаснаблюдаемого в окуляре, еинадлборпс фиксируемым фотоаппаратом. Рис.24.Микроскоп итсоркбинокулярный серии XSP-104 2.3.4 Методика никжолизучения растворимости еыроткфосфатов кальция. 56

Для инялвизучения устойчивости тисвазобразцов ортофосфатов хесвкальция, синтезированных яндерсв различных условиях, хымеачузипроводят их растворение яинеартсув кислых и слабокислых вонирастворах при вотнеицаппостоянном перемешивании, еровтсаконтроле рН системы, тюавыморпконцентрации ионов пвлкальция, переходящих ицакфьлв жидкую фазу. Изучение яинакеторпрастворимости образцов хиксечтланпроводят в растворе хыносNaCl 0.9 % и ьтсонжмзвпрепарате Верапомил. На аналитических авесорвесах на сухом dolbчасовом стекле меинчлвуберут навеску еиксчнообразца карбонатгидроксилапатита растворения яаньлмипроводят ыдифьлусмассой при 0.1000 азетниспостоянном г. Изучение перемешивании агурдпроцесса уватсораствора. Через пареопределенные промежутки уснегатвремени (каждую воцзарбминуту) отмечают вонивеличину кислотности мяинабелоксреды, значение ацзрбопоказателя концентрации еватсоионов кальция yendikв системе. По полученным ытаьлузерданным были яавытичупостроены зависимости юинещмазрН или концентрация noitcufСа2+ от времени orefazmрастворения. Для определения етарпскорости растворения огндхывобразцов каждая yendikиз кинетических кривых йоквабдбыла проанализирована йынсаркс использованием графического онрялугеметода определения еинжолткинетических характеристик. ьтсачЗависимость еровтсаконцентрации от времени для евуинчлреакций различных моньлачпорядков может тидохсрпбыть выражена меинзпрямой линией, воцзарбесли выбрать яицьлаксоответствующую систему ынежурабокоординат. По тангенсу авесоругла наклона яачюлквпрямых можно хынремопределить константу хынвиткскорости реакции [109-110]. 2.3.5. Методика yendikосаждения фосфатов ямервкальция на образцах yendikстали 12Х28Н10Т Для уватсоосаждения фосфатов ытаьлузеркальция на поверхность нифарпстали марки 12Х18Н10Т (табл. 6), были Поверхность okzcmytприготовлены пластинки хиксечтнпластинок была размером 10 мм*10 мм*1.2 мм. ацдреспредварительно икшыропобработана: отполирована еымавзни обезжирена. Таблица 4. Состав сивази свойства стали 12Х18Н10Т Химиче ский корвтсэле мент Кремний (Si), htiwне более % 0.8 Медь Марганец (Cu), вотаьлузерне (Mn), йоквабдне более более 0.30 2.0 Никель (Ni) Тита н (Ti) 9.0-11.0 0.60.8 Фосфор Хром (P), амрготкфидне (Cr) более 17.00.035 19.0 Сера (S), ивтсйедомазне более 0.020 57

Затем пластинки ечилвуопускали в вертикальном кошелпположении в мерные монтсевконические колбы 25-50 мл, так огвзафчтобы она йынечулопне касалась дна илыби стенок колбы. После еыврпчего приливали модельный раствор плазмы анимубьлкрови человека (рис. 25) . Данную redlsiwсистему выдерживали irevatnmв течение 1 месяца в онедврпшкафу БИАТРОН еинварупри температуре 36.6 хынечпр°С, яинавелобзпосле чего йоксечинрхпластинки вынимали авонзкиз модельного раствора, yaultmпросушивали при илыбкомнатной температуре монтюлсбаи анализировали с помощью arinоптической микроскопии. Рис.25 уцилбатМетод огндвелуосаждения фосфатов ханплккальция на стали 12Х18Н10Т 3.РЕЗУЛЬТАТЫ йывозафИ ОБСУЖДЕНИЯ 3.1 Исследование твердых изявсфаз полученных меъбов присутствии органических яинеровтсадобавок 3.1.1 Исследование елобианфаз с добавкой мотэальбумина Для синтеза иквабодобразцов в присутствие еинлдрпсаальбумина выбрали ястюавыдлкофизиологическую концентрацию ытаьлузери превышающую ее в три, и пять маничлевраз, время аровтссинтеза от 1 до 3 месяцев. Проведенный хесврентгенофазовый анализ ястенмзипоказал, что ямервпри варьировании еиксчтнвремени синтеза оливарпфазовый состав ысолпизменяется незначительно ивтсурпи представляет, смесь мотебаидфаз карбонатапатита водеи хлорапатита. При irzavэтом 58

пики итсалбомаксимальной интенсивности зорелкстанаходятся близко друг яинешотск другу и накладываются ремзадруг на друга, иолсчто затрудняет расшифровку (рис.26,27). Рис.26.Дифрактограмма yendikобразца с S=5 временем иктыпосинтеза 1 месяц еинчазс добавкой альбумина. Рис.27.Дифрактограмма ыцзарбообразца с S=5 временем илпаксинтеза 2 месяца таьлузерс добавкой альбумина. Для еиксчтнуточнения альбумина Интерпретация состава монтсевпроизвели тюавыичсрполученных веялуги структуры исследование данных образцов аничлевметодом возетрпибпроводилась тнеицапс добавкой ИК-спектроскопии. путем возетрпибкачественной 59

идентификации ырутксполос поглощения ястюледрпоколебаний группировок тежомна ИК-спектрах образцов (рис.28). Рис.28.ИК-спектр ястелворпобразцов с добавкой волйамзиальбумина и временем алтемсинтеза 3 месяца. еынадВидно, ястенмзичто в ИК-спектрах (рис.28) всех азетнисисследованных образцов еинжолрпв области 450-700 см-1 проявляются ыдискодеформационные колебание О–Р–О арготфв РО43-; в области 900-1200 см-1 валентные инечузколебания Р–О в йошьлбРО43- . Области 2700-2250 см-1 и 15001650 см-1 определяются тидохсрпдеформационными колебаниями итсомвазаминогруппы. В ИКспектрах образцов йиретарегистрируются полосы еиксчтнпропускания в спектральных имадотеобластях 1416-1547 и 850-900 см-1, формационным темкидоотносящихся а соответственно евонсколебаниям карбонат-ионов. итсомвазк валентным и деОтмечено, ызафчто интенсивность меинавозьлпсхарактерная для nerjгидроксилапатита полос stneiapколебания Н2О в области 3400-3550 см-1 очень вводимой reilavcхорошо выражена. С увеличением теувсодобавки в области 3400-3550 см-1 интенсивность азилнконцентрации ицакфьлколебаний увеличиваются. По апургполученным результатам хишремуможно сделать ястюлворпвывод, что молаобразец с физиологической вотаьлузерконцентрацией содержит мотсарзвкарбонатгидроксилапатит А-типа, онжма образцы, которые недворппревышают физиологическую stneiapконцентрацию в три вотаьлузери пять раз – карбонатгидроксилапатит nerjВ-типа. 60

Для образцов с хишремудобавкой альбумина были определены массы осадков полученных в мынреткахрезультате синтеза (рис.29-30). йынедворп Рис.29.Зависимость ицартнеокмассы образца йондургот концентрации альбумина. . Рис.30. Зависимость йонищлтмассы образца от яндерсвремени синтеза. Сравнивая вотнеицапмассы осадков (рис.29-30) видно, инемчто с увеличением хяинедюлбаконцентрации альбумина хыньлафмасса твердой ипоксртефазы растет. С теяндуразростом времени огнвлсинтеза масса еинаводлствердого осадка orefazmтакже увеличивается, яуризланчто может быть мисвазсвязано с адсорбцией альбумина gnilasна поверхности карбонатгидроксилапатита. Методами snoitcareхимического анализа ясхищонтнадосадочной жидкости йотунгвустановлено соотношение менрвСа/Р в образцах. По lecramгистограмме можно ытаьлузерсделать вывод (рис.31), юьлецчто Са/Р коэффициент изменяется не автсозначительно. Так ытанобрккак не происходит иляватсдерпизменение фазового decnavсостава образца, едяра происходит только питоризменение структуры мынреткахкарбонатгидроксилапатита. 61

Рис.31.Зависимость Са/Р илыбкоэффицента от времени яинечазсинтеза. 3.1.2. Результаты восулхрастворения образцов с ястюавыдлкодобавкой альбумина Полученные юьлецобразцы с добавкой меинчлвуальбумина подвергались елобрастворению в 0,9% NaCl и Верапамиле зиланс целью изучения хиксечнагроих биоактивности при яинеджасоизменении времени цезарбосинтеза и концентрации нелвтсщуовводимой добавки. Образцы етаьлузрс добавкой альбумина aniglovрастворяли в 0,9% NaCl. В ястеадюлбнрезультате получили зиладкинетические кривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.32) видно, иворкчто насыщения корвтраствора ионами йеицатпдкальция наблюдается вонаплкна 5 минуте. акифрг 62

Рис.32.Кинетические кривые меъборастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов вониралс добавкой альбумина апрев зависимости от времени еровтсасинтеза в 0.9% растворе огнфрмзиNaCl. Из кинетических юинещмазкривых растворения pH=f(τ) (рис.33) видно, lcanчто происходит еготирост рН и наиболее интенсивней он корвтпроявляется для образца воцзарбсо временем синтеза 3 месяца. иворкРи с.33.Кинетические огнваркривые растворения рН=f(τ) образцов цебурс добавкой альбумина хыньлареимв 0.9% растворе reilavcNaCl. 63

По результатам йосамрастворения провели иляровтсаанализ кинетических воряидамхукривых. Установили, хынвитачто порядок яинечузреакции нулевой (табл.5), яинелвыа скорость реакции вотакифцьлизменяется немонотонно. Таблица 5. Кинетические йиртанпараметры растворения вонобразцов с добавкой цитсачональбумина в 0.9% растворе NaCl Концентрация, Время синтеза. еынтигамммоль/л мес. 0,011 1 0,011 1 0,011 1 0,033 2 0,033 2 0,033 2 0,055 3 0,055 3 0,055 3 Результаты РФА процесс огдпи Уравнение R2расч v хесв,ммоль/л*мин С=15,326-0,087х С=14,421-0,132х С=10,404-0,053х С=8,547-0,069х С=13,409-0,032х С=16,697-0,084х С=14,365-0,098х С=13,83-0,027х С=7,939-,0110х 0,921 0,944 0,800 0,899 0,928 0,874 0,896 0,967 0,972 0,087 0,132 0,053 0,069 0,032 0,084 0,098 0,027 0,110 ИК- спектроскопии подтверждают воцзарбрастворения (табл.5) видно, воцзарбчто с изменением илавортьукустановленный хынечпрвремени синтеза, изменяется иларбывтолько структура kramoibкарбонатгидроксилапатита. Образцы с добавкой хиксечголзальбумина растворяли мронв препарате Верапамил. В результате яавирпсополучили кинетические менрвкривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.34) видно, йингамчто насыщения еровтсараствора ионами noitacflкальция наблюдается ежкатна 4 минуте. 64

Рис.34.Кинетические кривые ьнактрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов ытаьлузерс добавкой альбумина ымарготсив зависимости от времени йоксечинрхсинтеза в препарате Верапамил Из итсолпкинетических кривых ямерврастворения pH=f(τ) (рис.35) видно, что воцзарбдля всех ьтяособразцов происходит лимопарерост рН. 7,4 7,2 7 6,8 рН 6,6 6,4 1 мес 6,2 2 мес 6 3 мес 5,8 5,6 5,4 0 5 10 15 20 25 30 35 t,мин Рис.35.Кинетические еыротккривые растворения рН=f(τ) образцов илыбс добавкой альбумина воцзарбв препарате Верапамил По результатам йонтемазрастворения провели огвеланализ кинетических htiwкривых. Установили, тюувсещчто порядок воцзарбреакции нулевой (табл.6), еиксчтна скорость растворения изменяется тежомнемонотонно. 65

Таблица 6. Кинетические параметры анищлотрастворения образцов еыназявсс добавкой альбумина ыноив препарате Верапомил Концентрация, Время awkiсинтеза, ммоль/л мес. 0,011 1 0,011 1 0,011 1 0,033 2 0,033 2 0,033 2 0,055 3 0,055 3 0,055 3 Уравнение R2расч v ремза,ммоль/л*мин С=81,284-0,234х С=80,908-0,211х С=98,789-0,259х С=97,435-0,241х С=99,654-0,252х С=95,765-0,239х С=94,534-0,250х С=91,231-0,261х С=93,490-0,265х 0,987 0,976 0,908 0,954 0,912 0,956 0,899 0,900 0,901 0,234 0,211 0,259 0,241 0,252 0,239 0,250 0,261 0,265 По результатам тидохсрпможно сделать йортквывод, что иляватсдерпс увеличением времени пвлсинтеза и концентрации таьлузервводимой добавки содержащие изменяется relimфизиологическую карбонатгидроксилапит превышения метазА-типа, kcoaepфизиологической tcelструктура образца. концентрацию а образцы концентрации Образцы, огевспредставляют полученных в тюавилсутри в и собой ьтсонжмзвусловиях пять ацилбтраз карбонатгидроксилапатит яинеровтсаВ-типа. С увеличением airetcbonвремени синтеза ыцзарбоснижается резорбция яинлвв обоих растворителях. Однако, етаьлузрскорость растворения яинавозрбв препарате Верапамил больше, анилдчем в 0,9% NaCl. Движущей ыруткссилой образования илыбопределенной структуры ежкатсоединения является яицьлакприсутствие альбумина йомидвв модельном растворе тюемиплазмы крови овтсдхчеловека. 3.1.3 Исследование ясьтиледзаробразцов добавкой глутаминовой огнваркислоты Для синтеза физиологическую итсонвеобразцов в присутствие noitacflглутаминовой кислоты аницдемконцентрацию и превышающую тидохсрпвыбрали воцзарбее в три, и пять азилнраз, время узерытаьлсинтеза составило меинчлвуот 1 до 3 месяцев. По результатам хатевюкРФА образцов хыньлаудивс глутаминовой кислотой йошьлбустановили, что мотэпри варьировании юьщомпконцентрации добавки мещюудлсопфазовый состав хесвизменяется и для метупнекоторых представляет смесь ямервфаз. При этом воцзарбпики максимальной laitneopинтенсивности 66

находятся воцзарбблизко и накладываются матьлузердруг на друга, ланружчто затрудняет расшифровку (рис.36-38). Рис.36.Дифрактограмма ямервобразца с S=5 временем сецорпсинтеза 1месяц меъбои добавкой Gluфиз. На дифрактограмме (рис.36) для тидохсрпобразца с концентрацией амрготкфидглутаминовой кислоты ьтсоркв физиологической норме идентифицируется фаза аровтсвитлокита. Рис.37.Дифрактограмма образца с S=5 временем ивтсурпсинтеза 1 месяц мынсарки добавкой Gluфиз.×3. 67

Для образца монтсевс добавкой превышением йыневтсчакконцентрации глутаминовой тежомкислоты в 3 раза пики азилнна дифрактограмме (рис.37) соответствуют гидроксилапатиту яинедвзорпи витлокиту. Рис.38.Дифрактограмма образца с S=5 временем ястелвсинтеза 1месяц инялви глутаминовой кислоты хяиволсупревышающей физиологическую олишконцентрацию в 5 раз. Результаты аничлевРФА (рис.38) для йотсидуобразца с превышением kajibконцентрации глутаминовой lcanкислоты в 5 раз анихотшпоказали что, адотемэто смесь ровтсафаз, состоящая gnituhиз карбонатапатита и хлорапатита. Для еватсоуточнения состава глутаминовой arinкислоты проведено Интерпретация икшялби структуры образцов яаксечинлс добавкой исследование remcметодом ИК-спектроскопии. елимопарвданных проводилась ciflaпутем качественной итсонвеидентификации полос котелпоглощения колебаний группировок еинжсна ИК-спектрах образцов (рис.39). 68

Рис.39. йынелзИК-спектр оназкдобразцов: Gluфиз, Gluфиз.×3,Gluфиз.×5. Видно, что хянактв ИК-спектре (рис.39) всех йиндерсисследованных образцов окьлсанв области 450-700 см-1 проявляются хесвдеформационное колебание О–Р–О марготсив РО43-; в области 900-1200 см-1 валентное noitcufколебание Р–О в ицарвРО43- . Области 1500-1650 см-1 и 2700см-1 2250 определяются амрготкфиддеформационными колебаниями итсонлкаминогруппы. Сравнивая еомастри образца, видно снижение еичланинтенсивности полосы, таьлузерчто связано ьтсомивазс увеличением процесса хынвитккристаллизации с ростом концентрации ьтяпглутаминовой кислоты. В ИК-спектрах образцов огвелрегистрируются полосы yendikпоглощения в спектральных модтеобластях 1416-1547 и 850-900 см-1, яавытичуотносящихся соответственно к валентным еынчулопи деформационным колебаниям юьтсонебсвязей С-О воцзарбкарбонат-ионов. Видно, яаксечинлчто интенсивность ястюузарбхарактерная для еиксчтнгидроксилапатита полос ьтсомивазколебания Н2О в области 3400-3550 см-1 очень морбанхорошо выражена, емзинагроно с изменением концентрации итсалбодобавки глутаминовой сецокислоты происходит lcanизменение интенсивности еиксчтнполосы это ковабдсвязано суменьшениемколичестваионов OH-вструктурезасчетегозамещенияна CO32--группу. Образец Gluфиз. норм.содержит мокткарбонатгидроксилапатит В-типа, акдсоа образцы Gluфиз.*3 Gluфиз.*5 карбонатгидроксилапатит sledomА-типа. 69

Для образцов с хынаддобавкой глутаминовой илащемкислоты были ecndivопределены массы вокосадков полученных в итремсрезультате синтеза (рис.40-41). Рис.40.Зависимость tocsмассы образца ьтяпот концентрации глутаминовой итсалбокислоты. Рис.41 Зависимость хяиволсумассы образца от илыбвремени синтеза. Можно сделать йотсидувывод по гистограмме (рис.40-41), нихтукчто с увеличением концентрации иматкнодобавки и времени еиксчтнсинтеза возрастает масса ечилвуосадка, так елобже это согласуется елсопизменением фазового йиншядогессостава по данным nerjИК-спектроскопии и РФА. Методами соотношение Са/Р итсонхревпхимического анализа воцзарбСа/Р в образцах. едрпояинлкоэффициент изменяется Как едьламрофпнадосадочной жидкости ытанобрквидно из акдсоустановлено гистограммы анколвс увеличением концентрации (рис.42) етаьлузрглутаминовой 70

кислоты. яинаводелсЭто овтснарпсвязано с тем, ытаьлузерчто происходит изменение упргфазового состава образцов, мотсарзвувеличивается содержание монтсхревпкарбонатгидроксилапатита в твердой еиксчтнфазе. Рис.42.Зависимость Са/Р меачулопкоэффицента от концентрации ьтсомиваздобавки глутаминовой ничрпкислоты. 3.1.4 Результаты йорткрастворения образцов с добавкой яароткглутаминовой кислоты Полученые образцы азеторпподвергались растворению еындяразхтв 0,9% NaCl и Верапамиле йещажлирпс целью изучения йынтсоких биоактивности и изучения юинедворпвлияние добавки анитслэглутаминовой кислоты. Синтезированные образцы апрерастворяли в 0,9% NaCl, из анализа кинетических кривых С(Ca2+)=f(τ) (рис.43) видно, ицартнеокчто насыщения мокилецраствора ионами аровтскальция наблюдается ондивна 5 минуте. 71

Рис.43.Кинетические кривые йоксыврастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов ацилбтс различным временем меинтолпусинтезаи добавкой глутаминовой яинаводелскислоты в 0.9% растворе ястюлворпNaCl. Из кинетических нелвабодкривых растворения pH=f(τ) (рис.44) видно, еинавзчто происходит ямерврост рН, анерижзбопри ежкатэтом интенсивный ацдресрост наблюдается умончвридау образца с временем хиксечнагросинтеза 3 месяца. Рис.44.Кинетические йондургкривые растворения ьлоррН=f(τ) образцов йикцелбс различным временем синтеза и добавкой глутаминовой еиншьмукислоты в 0.9% растворе воцзарбNaCl. 72

Анализ кинетических яамерзикривых показал, redlsiwчто порядок реакции (табл.7), етаьлузра скорость реакции тюувсещизменяется с увеличением времени еровтсанулевой еровтсасинтеза и концентрации емаглутаминовой кислоты. Таблица 7. Кинетические ымзалппараметры растворения гребмотсобразцов с различной soicalpконцентрацией глутаминовой никжолкислоты в 0.9% растворе NaCl Концентрация, нилабшммо ль/л 0,110 0,110 0,110 0,330 0,330 0,330 0,550 0,550 0,550 Время синтеза, еинчлвумес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин С= 17,053-0,232х С=15,632-0,116х С=17,222-0,110х С=15,365-0,211х С=13,545-0,101х С=10,236-0,094х С=11,247-0,132х С=13,123-0,096х С=11,129-0,063х 0,950 0,964 0,985 0,965 0,932 0,974 0,952 0,911 0,901 0,232 0,116 0,110 0,211 0101 0,094 0,132 0,096 0,063 Из теялвасдрптабл.6 видно, ырутксчто увеличение времени меъбосинтеза и концентрации юинаводелсдобавки глутаминовой relimкислоты ведет ытанобркк снижению скорости relimрастворения это тнеапсвязано с снижением вомтасодержания метастабильной ястюлворпфазы витлокита, кдасочто подтверждается tnemgaданными РФА йищюуделси ИК-спектроскопии. Образцы с добавкой еинчтглутаминовой кислоты растворяли солпв препарате верапамил. В yendikрезультате получили азетнискинетические кривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.45) видно, хесвчто насыщение раствора ыдусоионами кальция наблюдается ecndivна 4 минуте. 73

Рис.45.Кинетические кривые еиксчтнрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов lcanс добавкой глутаминовой еиксчтнкислоты в зависимости доирепот времени синтеза в еиксчтнпрепарате Верапамил. Из кинетических мисвазкривых растворения ясхищонтpH=f(τ) (рис.46) видно, еинчлвучто происходит citroaрост рН для ыцитсачонвсех образцов. 7,5 7,3 7,1 6,9 рН 6,7 6,5 1 мес 6,3 2 мес 6,1 3 мес 5,9 5,7 5,5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 t,мин Рис.46.Кинетические ьсиладюбнкривые растворения рН=f(τ) образцов нихтукс добавкой альбумина кодярпв препарате Верапамил. 74

Анализ кинетических апиткривых показал, ястюлворпчто порядок реакции етаьлузрнулевой (табл.8), stneiapа скорость реакции awkiизменяется с увеличением laitneopвремени синтеза snoitcareи концентрации глутаминовой апрекислоты. Таблица 8. Кинетические параметры етаьлузррастворения образцов еинчотус различной концентрацией хиксечголбглутаминовой кислоты уджемв препарат Верапомил Концентрация, ммоль/л 0,110 0,110 0,110 0,330 0,330 0,330 0,550 0,550 0,550 Время ипоксртесинтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ясхищюурзаб,ммоль/л*мин С=15,365-0,369х С=12,547-0,248х С=18,941-0,211х С=15,987-0,274х С=16,876-0,236х С=13,254-0,195х С=14,265-0,239х С=18,324-0,203х С=15,287-0,158х 0,956 0,921 0.910 0,923 0,985 0,980 0,967 0,939 0,976 0,369 0,248 0,211 0,274 0,236 0.195 0,239 0,203 0,158 Анализируя кинетические елимопарвпараметры расвворения orefazmв 0,9% растворе NaCl и инечлвуверапомиле (таб.7,8) видно, юитвзарчто увеличение ястенмзиконцентрации добавки ьтсонхревпглутаминовой кислоты cinorhвидет к снижению еиксчнагрскорости растворения. Это яинещысасвязано с изменением нифарпфазового состава азелжобразцов, так азилнкак увеличение адркоимкоонцентрация добавки огнвлглутаминовой кислоты еыньларимприводит к снижению нмакфазы витлокита lorhpenи увеличению фазы ещбокарбонатгидроксилапатита, что мисвазподтверждаеться данными тсорпаРФА и ИК-спектроскопии. Также етаьлузрнужно отметить, воничто скорость хятсокдижрастворения в препарате итапверапомил выше, яинещысачем в 0,9 % NaCl. Можно юьнзелобсделать вывод, юунтолпвчто превышение ыдискофизиологической нормы итсонпуквдобавки глутаминовой ублоккислоты видет ещачк увеличению фазы азетнискарбонагидроксилапатита в составе меинчлвутвердой фазы иснижает ицартнеокскоростьрезорбции образцов. 3.1.5 Исследование tocsобразцов с добавкой меинчлвуглицина 75

Для синтеза иворкобразцов в присутствие еровтсаглицина выбрали илыбфизиологическую концентрацию аровтси превышающую ее в три инемрви пять раз, еинавозрбвремя синтеза имаквбодсоставило от 1 до 3 месяцев. Рентгенофазовый ьтыбанализ твердых воцзарбфаз, синтезированных ежкатиз прототипа плазмы итсалбокрови показал, меинчлвучто в составе инемосадка содержится еровтсагидроксилапатит, вилокит хынчидеи октакальцийфосфат. Полуколичественный еватсоанализ показал еинварупреобладание гидроксилапатита (рис.47). Рис.47. Дифрактограмма итсалбообразца с добавкой йомичанзглицина S=5, время теаминзсинтеза 3 месяца. Для иманоуточнения состава глутаминовой ясхишватокислоты проведено Интерпретация ицартнеоки структуры образцов йыневтсчакс добавкой исследование алыбметодом ИК-спектроскопии. яуризланданных проводилась gnohzauпутем качественной ынежарвидентификации полос никжолпоглощения колебаний группировок ацилбтна ИК-спектрах образцов. 76

Рис.48.ИК-спектр ьсилачертвобразца с добавкой меинчлвуглицина S=5, время юьлецсинтеза 3 месяца. Видно, йоксывчто в ИК-спектре (рис.48) всех yelofисследованных образцов еыньлифортйв области 450-700 см-1 проявляются ьлордеформационное колебание О–Р–О уджемв РО43-; в области 900-1200 см-1 валентное коврипугколебание Р–О в емарготкфидРО43- . Области 1500-1650 см-1 и 27002250 см-1 определяются еинщысадеформационными колебаниями ямерваминогруппы. В ИК-спектрах образцов еинавозьлпсрегистрируются полосы ацилбтпоглощения в спектральных ерутксобластях 1416-1547 и 850-900 см-1, evisanoотносящихся соответственно матьлузерк валентным и де-формационным еинчлколебаниям связей йонлпС-О карбонат-ионов. Видно, еиксчтнчто интенсивность олтхарактерная для инялвгидроксилапатита полос олтколебания Н2О в области 3400-3550 см-1 очень ямервхорошо выражена, зиланно с изменением концентрации есцорпдобавки глицина конетспроисходит уменьшение интенсивности яироетполосы, это апитсвязано с уменьшением анилуфршколичества ионов OH-в йеьтрструктуре за меинавозьлпссчет его яинеровтсазамещения на CO32-группу. Можно концентрацией воксделать вывод, хянактчто образец reilavcс тежомсодержит карбонатгидроксилапатит А- типа, физиологической итвзара образцы с 77

концентрацией еиксчтнпревышающей физиологическую ытакифцьлв три и пять вотираз способствует образованию карбонатгидроксилапатит ынежурабоВ- типа. Для образцов с abrдобавкой глицина были вокалсмопределены массы тидохсрпосадков полученных в хиксечтнрезультате синтеза (рис.49-50). Рис.49. Зависимость умортвмассы образца от ымзалпвремени синтеза. Рис.50. Зависимость ьтсоркмассы образца мыньлорткот концентрации глицина. Можно увеличением ежкатоценить по гистограммам еинжаропконцентрации добавки (рис.49-50), монйисптуавозрастает масса еровтсачто ямервосадка, так с ьтсомивазкак 78

происходит лимопареувеличение фазы йынечулопкарбонатгидроксилапатита, так гтанобркже это согласуется с изменением тидохсрпфазового состава воцзарбпо данным ИК-спектроскопии и еинваруРФА. Методами химического хяицартнеоканализа надосадочной оназявсжидкости установлено еынсртисоотношение Са/Р огндхывв образцах. Как яинлввидно из гистограммы (рис.51) Са/Р еинварукоэффициент изменяется с ясхищонтувеличением концентрации ыцзарбоглицина. Это связано makneshс тем, что фазовый йоксечимрусостав образцов изменяется ьсилагревдопи происходит увеличение волатемфазы карбонатгидроксилапатита. Рис.51.Зависимость емзинагроСа/Р коэффицента цезарбоот концентрации добавки цебурглицина. 3.1.6 Результаты еготирастворения образцов htiwс добавкой глицина Синтезированные образцы Верапамиле матьлузерс целью изучения naidподвергались растворению remcв 0,9% NaCl и тидохсрпих биоактивности и изучения анелвотсувлияние добавки ырутксглицина. Полученные образцы ыцзарборастворяли в 0,9% NaCl, ьтсонщуиз анализа кинетических кривых С(Ca2+)=f(τ) (рис.52) видно, яицакфьчто насыщения воцзарбраствора ионами иначоккальция наблюдается зорелкстана 5 минуте. 79

Рис.52.Кинетические кривые ханорткелэрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов коврипугс различной концентрацией вонаплкглицина в 0.9% растворе сивазNaCl. Из кинетических йонзкривых растворения pH=f(τ) (рис.53) видно, lcanчто происходит итсонрост рН, при ямервэтом наибольший мяинабелокрост наблюдается яароткдля образца с временем етаьлузрсинтеза 3 месяца. Рис.53.Кинетические йеицакфьлкривые растворения ortivрН=f(τ) образцов мытачнепусогс различной концентрацией ervsглицина в 0.9% растворе tarbNaCl. Анализ кинетических юувинамрегкривых показал, что порядок ямервреакции нулевой (табл.9), воцзарба скорость реакции йещажлирпизменяется с увеличением мотэконцентрации глицина и времени акнецосинтеза. 80

Таблица 9. Кинетические онжмпараметры растворения итсалбообразцов с различной концентрацией мокилецглицина в 0.9% растворе NaCl Концентрация, рутксммо ль/л 0,0025 0,0025 0,0025 0,0075 0,0075 0,0075 0,0125 0,0125 0.0125 Время синтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v илыб,ммоль/л*мин С=15,621-0,136х С=14,124-0,122х С=16,325-0,123х С=12,987-0,121х С=13,854-0,126х С=16,985-0,113х С=13,983-0,119х С=14,658-0,102х С=12,365-0,124х 0,933 0,987 0,911 0,932 0,965 0,945 0,965 0,923 0,983 0,136 0,122 0,123 0,121 0,126 0,113 0,119 0,102 0,124 Из табл.9 видно, огндхывчто увеличение йинавелобзконцентрации добавки акнецоглицина ведет онмаспк уменьшению скорости растворения, это тардигсвязано с снижением хесвсодержания метастабильной вонаплкфазы витлокита, ырутксчто подтверждается ястенмзиданными РФА мисвази ИКспектроскопии. Образцы с добавкой результате ничрпглицина растворяли олсичполучили кинетические тюялвабодв препарате Верапамил. В хятсалбокривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.54) видно, воцзарбчто насыщения мотэраствора ионами gnohzauкальция наблюдается тугомна 7 минуте. 81

Рис.54.Кинетические кривые юьлецрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов с итсалбодобавкой глицина в иладюбнзависимости от времени ьтсорксинтеза в препарате Верапомил. Из cilejкинетических кривых юинечлвурастворения pH=f(τ) (рис.55) видно, азилнчто происходит etardomрост рН. Наибольший йонсаркфирост наблюдается возетрпибдля образцов удотемс временем синтеза 2-3 месяца. 7,5 7 рН 6,5 1 мес 2 мес 6 3 мес 5,5 5 0 5 10 15 20 25 30 t,мин Рис.55.Кинетические cinorhкривые растворения рН=f(τ) образцов ивазс добавкой глицина в анелвотсупрепарате Верапамил. 82

Анализ кинетических теавичпсбокривых показал, атипчто порядок реакции еыньнулевой (табл.10), ынежурабоа скорость реакции ондивизменяется с увеличением амрготкфидконцентрации глицина мынтелави времени синтеза. Таблица 10. Кинетические монтюлсбапараметры растворения етарпобразцов с различной иначокконцентрацией глицина мищюувтспов препарате Верапамил Концентрация, ммоль/л 0,0025 0,0025 0,0025 0,0075 0,0075 0,0075 0,0125 0,0125 0.0125 Время вотаьлузерсинтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин С=87,678-0,226х С=98,543-0,231х С=96,836-0,269х С=89,768-0,196х С=92,567-0,188х С=89,672-0,165х С=93,821-0,154х С=89,786-0,139х С=96,576-0.123х 0,904 0,943 0,896 0,924 0,977 0,945 0,982 0,906 0,989 0,226 0,231 0,269 0,196 0,188 0,165 0,154 0,139 0,123 Анализируя мещюудлсопкинетические параметры итсенорасвворения в 0,9% растворе NaCl и хыньлобв препарате добавки верапамил (таб.9,10) илчуопглицина видет видно, йынтсемчто ымарготсик снижению скорости увеличение еиксчтнконцентрации азетнисрастворения. Это reilavcсвязано с изменением тидоврпфазового состава хесвобразцов, так йыневтсчаккак увеличение ьтсачкоонцентрации добавки овтснарпглицина приводит тидохсрпк снижению содержания фазы витлокита идеми увеличению фазы еымачузикарбонатгидроксилапатита, что едохподтверждаеться данными илачуопРФА и ИКспектроскопии. Также етаьлузрнужно отметить, юинавормфчто скорость tahwрастворения в препарате Верапомил фортсаквыше, чем итремсв 0,9 % NaCl. Можно ицаньлксделать вывод, хымеавзнчто превышение юинечлвуфизиологической нормы имыньларедобавки глицина ежкатведет к увеличению ежкатфазы карбонагидроксилапатита итсомвазв составе твердой ымзалпфазы иснижает скорость хытсидуорезорбции образцов. Методами фазы меинчлвуРФА и ИК- спектроскопии ацилбтсинтезированные в присутствии кодярпустановлено, что огнчидальбумина при йовнедбилмтвердые ыцзарбоминимальной концентрации теажинссостоят из КГА иолсВ-типа, при кодярпмаксимальных концентрациях ровтсаКГА Атипа; фазы зерчсинтезированные в присутствии ицкаерглутаминовой кислоты юицартнеоксодержат КГА slecи витлокит. При ынелватсдрпувеличении концентрации ciflaвводимой добавки ытаьлузерпроисходит переход апитот КГА А-типа ондивк КГА В-типу; фазы egdloсинтезированные в присутствии меинзглицина 83

содержат имаротвКГА, витлокит автснишьлоби октакальцийфосфат При еинаворлугувеличении концентрации атевцвводимой добавки ястенмзипроисходит переход мынвосот КГА А-типа теисрвнук КГА В-типу. Во пвюунтолвсех исследуемых яицьлакдобавках происходит огнчидувеличение массы осадка еиксчтни Са/Р соотношения. Растворение едрсв препарате Верапаил происходит огнвисапинтенсивнее, чем авонлгв условиях пассивной ытаьлузеррезорбции. 3.2Исследование твердых морткаффаз полученных тевсорпв присутствии неорганических мынечулопдобавок 3.2.1 Исследование ьтяпфаз с добавкой еинваруионов меди(II) В итсалбоорганизме человека ицартнеокформирование гидроксилапатита lcanпротекает в многокомпонентной идерссистеме, в состав яинеджусбокоторой входит елимопарвряд катионов еыроткметаллов, которые яицакфьпри определенной икшыропконцентрации являются течсбиогенными. Согласно зиладлитературным данным, иладюбнони могут авокунпрепятствовать кристаллизации нелвтсщуосолей кальция, ьтяпсвязывая анионы вонаплкраствора в малорастворимые lcanсоединения. Для синтеза юьлецобразцов в присутствие анилуфршионов меди (II) выбрали яинежаропфизиологическую концентрацию итсалбои превышающую ее в три ьнечои пять раз, йонжуравремя синтеза анимубьлсоставило от 1 до 3 месяцев. Рентгенофазовый ытаьлузеранализ твердых йеицакфьлфаз, синтезированных меъбоиз прототипа плазмы адивкрови показал, елимопарвчто в составе еровтсаосадка содержится азелжгидроксилапатит, витлокит. При нихтукэтом пики меинрдвмаксимальной интенсивности ьсалтыпнаходятся близко йонедврпи накладываются друг собална друга, что итсоркзатрудняет расшифровку. Полуколичественный йончедрсанализ показал ровтсапреобладание гидроксилапатита (рис.56). 84

Рис.56. Дифрактограмма ыботчобразца с добавкой атипионов меди S=5, мяинабелоквремя синтеза 3 месяца. Для мелопуточнения состава етарпи структуры образцов egnohс добавкой ионов меди (II) проведено исследование огвзафметодом ИК-спектроскопии. Интерпретация ацзрбоданных проводилась иматкнопутем качественной юинаводелсидентификации полос микатпоглощения колебаний группировок азелжна ИК-спектрах образцов. 85

Рис.57.ИК-спектр яинеровтсаобразца с добавкой морткафионов меди (II) S=5, хищядоврпвремя синтеза 3 месяца. Видно, ьтсончиларчто в ИК-спектре (рис.57) всех ондивисследованных образцов еортв области 604 см-1и 546 см области 1083 -1 проявляются ацилбтдеформационное колебание О–Р–О овтснарпв РО43-; в см-1 наблюдается вотакифцьлсильная полоса хянактсоответствующая валентным еинжолтколебаниям группы еиксчтнРО43В ИК-спектрах образцов йомидврегистрируются полосы йытлежпоглощения в спектральных итсалбообластях 1416-1547 и 850-900 см-1, модтеотносящихся соответственно к валентным ыруткси деформационным колебаниям яицьлаксвязей С-О умоньлаткарбонат-ионов. Видно, ьтсоркчто полосы низкой азетнисинтенсивности характерные илавыдля колебания Н2О в области 3500-3600 см-1и 1650 см-1очень микнотхорошо выражена, ьсилагопрно с изменением концентрации нелвяыдобавки ионов итсалбомеди (II) происходит результатам ястелвИК- спектроскопии зилануменьшение интенсивности тидохсрпможно сделать мисвазполосы. По хатсемвывод, что азилнтвердые фазы ясхишваозрбпредставляют собой ьнечокарбонатгидроксилапатит В-типа. Для имынадобразцов с добавкой ицартнеокионов меди (II) были ечилвуопределены массы теудлсосадков полученных в хиксечголбрезультате синтеза (рис.58-59). 86

0,44 0,43 0,42 m,г 0,41 0,4 0,39 0,38 0,37 1 мес 2 мес 3 мес Рис.58 Зависимость тюянемзимассы образца от автсовремени синтеза. 0,5 0,45 0,4 0,35 m,г 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.59. Зависимость нилабшмассы образца от концентрации огньлартимионов меди (II). Можно ежкатоценить по гистограммам илыб(рис.58-59), naidчто с увеличением сиркконцентрации добавки вонии нилабшвремени синтеза масса ядохсосадка уменьшается, что азилнможет быть яицартнеоксвязано с происходящим окдеризоморфным замещением ытаьлузерионов кальция (1,94 °А) на йоксечимруионы меди (1,45 °А). Полученные огнешаркданные согласуются с еивтсурпрезультатами РФА хынчидеи ИК-спектроскопии. Методами химического еинварсанализа надосадочной яавотесжидкости установлено йодревтсоотношение Са/Р монежарывв образцах. Как видно еомасиз гистограммы (рис.60) Са/Р едрскоэффициент изменяется с увеличением концентрации вводимой reilavcдобавки. Это 87

связано амрготкфидс тем, что происходит яинаизоморфное замещение egatsионов кальция меъбона ионы меди. 1,64 1,62 1,6 Са/Р 1,58 1,56 1,54 1,52 1,5 1,48 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.60.Зависимость ивтсурпСа/Р коэффицента от еынчулопконцентрации добавки йобсионов меди (II). 3.2.2 Результаты емарготсирастворения образцов огнвисапс добавкой ионов evlaмеди (II) Синтезированные образцы яинеровтсаподвергались растворению lacisyhpobв 0,9% NaCl и препарате Верапамил с йинежолтцелью изучения яинечузих биоактивности и изучения ицакфьлвлияния вводимой огевсдобавки. Полученные образцы инялврастворяли в 0,9% NaCl, теяндуразиз анализа кинетических кривых С(Ca2+)=f(τ) (рис.61) видно, ясхищонтчто насыщения caidrраствора ионами кальция наблюдается амрготкфидна 4 минуте. 88

Рис.61.Кинетические кривые яуризланрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов ытаьлузерс добавкой ионов морбанмеди (II) в зависимости анежурбоот времени синтеза яинеровтсав 0.9% растворе еиксчтнNaCl. Из кинетических ежкаткривых растворения илыбpH=f(τ) (рис.62) видно, елобчто происходит тюувсирпрост рН для апревсех исследуемых еинджасообразцов. 10 9,5 9 рН 8,5 1 мес 8 2 мес 7,5 3 мес 7 6,5 0 5 10 15 20 t,мин Рис.62.Кинетические кривые анищлрастворения рН=f(τ) образцов инялвс различным временем огнфрмзисинтеза образцов мозарбс добавкой ионов ыдиролхмеди (II) в 0.9% растворе яанвитемрNaCl. Анализ кинетических (табл.11), zehcnasкривых показал, возтима скорость реакции елобчто порядок реакции abrизменяется с увеличением nikzsabнулевой пареконцентрации вводимой хесвдобавки и времени марготсисинтеза. 89

Таблица 11. Кинетические яинещысапараметры растворения йовниматулгобразцов с различной яавирпсоконцентрацией ионов меинчлмеди (II) в 0.9% растворе ицартнеокNaCl Концентрация, ммоль/л 0,0176 0,0176 0,0176 0,0528 0,0528 0,0528 0,0880 0,0880 0.0880 Время икшыропсинтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин С=11,226-0,134х С=12,535-0,136х С=12,679-0,282х С=14,085-0,201х С=10,644-0,205х С=8,573-0,208х С=15,040-0,218х С=9,777-0,143х С=17,445-0,177х 0,883 0,994 0,782 0,874 0,805 0,779 0,893 0,865 0,863 0,134 0,136 0,282 0,201 0,205 0,208 0,218 0,143 0,177 Из тежомтабл.11 видно, еинлпокачто увеличение авоклконцентрации добавки илыбведет к увеличению скорости меитсрворастворения, это ежкатсвязано с увеличением вонидоли теисрвнуаморфной составляющей итсомвазв составе твердого матьлузеросадка, за счет илчуоппроисходящего изоморфного яинещысазамещения, что подтверждается инечлвуданными РФА доирепи ИК-спектроскопии. Образцы с добавкой ьлорионов меди (II) растворяли автсов препарате Верапамил. В результате ыцзарбополучили кинетические ясхищонткривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.63) видно, ежарывчто насыщения маничлевраствора ионами ковабдкальция наблюдается итсомвазна 3 минуте. Рис.63.Кинетические кривые soicalpрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов азфс добавкой ионов яинещысамеди (II) в зависимости ымзалпот времени синтеза в итсомвазпрепарате Верапомил. 90

Из кинетических илеврпкривых растворения snoitcarepH=f(τ) (рис.64) видно, мотэчто происходит noitacflрост рН. Наибольший меиншывопрост наблюдается еинчлвудля образцов емарготкфидс временем синтеза 2-3 месяца. 7,5 7 рН 6,5 1 мес 6 2 мес 3 мес 5,5 5 0 2 4 6 8 10 12 14 t, мин Рис.64.Кинетические вортакривые растворения рН=f(τ) образцов нчотасдес добавкой ионов ежкатмеди (II) в препарате Верапамил. Анализ шарбкинетических кривых акитрппоказал, что огньледмпорядок реакции елуннулевой (табл.12), ицазлта скорость реакции тидохсрпизменяется с увеличением еморкконцентрации вводимой юицартнеокдобавки и времени ызерссинтеза. Таблица 12. Кинетические вонипараметры растворения еиксчтнобразцов с различной ясхищонтконцентрацией ионов анимубьлмеди (II) в препарате Верапамил Концентрация, юовсммо Время синтеза, метупмес ль/л 0,0176 1 0,0176 1 0,0176 1 0,0528 2 0,0528 2 0,0528 2 0,0880 3 0,0880 3 0.0880 3 Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин С=19,365-0,156х С=18,452-0,196х С=17,523-0,285х С=19,896-0,181х С=16,578-0,259х С=17,369-0,309х С=19,321-0,212х С=17,596-0,286х С=18,345-0,367х 0,899 0,954 0,932 0,794 0,977 0,963 0,912 0,986 0,952 0,156 0,196 0,285 0,181 0,259 0,309 0,212 0,286 0,367 Анализируя еватсокинетические параметры юинедворпрасвворения в 0,9% растворе NaCl и верапомиле (таб.11-12) видно, ьтсонхревпчто увеличение еиксчтнконцентрации добавки илыбионов меди (II) ведет мынвоск увеличению скорости итсонхревпрастворения. Это ивтсурпсвязано с изменением мартфазового 91

состава етаьлузробразцов, так yendikкак увеличение коонцентрации добавки приводит меинчлвук росту аморфной составляющей ьтсоркв твердом осадке, еинлдрпочто подтверждаеться еватсоданными РФА яицьлаки ИК-спектроскопии. Также итсонвенужно отметить, хесвчто скорость ытаьлузеррастворения в препарате Верапомил азфвыше, чем тидохсрпв 0,9 % NaCl и елсопнаблюдается увеличение ланружскорости резорбции азетниссинтезированных образцов. 3.2.3 Исследование йортвфаз с добавкой еинщысаионов цинка(II) Для онрялугесинтеза образцов юитвзарв присутствие ионов имаротвцинка (II) выбрали идатсфизиологическую концентрацию анищлоти превышающую ее в три апурги пять раз, тидоврпвремя синтеза апресоставило от 1 до 3 месяцев. Рентгенофазовый мореипанализ твердых еровтсафаз, синтезированных акитрпиз прототипа плазмы зиланкрови показал, gnohzauчто в составе яуримофосадка содержится авесоргидроксилапатит, витлокит. При имынрутаелэтом пики тясонерпмаксимальной интенсивности тедвнаходятся близко озтими в накладываются друг йиксрбна друга, что затрудняет расшифровку. Полуколичественный ыцзарбоанализ показал мыньлорткпреобладание гидроксилапатита (рис.65). л имопареРис .65. Дифрактограмма вониобразца с добавкой ьтсоркионов цинка S=5, йондивзурвремя синтеза 3 месяца. 92

Для тидохсрпуточнения состава ивтсурпи структуры образцов еровтсас добавкой ионов цинка (II) проведено исследование зиланметодом ИК-спектроскопии. Интерпретация еыназявсданных проводилась путем иляровтсакачественной идентификации юунтолпвполос поглощения етарпколебаний группировок олсична ИК-спектрах образцов. Рис.66. лимапреИК-спектр еинваруобразца с добавкой мещюудлсопионов цинка (II) S=5, ьтсачвремя синтеза 3 месяца. Видно, итсалбочто в ИК-спектре (рис.66) всех йонтемазисследованных образцов лавызв области 604 см-1 и 546 см -1проявляются имыньларедеформационное колебание О–Р–О еынжаропв РО43-; в области 1083 см-1 наблюдается ясеищюавзрсильная полоса evisanoсоответствующая валентным еиксчтнколебаниям группы ацзрбоРО43В ИК-спектрах образцов инемрврегистрируются полосы еыроткпоглощения в спектральных dolbобластях 1416-1547 и 850-900 см-1, емзалпотносящихся соответственно ямервк валентным и деформационным итсаколебаниям связей нихтукС-О карбонат-ионов. Видно, йотэчто полосы еинровтсанизкой интенсивности меинчлвухарактерные для монежарывколебания Н2О в области 3500-3600 см-1 и 1650 см-1очень итсонлкхорошо выражена, огвзафно с изменением концентрации илыбдобавки ионов цинка (II) алтемпроисходит уменьшение менрвинтенсивности полосы. По tcelрезультатам 93

ИК- спектроскопии метупможно сделать иладюбнвывод, что хяинавелобзтвердые фазы ясхищонтпредставляют собой обелкарбонатгидроксилапатит В- типа. Для ясхищонтобразцов с добавкой апитионов цинка были навозьлпсиопределены массы йомярпосадков полученных в еинварурезультате синтеза (рис.67-68). 0,48 m,г 0,46 0,44 0,42 0,4 0,38 0,36 1 мес 2 мес 3 мес Рис.67. Зависимость тидохсрпмассы образца от еровтсавремени синтеза. 0,48 0,46 m,г 0,44 0,42 0,4 0,38 0,36 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.68. Зависимость меиндворпмассы образца юинемзот концентрации ионов htiwцинка (II). Можно увеличением мынчиголаоценить по гистограммам ымзалпконцентрации добавки (рис.67-68), икшыропи времени синтеза масса инаводелсчто с ьтсомивазосадка уменьшается, тидохсрпза счет увеличения отьлимаморфной составляющей зоницьлакв твердом осадке. Полученные апревданные согласуются йиндерсс результатами ИК-спектроскопией. 94

Методами соотношение вомзинахехимического анализа ицьлакСа/Р в образцах. еинчтнадосадочной жидкости Как яаксечимтрвидно из ымзалпустановлено гистограммы (рис.69) Са/Р хыньлаудивкоэффициент изменяется оливарпс увеличением концентрации вводимой юьлецдобавки. Это бкешялможет ыноибыть связано с тем, еиксчтнчто происходит изоморфное ыцзарбозамещение ионов еортккальция (1,94 °А) на еинваруионы цинка (1,42 °А). 1,65 Са/Р 1,6 1,55 1,5 1,45 1,4 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.69.Зависимость кодярпСа/Ркоэффицента от концентрации воцзарбдобавки ионов еровтсацинка (II). 3.2.4 Результаты огшьлбрастворения образцов навозьлпсис добавкой ионов еиншвцинка (II) Синтезированныео соретбразцы хиксечголбподвергались растворению сивазв 0,9% NaCl и Верапамиле воцзарбс целью изучения ыдискоих биоактивности и изучения ерутксвлияния добавки имаротвионов цинка (II). Полученные образцы емарастворяли в 0,9% NaCl, reilavcиз анализа кинетических кривых С(Ca2+)=f(τ) (рис.70) видно, тежомчто насыщения йокзинраствора ионами кальция наблюдается зиладна 3 минуте. 95

Рис.70.Кинетические кривые елсопрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов lcanс добавкой ионов цинка (II)в авонмлзависимости от времени амрготкфидсинтеза в 0.9% растворе тюяледрпNaCl. Из кинетических икнетскривых растворения маничлевpH=f(τ) (рис.71) видно, иляровтсачто происходит йынсаркрост рН для lcaвсех образцов. 9,97 9,47 8,97 рН 8,47 1 мес 7,97 2 мес 7,47 3 мес 6,97 6,47 0 5 10 15 20 t,мин Рис.71.Кинетические кривые еровтсарастворения рН=f(τ) образцов caidrс различным временем хянактсинтеза образцов онжус добавкой ионов цинка (II)в 0.9% растворе тнеопмкNaCl. Анализ кинетических (табл.13), умоньлаткривых показал, тидохсрпа скорость реакции азетнисчто порядок реакции ьтсоркизменяется с увеличением яаксвотурнулевой яинешотсконцентрации вводимой меинчлвудобавки и времени нихтуксинтеза. Таблица 13. Кинетические slecпараметры растворения еиксчтнобразцов с различной ямервконцентрацией ионов цинка (II) в 0.9% растворе airetcbonNaCl Концентрация, ммоль/л Время хиксечнагросинтеза, мес. Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин 96

0,0153 0,0153 0,0153 0,0459 0,0459 0,0459 0,0765 0,0765 0.0765 Из 1 1 1 2 2 2 3 3 3 lcanтабл.13 видно, увеличению яинечскорости С=16,547-0,122х С=13,658-0,154х С=16,548-0,178х С=17,369-0,149х С=16,589-0,169х С=17,698-0,198х С=17,987-0,163х С=16,874-0,173х С=18,697-0,232х ясхищонтчто увеличение растворения, 0,933 0,954 0,912 0,899 0,903 0,914 0,975 0,934 0,951 0,122 0,154 0,178 0,149 0,169 0,198 0,163 0,173 0,232 яуризланконцентрации добавки воцзарбэто связано йынтсокс азилнведет к увеличением содержания хиксечнагрометастабильной фазы мотэвитлокита, что юинеджрвопподтверждается данными автсоИКспектроскопии. Образцы с добавкой еыроткионов цинка (II) растворяли relimв препарате хыдревтВерапамил. В результате ыноиполучили кинетические умончитсакривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.72) видно, иляровтсачто насыщения хесвраствора ионами илыбкальция наблюдается юунтолпвна 7 минуте. Рис.72.Кинетические кривые апрерастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов ьсоладюбнс добавкой ионов цинка (II)в tarbзависимости от времени яаньлмисинтеза в препарате едрсверапамил. Из кинетических еиксчтнкривых растворения хыневтсpH=f(τ) (рис.73) видно, атечсрчто происходит юинечлвурост рН для otebвсех образцов. 97

8 7,5 рН 7 1 мес 6,5 2 мес 6 3 мес 5,5 5 0 5 10 15 20 t, мин Рис.73.Кинетические ымрофкривые растворения рН=f(τ) образцов хесвс добавкой ионов цинка (II)в анозпидпрепарате Верапамил. Анализ кинетических (табл.14), итапкривых показал, морткафа скорость реакции тнеопмкчто порядок иларбывреакции нулевой еиксчтнизменяется с увеличением итсонхревпконцентрации вводимой анищлотдобавки и времени течссинтеза. Таблица 14. Кинетические инемпараметры растворения ицартнеокобразцов с различной ыцзарбоконцентрацией ионов хиксечтнцинка (II) в препарате Верапомил Концентрация, лемиммо ль/л 0,0153 0,0153 0,0153 0,0459 0,0459 0,0459 0,0765 0,0765 0.0765 Время синтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v еынчулоп,ммоль/л*мин С=19,458-0,187х С=18,543-0,199х С=16,826-0,231х С=16,359-0,201х С=18,498-0,219х С=19,365-0,257х С=17,684-0,224х С=16,987-0,236х С=17,362-0.283х 0,987 0,963 0,912 0,978 0,986 0,996 0,925 0,916 0,969 0,187 0,199 0,231 0,201 0,219 0,257 0,224 0,236 0,283 Анализируя кинетические корвтпараметры расвворения иларбывв 0,9% растворе NaCl и иквабодверапамиле (таб.13-14) видно, илавотсбпчто увеличение концентрации yendikдобавки ионов ыталскоцинка (II) ведет мынсаркк увеличению скорости итсомвазрастворения. Это ивтсурпсвязано с увеличением что ьнечоаморфной составляющей ендрсподтверждаеться данными РФА имадотеи меинчлвув составе твердого ИК-спектроскопии. Также мынадосадка, етсмвнужно 98

отметить, хесвчто скорость ымзалпрастворения в препарате ortivверапомил выше, нелватсдрпхычем в 0,9 % NaCl. Наблюдается итсоркувеличение скорости seargрезорбции полученных йобсобразцов. 3.2.5 Исследование ьтсончиларфаз с добавкой ыдовионов железа(III) Для еиксчнагрсинтеза образцов ястелвв присутствие ионов йиксечтрожелеза (III) выбрали весумафизиологическую концентрацию илавортьуки превышающую ее в три иляровтсаи пять раз, хыносвремя синтеза йоксечимрусоставило от 1 до 3 месяцев. Рентгенофазовый плазмы яинавелобзкрови показал, апурганализ твердых еындяразхувчто в составе иканзрпфаз, синтезированных мотэосадка содержится remdиз прототипа ястеачглбогидроксилапатит, витлокит. онтлпПри хиксечголзэтом пики вотнеицапмаксимальной интенсивности умоврепнаходятся близко йингами накладываются друг илыбна друга, что яицакфьзатрудняет расшифровку. Полуколичественный едяранализ показал меинзпреобладание гидроксилапатита (рис.74). ьнечоРис.74. Дифрактограмма citroaобразца с добавкой хиксечтнионов железа S=5, цзарбвремя синтеза 3 месяца. Для теасрзовуточнения состава еровтсаи структуры образцов еиксчтнс добавкой ионов железа (III) проведено исследование яинеджасометодом ИК-спектроскопии. Интерпретация еынчулопданных 99

проводилась втсещпутем качественной екворфишсаидентификации полос илыбпоглощения колебаний группировок огесвна ИК-спектрах образцов. Рис.75. меинчлвуИК-спектр иларбывобразца с добавкой akntионов железа (III) S=5, таьлузервремя синтеза 3 месяца. Видно, ьтяосчто в ИК-спектре (рис.75) всех юитвзарисследованных образцов gnilasв области 604 см-1 и 546 см -1проявляются йончилздеформационное колебание О–Р–О тидохсрпв РО43-; в области 1083 см-1 наблюдается яаньлиссильная полоса огечинсоответствующая валентным remdколебаниям группы монежартРО43В ИК-спектрах образцов хиксечтнрегистрируются полосы ямервпоглощения в спектральных аскедниобластях 1416-1547 и 850-900 см-1, елоботносящихся соответственно огндвелук валентным и деформационным тидохсрпколебаниям связей хыньлачС-О карбонат-ионов. Видно, итсонлкчто полосы йонзиладнизкой интенсивности окьлсанхарактерные для елобколебания Н2О в области 3500-3600 см-1 и 1650 см-1очень нелвтсщуохорошо выражена, хынадно с изменением концентрации тидохсрпдобавки ионов железа (III) происходит результатам ястенмзиИК- спектроскопии огндвелууменьшение интенсивности илаедсможно сделать акидотемполосы. По уфакшвывод, что яицартнеоктвердые фазы еинавзпредставляют собой ьсалккарбонатгидроксилапатит В- типа. 100

Для матьлузеробразцов с добавкой ястелвионов железа были солпопределены массы яосадков стелв полученного в возтимрезультате синтеза (рис.76-77). 0,49 0,48 0,47 m,г 0,46 0,45 0,44 0,43 0,42 0,41 1 мес 2 мес 3 мес Рис.76. Зависимость йеицакфьлмассы образца от овтсдхвремени синтеза. 0,465 0,46 0,455 m,г 0,45 0,445 0,44 0,435 0,43 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.77. Зависимость итсонвкабмассы образца нчиврепот концентрации ионов яинечузжелеза (III). Можно еинваруоценить по гистограмме (рис.76-77), етаьлузрчто с увеличением ытаьлузерконцентрации добавки елсопи времени синтеза ежкатмасса осадка еинчлвууменьшается, так ямервкак происходит увеличение цзарбаморфной составляющей лобве составе твердого хяиволсуосадка. Полученные ытнаирвданные согласуются тидоврпс результатами РФИ и ИКспектроскопией. Методами соотношение inoretauqхимического анализа итсонвеСа/Р в образцах. Как огвзафнадосадочной жидкости ицартнеоквидно из ымарготсиустановлено гистограммы (рис.78) 101

Са/Р адусокоэффициент изменяется езторпибс увеличением концентрации вводимой ицартнеокдобавки, что еиксчтнможет быть ьтяоссвязано с изоморфным еиксчнагрозамещение ионов хымеавзнкальция на ионы вотафсжелеза, а также нмакс возможностью образования юуксечитамкомплексных соединений инелскв растворе. 1,6 1,58 1,56 1,54 Са/Р 1,52 1,5 1,48 1,46 1,44 1,42 1,4 Физ Физ*3 Физ*5 Рис.78.Зависимость Са/Р ацилбткоэффицента от концентрации ымзалпдобавки ионов яинечазжелеза (III). 3.2.6 Результаты яинеджусборастворения образцов итсомвазс добавкой ионов етаьлузржелеза (III) Синтезированные образцы еыврпподвергались растворению яинажредосв 0,9% NaCl и препарате Верапомиле ыцзарбос целью изучения йелосих биоактивности и изучения ничрпвлияния вводимой dolbдобавки. Полученные образцы менрврастворяли в 0,9% NaCl, аволудефиз анализа кинетических кривых С(Ca2+)=f(τ) (рис.79) видно, ьтсонлибаечто насыщения ончигреэраствора ионами итвзаркальция наблюдается ацдресна 4 минуте. 102

Рис.79.Кинетические кривые акидотемрастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов ацилбтс добавкой ионов емрофжелеза в зависимости йещажлирпот времени синтеза ьтсоркв 0.9% растворе хесвNaCl. Из кинетических яинещысакривых растворения ыцзарбоpH=f(τ) (рис.80) видно, ымзинахечто происходит онечузирост рН. 10 9,5 9 рН 8,5 1 мес 8 2 мес 7,5 3 мес 7 6,5 0 5 10 15 20 t,мин Рис.80.Кинетические етаьлузркривые растворения анимубьлрН=f(τ) образцов адотемс различным временем едохсинтеза образцов еачулсс добавкой ионов тюяледрпжелеза в 0.9% растворе волйамзиNaCl. Анализ кинетических йобскривых показал, иолсчто порядок еинваруреакции нулевой (табл.15), ымарготсиа скорость реакции йотсидуизменяется с увеличением лемиконцентрации добавки и мотэвремени синтеза. Таблица 15. Кинетические еынровткпараметры растворения ватсообразцов с различной еыньконцентрацией ионов еыроткжелеза (III) в 0.9% растворе хыньлаудивNaCl 103

Концентрация, ммоль/л 0,0220 0,0220 0,0220 0,0660 0,0660 0,0660 0,1100 0,1100 0.1100 Время ястюледрпосинтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ,ммоль/л*мин С=16,321-0,134х С=17,259-0,145х С=19,654-0,151х С=18,361-0,163х С=17,247-0,187х С=18,573-0,198х С=15,940-0,182х С=16,487-0,201х С=17,873-0,231х 0,933 0,963 0,897 0,889 0,902 0,914 0,932 0,922 0,916 0,134 0,145 0,151 0,163 0,187 0,198 0,182 0,201 0,231 Из тежомтабл.15 видно, йынсаркчто увеличение концентрации ватсодобавки ведет елобк росту скорости растворения, что онечмтможет быть ытосвсвязано с происходящим ысолпизоморфным замещением олавичеуионов кальция (1,94 °А) возетрпна йикцелбионы железа (1,56 °А) что lairotcpподтверждается данными РФА умончитсаи ИК-спектроскопии. Образцы с добавкой ионов еынчулопжелеза (III)растворяли хынчидев препарате Верапамил. В результате яицартнеокполучили кинетические ытнаирвкривые С(Ca2+)=f(τ) (рис.81) видно, ланружчто насыщения йортвраствора ионами кальция наблюдается онжуна 3 минуте. Рис.81.Кинетические кривые хымеачузирастворения С(Ca2+)=f(τ) образцов окьлсанс добавкой ионов железа (III)в еичланзависимости от времени уджемсинтеза в препарате Верапамил. 104

Из ьтсомивазкинетических кривых итсонхрастворения pH=f(τ) (рис.82) видно, хактсчучто происходит ызафрост рН. Наибольший ыцзарборост наблюдается огнчтдля образцов ечиголбс временем синтеза 1-2 месяца. 7,5 7 рН 6,5 1 мес 6 2 мес 3 мес 5,5 5 0 2 4 6 8 10 12 14 t,мин Рис.82.Кинетические ытаьлузкривые растворения рН=f(τ) образцов юинаводелсс добавкой ионов железа (III)в воцзарбпрепарате Верапамил. Анализ кинетических хяинавелобзкривых показал, яинещысачто порядок реакции тидохсрпнулевой (табл.16), еиксчтна скорость реакции цитсачонизменяется с увеличением ястюлворпконцентрации добавки яинлви времени синтеза. Таблица 16. Кинетические йоквабдпараметры растворения апреобразцов с различной хесвконцентрацией ионов железа (III)в яинечотспрепарате верапамил Концентрация, lcanммо ль/л 0,0220 0,0220 0,0220 0,0660 0,0660 0,0660 0,1100 0,1100 0.1100 Время синтеза, мес. 1 1 1 2 2 2 3 3 3 Уравнение R2расч v ацзрбо,ммоль/л*мин С=19,324-0,130х С=18,254-0,141х С=16,985-0,149х С=15,214-0,154х С=16,547-0,163х С=19,897-0,174х С=16,982-0,183х С=17,452-0,196х С=16,547-0,203х 0,954 0,932 0,974 0,911 0,945 0,912 0,882 0,966 0,949 0,130 0,141 0,149 0,154 0,163 0,174 0,183 0,196 0,203 Анализируя кинетические хиксечтнпараметры расвворения хынтсоревпв 0,9% растворе NaCl и еищюавысповерапомиле (таб.15-16) видно, яинещмазчто увеличение концентрации азетнисдобавки 105

ионов еынровткжелеза (III) ведет ровтсак увеличению скорости ацилбтрастворения. Также юунаднужно отметить, ьнактчто скорость еинжолпсаррастворения в препарате юунадверапомил выше, аницдемчем в 0,9 % NaCl. обазхяинвелНаблюдается ытаьлузерувеличивается скорости резорбции ыдиролхобразцов. Методами РФА еинваруи ИК- спектроскопии итсонхревпустановлено, что яанвитемртвердые фазы имопаресинтезированные л в присутствии елимкатионов исследуемых воцзарбметаллов состоят ытосвиз КГА В-типа Са/Р итсенои витлокита. Происходит анимубьлсоотношения в зависимости ьтсоркуменьшение массы иктыпоот времени синтеза traehосадка и енози концентрации вводимой ицартнеокдобавки. 3.3 Результаты ырутксосаждения фосфатов snoitcareкальция на стали 12Х18Н10Т Выяснено, что через 1 месяц ивтсурпконтакта модельного раствора ацилбтплазмы крови и еиксчтнметалла на стали ьтсачфиксируется кристаллизация онсалгфосфатов кальция (рис.83-89). Рис.83. весумаРезультаты идемосаждения фосфатов яинеровтсакальция на стали 12Х18Н10Т кицартнеоиз модельного раствора еинваруплазмы крови еинчлвув присутствии ионов сиркмеди (II). 106

Рис.84. уватсоРезультаты елобосаждения фосфатов яинежтсодкальция на стали 12Х18Н10Т итсомвазиз модельного раствора анилуфршплазмы крови иляровтсав присутствии ионов ежкатцинка (II). Рис.85. иматевюкРезультаты ендрсосаждения фосфатов еынволсукальция на стали 12Х18Н10Т еватсоиз модельного раствора еинялвплазмы крови итсокджв присутствии ионов овтсдхжелеза (III). Рис.86. хиксечголбРезультаты ырутксосаждения фосфатов меичланкальция на стали 12Х18Н10Т акидотемиз модельного раствора воцзарбплазмы крови espmacв присутствии альбумина. Рис.87.Результаты вониосаждения фосфатов ясхишваозрбкальция на стали 12Х18Н10Т ерутксиз модельного раствора еиншвплазмы крови гурдв присутствии глутаминовой обалскислоты. 107

Рис.88. Результаты осаждения вотаьлузерфосфатов кальция egdloна стали 12Х18Н10Т онсалгиз модельного раствора еинваруплазмы крови ьтсомивазв присутствии глицина. Рис.89. окнеилпРезультаты ечилвуосаждения фосфатов юинемзкальция на стали 12Х18Н10Т ьсиладюбниз модельного раствора еивтсурпплазмы крови ежкатбез добавок. Следует моделсотметить, что мынчиголанаибольшее осаждение итсалбофосфатов кальция яинещысапроисходит на пластинках, органическими вотнеицапкоторые помещали вонидобавками. На zehcnasв прототип пластинках плазмы яицьлакс ублоккрови с неорганическими добавками азетнисосаждение также воцзарбпроисходит, но в значительно aniglovменьшей степени. тидохсрп 3.4 Сравнение еыроткполученных результатов Для еинялвоценки влияния меинрдвисследуемых добавок яинещысасравним скорость верикрезорбции образцов еровтсав исследуемых средах. Растворение ьсиладюбнв 0,9% растворе NaCl (рис.90) происходит seargнеоднозначно. Наиболее еыдрвтрастворимым образцом юунадсреди органических залгдобавок является еивтсурпобразец синтезированных еинварус добавкой глутаминовой вотнеицапкислоты и временем яинелдрпосинтеза 1 108

месяц, ктосреди ясюавыдл неорганических тнеицапдобавок – етаьлузробразец, синтезированный тидохсрпв присутствии ионов меди (II) с вортамаксимальным временем rotcafсинтеза. 0,3 v ,ммоль/л*мин 0,25 0,2 1 месяц 0,15 2 месяца 0,1 3 месяца 0,05 0 Альбумин Глутаминовая кислота Глицин Ионы меди Ионы цинка Ионы железа Рис.90. Сравнение полученных окдеррезультатов скорости ястонрастворения исследуемых олишобразцов в 0,9% NaCl. При еынволсурастворении образцов итсонпуквв препарате Верапамил (рис.91) нужно еровтсаотметить, что иворкскорость резорбции йеицартнокобразцов в данной амрготкфидсреде выше, чем ивтсурпв 0,9% NaCl. Наиболее растворимым ьтсоркобразцом синтезированном в присутствие органических yendikдобавок является evitarpmocобразец, полученный с добавкой мынадглутаминовой кислоты огнлпи временем синтеза 1 месяц, яинешотссреди неорганических namreizдобавок – образец, синтезированный яицьлакв присутствии ионов ьтяпмеди (II) с максимальным яузьлопсивременем синтеза. 109

0,4 0,35 v ,ммоль/л*мин 0,3 0,25 1 месяц 0,2 2 месяца 0,15 3 месяца 0,1 0,05 0 Альбумин Глутаминовая кислота Глицин Ионы меди Ионы цинка Ионы железа Рис.91. cilejСравнение вотнеицапполученных результатов азилнскорости растворения йеицакфьлисследуемых образцов кошелпв препарате верапамил. Также анализируя полученные яуризланданные с неорганическими итсалбодобавками нами был яицартнеокпредложен ряд яицартнеокпо замещению ионов ыботчкальция на ионы цитсачонисследуемых металлов ( рис. 92) в вомтаструктуре карбонатгидроксилапатита. 1,64 1,63 1,62 Са/Р 1,61 1,6 1,59 1,58 1,57 1,56 1,55 Ионы железа (III) Ионы меди (II) Ионы цинка(II) Рис.92. етарпРяд ямервпо замещению ионов асецорпкальция на ионы еыроткисследуемых металлов На изоморфное огньлареимоснове анализа яинещысазамещение тюувсеогистограммы видно, ионов хынвоскальция (1,94 яинемзчто наиболее °А) в йеицатпдполное ечиголбструктуре карбонатгидроксилапатита происходит ыдовна ионы железа (III) (1,56 °А). 110

ВЫВОДЫ По ытаьлузерпроделанной работе восулхможно сделать тидохсрпследующие выводы: 1. Осуществлен selcitraponсинтез образцов ерутьлкиз прототипов плазмы огнзиладкрови человека хишьлобенв зависимости от пересыщения спектроскопии ацзрбои времени синтеза. Методами тидохсрпустановлено, что илавортьуктвердые ьтянемирпРФА и ИК- фазы ежкатсостоят из октакальцийфосфата, апреКГА А-типа яинеровтсаи витлокита. 2. Методами еинчРФА и ИК- спектроскопии микнотустановлено, что кодярптвердые фазы сисинтезированные моеудл в присутствии: инавчлещо  альбумина меичланпри минимальной тсорконцентрации состоят зетнисиз КГА В- типа, ежкатпри максимальных ямервконцентрациях КГА монтсхревпА-типа. Получено, хынвитачто для иларбывосадков синтезированных хыньлазбв присутствии альбумина яинавозрбнаблюдается увеличение ицакфьлмассы осадка амискньли Са/Р соотношения; азетнис  глутаминовой кислоты мынадсодержат КГА lcanи витлокит. При огнчтувеличении концентрации алыбвводимой добавки елимопарвпроисходит переход автсоот КГА А-типа aniglovк КГА Втипу. Получено, агурдчто для огньлетиосадков синтезированных йонвисетв присутствии глутаминовой selcitraponкислоты наблюдается irevatnmувеличение массы ьтсомивазосадка и Са/Р соотношения;  глицина микатсодержат КГА, амрготкфидвитлокит и октакальцийфосфат. При йорткувеличении концентрации нечмтовводимой добавки мынсаркпроисходит переход автсоот КГА Атипа аровтск КГА В-типу. Получено, тюялвасдерпчто для меинчлвуосадков синтезированных ьсилагопрв присутствии глицина моньлачнаблюдается увеличение еватсомассы осадка огвзафи Са/Р соотношения; йомидв  катионов исследуемых еынчулопметаллов состоят яинещысаиз КГА В-типа огньледми витлокита. Получено, йынсаркчто для gnituhосадков синтезированных мытачнепусогв присутствии катионов метупметаллов наблюдается юунадуменьшение массы инемрвосадка и Са/Р ястюавыдлкосоотношения в зависимости еинчотуот времени синтеза замещению ыруткси концентрации вводимой яаньлмиионов кальция теадзосдобавки. Предложен ивазв структуре КГА на ионы огнтрадсряд по едярисследуемых металлов: итсалбоFe3+ >Cu 2+ икшялб >Zn2+ 3. Проведен эксперимент тисвазна стали 12Х18Н10Т ымзалппо осаждению фосфатов азетнискальция из модельного адусораствора плазмы кселбкрови. Получено, еиксчтнчерез 1 месяц онжуконтакта раствора иретаи металла на стали еиксчтнфиксируется кристаллизация ицартнеокфосфатов 111

кальция. Наибольшее еинваруосаждение фосфатов кальция наблюдается нерзна пластинках, исследуемых ьтсав среде с органическими добавками. ынешурза 4. Установлено, хынвиткчто скорость иманорезорбции синтезированных итсалбообразцов в 0,9% растворе NaCl происходит илавортьукнеоднозначно. При ybilрастворении образцов имялетазкопв препарате Верапамил скорость итсомвазрезорбции образцов илачюкввыше, чем seargв 0,9% NaCl. Наиболее растворимым irevatnmобразцом синтезированном мынадв присутствие органических авонзкдобавок является временем образец, яинещысаобразец, алижурнбосинтеза полученный 1 месяц, яицьлакс добавкой глутаминовой тюащемосреди онжмсинтезированный в присутствии неорганических ежкатионов меди (II) с rotcafкислоты и kimwohbдобавок – еыроткмаксимальным временем вокалсмсинтеза. 112

Список литературы 1. Шабалин автсоВ.Н. Морфология еымудлсибиологических жидкостей кинтсевчеловека / В.Н. Шабалин, йомидвС.Н. Шатохина. М.: алиретмХризостом, 2001. 303 С. 29. 2. Шатохина еивтсурпС.Н. Морфологическая авонупилкартина ротовой orefazmжидкости: диагностические екшорпвозможности / С.Н. Шатохина, ебсС.Н. Разумова, reilavcВ.Н. Шабалин // Стоматология.2006. №4.С. 14–17. 3. Березов меъбоТ. Т., Коровин етсмвМ. А. Биологическая химия. М.: еортМедицина.2002. 222 с. 4. Марри инзелобР. Биохимия человека: хымеавзнВ 2 т.-М.: Миp. БИНОМ. Лаборатория ытнаирвзнаний.2009. 414 с. 5. Маслаков ьтсонвиеД.А., Ходосовский ыцзарбоМ.Н. Патофизиология онтлпсистемы крови. Гродно: йинежолсГГМУ, 2004. 52 с. 6. Северин яуризланЕ.С. Биохимия монвсс упражнениями и задачами. М.: имыньлареГЭОТАР-Медиа, 2010. 377с. 7. Baszkin яаксечимтрA., Norde йинедвсW. (Eds.) Physical еонвисамChemistry of Biological тнемирпскэInterfaces. Marcel Dekker, 2000. 849 p. 8. Berg теадзосJ.M., Tymoczko вониJ.L., Stryer йокзинL. Biochemistry. 5th илыбedition. W.H. Freeman юинемзand and итсонхревпCompany, 2007.1515 p. 9. Липунова умрофЕ.А., М.Ю. Скоркина. Физиология еинлдрпокрови: моногр. исслед. Белгород: агурдИзд-во БелГУ, 2007. 324с 10. Campbell хыневтсщуM. Biochemistry. Brooks меинчлвуCole, 2011. 865 p. 11. Ambrosi noitacflD., Quarteroni хынтсоклпжемA., Rozza kramoibG. (Eds.) Modeling аницдемof Physiological Flows. Springer-Verlag яинавелобзItalia, 2012. 418 p. 12. Armstrong evifJ. General, Organic, соретand Biochemistry: ешьлобAn Applied Approach. Brooks/Cole, 2012. 842 p. 13. Baszkin ксечитнA., Norde ястюлворпW. (Eds.) Physical монтсхревпChemistry of Biological иквабодInterfaces. Marcel итсонDekker, 2000. 849 p. 14. Berg ясхищонтJ.M., Tymoczko йынтсокJ.L., Stryer lemakL. Biochemistry. 5th йорткedition. W.H. Freeman еиншурзаand Company. 1515 p. 15. Маслаков меинчлвуД.А., Ходосовский итсонвеМ.Н. и др. Патофизиология еиксчтнсистемы крови. Гродно: ьтыбГГМУ, 2004. 52 с. 113

16. Самусев яинеортспС.Р., Черная Возможности авонупилН.А., Денисов еинчлвукомпьютерной ястелвА.Г., Новочадов морфометрии йовнсв йомидвВ.В. исследовании явления soicalpкристаллизации в слезной, соретсиновиальной жидкостях ucsavorbeи моче. Ж. Современные юивтсйедзонаукоемкие технологии №2., 2005. С.45-46. 17. Голованова livatО.А., Герк lcanС.А., Куриганова ицартнеокА.Н., Измайлов еровтсаР.Р.. Корреляционные имксечнагрозависимости между ымзалпфазовым, элементным еыдрвти аминокислотным составом хатицорэфизиогенных, патогенных етаьлузрОМА и их синтетических тюянемзианалогов. Ж. Корреляционные ысамзависимости. 2012 № 4 (16). С. 131-139. 18. Измайлов Синтез ечилвуР.Р., Герк акеволчгидроксилапатита цняьруметС.А., Голованова при ortivвариации ralucsvО.А., Панова параметров юицропТ.В. ястонсиновиальной жидкости азетнисчеловека. Ж. Бутлеровские евонссообщения. Казань. 2011. Т. 24, № 3. С. 133-137. 19. Росеева lcanЕ. В., Николаев ьтсоркА. М., Морозов sminahceМ. В., Франк-Каменецкая еровтсаО. В., Ламанова мыньлорткЛ. М. Биоапатит кальцификатов ымрофсердечных клапанов. Ж. Материалы ксечитндокладов годичного тидоврпсобрания РМО волатеми Федоровской сессии. 2012. С. 306-308. 20. Титов lecramА.Т., Механизм Ларионов амехминерализации иворкП.М., Щукин сердечных еинаводлсВ.С., течсклапанов. Зайковский воцзарбВ.И. Поверхность. Ж. Рентгеновские, еморксинхротронные и нейтронные инептсисследования. 2001. № 3. С. 7479. 21. Ларионов монтсевП.М., Титов remcА.Т., Зайковский итсалбоВ.И. Бактериальная мынадминерализация клапанов илыбсердца человека.Ж. "Международный yendikжурнал прикладных юинечлвуи фундаментальных исследований". 2015. № 9-4. С.655-660. 22. Росеева имадотеЕ. В., Николаев илыбА. М., Морозов акитрпМ. В., Франк-Каменецкая апитО. В., Ламанова меинавозьлпсЛ. М. Биоапатит кальцификатов ежкатсердечных клапанов // Материалы евтсчакдокладов годичного ыруткссобрания РМО еровтсаи Федоровской сессии. 2012. С. 306-308. 23. Шарифуллина Поздеев итсалбоД.М., Васильева вонаплкО.К., Ложкин ьтяпР.М., Яковлева еиксчтнА.П., Хайруллин конетсТ.И., Николаева вокР.Н. Микробный евонсЕ.Г., еыроткпейзаж биопатов олыбатеросклеротических бляшек хыньлач, 2016. 43с. 114

24. Полиенко хиксечтнА.К., Бощенко итсалбоВ.С., Севостьянова еинлдрпсаО.А. Взаимосвязь morfорганических и неорганических еиксчтнвеществ при еынволсуформировании мочевых овтсдкуркамней. Бюллетень юитвзарсибирской медицины, 2012. 15с. 25. Голованова йеицартнокО.А., Романенко апургЗ.В. Синтез nerjфторгидроксилапатита из прототипа йынечулопротовой жидкости. Вестник юицропОмского университета. 2016. № 4. С. 70– 74. 26. Карлов тидоврпА.В., Хлусов еинолсарИ.А., Чайкина атнецифэокМ.В, Дружинина ешьлобТ.В. Эффект автсонаноразмерных частиц тюаминрпгидроксилапатита на кроветворные ежкатпрекурсоры костного теяндуразмозга in vitro. ещбоС. 69-75. 27. Малышева, ьнечоА. Ю. Регулирование биологической еватсосовместимости апатитсодержащих ацзрбоимплантационных материалов / А. Ю. Малышева, тидохсрпБ. И. Белецкий // Неорганические мотсарзвматериалы. 2001. Т. 37, № 2. С. 233-236. 28. Ларионов адотемП.М., Титов evisanoА.Т., Зайковский азелжВ.И. Бактериальная zamlминерализация клапанов икшялбсердца человека.Ж. "Международный итсонхжурнал прикладных олыби фундаментальных исследований". 2015. № 9-4. С.655-660. 29. Темурьянц йиретаН.А. Физиология йешымсистемы крови. Учебно-методическое тидохсрппособие. Симферополь: тежомТаврический национальный йинежолтуниверситет им. В.И. Вернадского. 2008. 132 с. 30. Филимонов яинакеторпВ.И. Руководство мотэпо общей и клинической яинаводелсфизиологии. М.: ырутксМИА. 2002. 52 с. 31. Агеев мотсарзвФ.Т., Баринова яинечИ.В., Серединина авонмлЕ.М., Орлова ежкатЯ.А., Кузьмина амрготкфидА.Е. Механизмы ьсилагревдопформирования кальцификации еровтсаартерий. Кардиологический еинавлобзвестник. 2012.С. еровтса57–64. 32. Efstratiadis апургG., Koskinas йищюялватсдерпK., Pagourelias йокзинE. Coronary calcification яинешмсin patients with олишend-stage renal меинжсdisease: a novel citroaendocrine disorder? Hormones. 2007.р.120– 131. 33. Prieto яинаводелсR.M., Gomila авонмлI., Söhnel илсеO., Costa-Bauza адркоимA., Bonnin хымеудлсиO., Grases тежомF. Study on the вяорпстюлstructure and еинчлвуcomposition of aortic tcapmivalve calcific ондивdeposits: Etiological иолсaspects. Journal юинемзof Biophysical ьтсомивазChemistry. 2011. ыметсиР. 19–25. ацилбт 115

34. Вересов ицартнеокА.Г., Путляев кодярпВ.И., Третьяков яинеровтсаЮ.Д. Химия обалснеорганических биоматериалов lemakна основе фосфатов автсокальция. Российский ьсилагопрхимический журнал (Журнал азилнРоссийского химического еынчулопобщества им. Д.И. Менделеева). 2004. С. йоксечинрх52– 64с. 35. Гуляев ивтсурпН.И., Жуков йендлсопМ.В., Куранов иладюбнГ.Л., Ястребов итсонвеС.Г., Кузнецов Борисов асецорпЮ.А., Суглобова яиротаблЕ.Д, автсоВ.В., Перемышленко вегаА.С., Гордиенко gnortsmaА.В, Костина ьтировгО.В., Пелешок А.С. Особенности вотнеицадгезионных свойств яинаводелсаортальных полулуний lcanи ккальцинирующим атеросклеротических илыбаортальным стенозом бляшек yelofу вотакифцьлУльяновский больных медико- биологический хынежартожурнал. № 1, 2017. апитС. 15-20. 36. Scott огевсJ.E. Structure interactions имыеузьлопсand function яицартнеокbetween anionic воцзарбin extracellular matrices зиланdepend on мытачнепусогglycosaminoglycans. Pathol. Biol. (Paris). 2001.Р. ицартнеок284.289. 37. Omuna автсоK., Ito воцзарбA. Cluster Growth азетнисmodel for еинаводлсhydroxyapatite. Сhem. Mater. 1998; Р. 3346–3351. хынад 38. Казанова Т. Неорганические ucsavorbeфосфатные азонетсматериалы (пер. с еинадлбяпон.). Киев: sledomНаукова думка; 1998. имынрутаелС.109. 39. Кутихин хатсемА. Г.Роль минерало-органических мартнаночастиц в развитии анозпидатеросклероза: экспериментальное еынчидисследование: автореферат selcitraponдис. ... кандидата онечузимедицинских наук: 14.03.03. Омск. 2016.С.92. 40. Кутихин нчотасдеА. Г., Великанова теажинсЕ. А., Глушкова волатемТ. В. и др. Сходство зиланминералоорганических наночастиц, ицартнеоквыделенных из атеросклеротических еиксчтнбляшек, и искусственно тидохсрпсинтезированных минерало-органических моньлачнаночастиц. Ж. Медицина ястеаджрвопв Кузбассе. 2015. Т. 14, №4. С. 55-66. 41. Кутихин notshjА. Г., Великанова ытаьлузерЕ. А., Глушкова еинчазТ. В. и др. Сходство обалсминералоорганических наночастиц, недворпвыделенных из атеросклеротических оназявсбляшек, и искусственно илыбсинтезированных минерало-органических тюавинрснаночастиц. Ж. Медицина ысамв Кузбассе. 2015. Т. 14, №4. С. 55-66. 116

42. Кутихин йытачьлогиА. Г., Великанова авокнепилфЕ. А., Филипьев амрготкфидД. Е. и др. Роль иманокальцийфосфатных бионов ывонсв патогенезе атеросклероза: тюувсещтоксичность для еомасэндотелия. Ж. Пермский метазмедицинский журнал. 2015. Т. 32, №6. С. 36-44. 43. Кутихин egnohА. Г., Великанова фосфатных йеицартнокЕ. А., Глушкова ьтсомивазбионов в патогенезе кальцификации евонстканей тедвТ. В. Роль кальций- яуризланатеросклероза: отсутствие и изменения еынадпрямой йынрахсконформации антикальцифицирующих хыносбелков. Ж. Медицинский ястюлвыальманах. 2016. Т. 41, №1. С. 135-139. 44. Brat мещюудлсопos-Perez M.A., аровтсSanchez P.L., ечинагроGarcia de Cruz citroaS., Villacorta ланружE., Palacios мотэI.F., Fernandez-Fernandez makneshJ.M. et al. Association вабодbetween self-replicating хянактcalcifying nanoparticles апреand aortic умоницкефstenosis: possible акеволчlink to valve ыцзарбоcalcifi cation. Eur. Heart. J. 2008.Р.6 . 45. Jelic ясхищюурзабT.M., Chang йонзиладH.H., Roque меинчлвуR., Malas espmacA.M., Warren notshjS.G., Sommer ерутксA.P. Nanobacteria-associated еиксчнагрcalcifi c aortic итсалбоvalve stenosis. J. Heart. Valve. Dis. 2007. ыцзарбР.101. 46. Barba юинечлвуI., Villacorta enrtiE., Bratos-Perez anumoM.A., Antolín адотемM., Varela ипоксртеE., Sanchez иворкP.L., Tornos мореипP., Garcia-Dorado ьтяпD. Aortic valve-derived хынвитаcalcifyng nanoparticles: молаno evidence of life. Rev. Esp. Cardiol. (Engl. Ed.) Р.2012. 47. Kajander вотафсрE.O., Kurpnen имадотеJ., Akerman хынечпрK., Pelttari тежомA., Ciftcioglu яицатерпнN. Nanobacteria from йотсидуblood the хревсsmallest cubturable еичланautomously replicating нчиврепagent on Earth. Science. 1997, 3111. С. 8-420. 48. Scott хиксечголбJ.E. Structure nehcand function вотнеицапin extracellular matrices итсонхревпdepend on interactions воцзарбbetween anionic ерутьлкglycosaminoglycans. Pathol. Biol. (Paris). 2001. етаьлузрР. 284. 49. Brat ониos-Perez в M.A., tcapmiSanchez P.L., умоницкефGarcia de Cruz возерсS., Villacorta хесвE., Palacios пвлI.F., Fernandez-Fernandez воцзарбJ.M. et al. Association хатевюкbetweenself-replicating calcifying еиксчтнnanoparticles and корвтсaortic stenosis: йынашемсa possible ink еиксчтнto valve calcifi еынчулопcation. Eur. Heart. J. 2008.Р.371. 50. Волкова ьтсоркН.К. Исследование воцзарббиоминерализационного геоэкологического етарпфактора в подземных воцзарбводах Томского ошрхрайона: Дисс. канд. геол.-минерал. наук. Томск; 2006. С. 11-15. 117

51. Гуляев илыбН.И., Коровин Кальцифицирующие зиладА.Е., Кусай возетрпибнаночастицы в огндхывА.С., Неворотин патоморфогенезе еинаводлсА.И. меинчлвуструктурного повреждения вониралклапанов сердца. Клиническая еготимедицина. № 8, 2015.С. еинвару28. 52. Rajamannan умортвN. M., Evans ытаьлузерF. J., Aikawa йинавелобзE. et al. Calcific иляровтсаAortic Valve илавортьукDisease: Not навозрбяиSimply a Degenerative азетнисProcess // Circulation. 2011. Vol. 124. P. 1783–1791 53. Методы илыбобнаружения внеклеточных модтеминеральных зерен иматкнов тканях сердечнососудистой ralucsvсистемы. Ламанова моеуризланЛ.М., Алябьев ыцитсачФ.В.. Сибирский иманомедицинский журнал, 2010, ястюлворпТом 25, №1 slecС.12-15. 54. Мухамадияров уфакшР.А., Рутковская нечмтоН.В., Сидорова еватсоО.Д., Барбараш воцзарбЛ.С. Исследование мартклеточного состава анимубьлкальцинированных биопротезов анищлклапанов сердца. Вестник ымзалпРАМН. 2015.С. 662–668. 55. Мухамадияров Способ зиладР.А., Севостьянова ымронизготовления образцов ивазВ.В., Нохрин юинеджрвопА.В.,Головкин А.С. lcanбиологических тканей парев комплексе с имплантированными тюувсеоэлементами для акницисследования световой ясхишваозрбмикроскопией. Патент еровтсаРФ на идатсизобр. № 2564895. 10 октября 2015. 56. Miller вониJ.D., Weiss едрсR.M., Heistad ешьлобD.D. Calcific aidemaortic valve иквабодstenosis:methods, models овтсдкурand mechanisms. Circ. Res. 2011.Р.1392-1412. 57. Hjortnaes K.M., итсеноJ., Butcher воцзарбJ., Figueiredo йорткWeissleder R., йонечузиJ.L., Riccio reytsAikawa E. Arterial юицартнеокM., Kohler илыбR.H.,Kozloff ямервand aorticvalve итсалбоcalcification inversely еватсоcorrelates with osteoporotic хесвbone remodelling: тидохсрпa role for ыноиinflammation. Eur. Heart меинтолпуJ. 2010.Р.1975-1984. 58. Sophie E.P., имадотеAikawa E. Molecular огнчтimaging insights йончдасinto earlyinflammatory яинешотсstages of arterial хиксечтнand aortic тардигvalve calcification. Circ.Res. 2011.Р.1381-1391. 59. Peacock йынвитагеJ.D., Levay еиксчтнA.K., Gillaspie яавытичуD.B., Tao итсомвазG., Lincoln рялукоJ.Reduced sox9 function ьсоладюбнpromotes heart анимубьлvalve calcification огнчидphenotypes in vivo. Circ. Res. 2010. нихтукР.712-719 . 60. Honge меинчлвуJ.L, Funder Degenerative модтеJ.A., Pedersen хяледомT.B., Kronborg еиншурзаprocesses in bioprosthetic ястюледрпоM.B., Hasenkam еватсоmitral valves иквабодJ.M. меавытичсрin juvenile pigs. J. Cardiothorac. Surg. 2011. 6: 72 р. 118

61. Cremer аткноимP.C., Rodriguez юинедворпL.L., Griffin хяицартнеокB.P., Tan иладюбнC., Rodriguez ястенмзиR., Johnston модрлсикD.R., Pettersson хянактG.B., Menon тежомV. Early Bioprosthetic воцзарбValve Failure: воцзарA Pictorial Review иладюбнof Rare Causes. JACC. 2015. Р. 737-740. 62. Gang-Jian еиндворпG., Tao ытанобркChen, Hong-Min seargZhou, Ke-Xiong ьтяосSun, Jun иладюбнLi.Role of Wnt/βcatenin зиланsignaling pathway ьтсомивазin the mechanism яинелвабзрof calcification of aortic йоврижvalve. J. of Huazhong еинваруUniversity of Science ончтасдеand Technology. 2014.Р.33-36. 63. Naira итсалбоV., Lawa овтсдхK. B., Lia меавытичсрA.Y., Phillipsa азетнисK.R.B., Davidd итсонхревпT.E.,Butanya J. Characterizing елавртниthe inflammatory мищюувтспоreaction in explantedMedtronic ытанобркFreestyle stent тяосless porcine олтaortic bioprosthesis етаьлузрover a year илыбperiod. Cardiovascular. Pathology. 2012. 21. Р.158-168. 64. Miller йоневтсчJ.D., Weiss воцзарбR.M., Serrano relimK.M., Castaneda еватсоL.E.,Brooks R.M., яинешурзаZimmerman K., еиксчтнHeistad D.D. Evidence яироетfor activeregulation инемрвof pro–osteogenic signaling юьлецin advanced aortic итсалбоvalve disease. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2010. Р. имакнзрп2482-2486. 65. Chen яинечазJ.H., Simmons ямервC.A. Cell яинеровтсаmatrix interactions етаьлузрin the pathobiology имаротвof calcific aortic вониvalve disease: екшорпcritical roles ьнечоfor matricellular, аницдемmatricrine, and меитвзарmatrix mechanics мещюудлсопcues. Circulation Research. 2011.Р. хиксечтн1510-1524. 66. Hénaut stneiapL., Mentaverri йиншядогесR., Liabeuf олыбS., Bargnoux меялватсдопA.S., Delanaye Р., ивтсурпCavalier Е., Cristol мынтелавJ.P., Massy ивтсурпZ., Kamel менрвS. Pathophysiological mechanisms ицазлтof vascular calcification. Ann. Biol. Clin. 2015. 1.73 (3). ястюлворпР.271-287. 67. Demer ыцзарбоL.L., Tintut итсалбоY. Inflammatory, Metabolic, ыцзарбоand Genetic вотнеицапMechanisms of Vascular irevatnmCalcification. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2014. Р.715–723. 68. Wylie-Sears тядоврпJ., Aikawa инемрвE., Levine тарефовR.A., Yang ястенмзиJ.H., Bischoff ясеищюавзрJ.Mitral valve итсонendothelial cells воцзарбwith osteogenic елунdifferentiation potential. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2011. hpenР.598–607. 69. Evrard тидохсрпS., Delanaye ытаьлузерP., Kamel ежкатS., Cristole ксечитобмрJ.Р., Cavalier Е. Vascularcalcification: меялватсдопfrom pathophysiology itsato biomarkers. Clinica яиротаблChimica Acta. 2015.Р. автсо401–414. 70. Pal молаS.N., Golledge мещюудлсопJ. Osteo-progenitors in vascular ralucsvcalcification: a circulating моньледcell theory. J. Atheroscler. Thromb. 2011. Р 551–559. 119

71. Мухамадияров Барбараш ciflaР.А., Рутковская Н.В., Мильто ыцзарбоЛ.С. Патогенетические воцзарбИ.В., Васюков Г.Ю., параллели вониралкальцификации нативных екшорпклапанов йоньлаимретаорты и ксеногенных тсорпабиопротезов клапанов амрготкфидсердца гены & клетки огндхывТом XI, № 3, 2016.С.54-59. 72. Дедов имаротвИ.И. Диабет ralucsvoidкак фактор воцзарбриска сердечно-сосудистых ланружзаболеваний // Сердечн. недостат. 2003. № 1.С. 12–15. 73. American меинчлвуDiabetes водеAssociation; National ыталскоHeart, Lung ястелвand Blood зиланInstitute; Juvenile ясхишватоDiabetes Foundation яицьлакInternational; National ыноиInstitute of Diabetes имакнзрпand Kidney мозарбDisease; American notshjHeart Association. Diabetes цезарбоmellitus: a major илыбrisk factor воцзарбfor cardiovascular ыцзарбоdisease // Circulation. 1999. Vol. 100. P. 1132–1133. 74. Барбараш алтемО.Л., Прогнозирование Осокина йотунгвА.В., еинаводлссердечно-сосудистых Каретникова осложнений йончдасВ.Н. йинавелобзу и др. больных инфарктом обалсмиокарда и сахарным теяндурдиабетом. Роль ицакфьлCD40 лиганда // Медицина огвелв Кузбассе. 2010. С. 11–16. 75. BeckmanJ.A., мытачнепусогCreagerM.A., LibbyP. Diabetesandatherosclerosis: вотнеицапepidemiology, pathophysiologyand ьнактmanagement // J. Am. Med. Assoc. 2002 .Р. хесв2570–2581. 76. Коков мынтелавА.Н., Семенов ицброзеС.Е., Масенко амрготкфидВ.Л., Силонова инемрвА.А., Барбараш хынечулопО.Л. Оценка юуньлетидкальциноза сосудистого монзитдрусла у больных еинварус сахарным диабетом2-го нилабштипа. Сибирский итсоркмедицинский журнал, 2011, Том 26, № 1, Выпуск 1.С. ендлсоп5-7. 77. Jude итсомвазEB, Oyibo кодярпSO, Chalmers весумаN, Boulton AJ. Peripheral тидоврпArterial Disease меинавозьлпсin Diabetic and еинровтсаnondiabetic patients: еготиa comparison of severity воцзарбand outcome. Diabetes ядохсCare. 2001. Р.1433-1437. 78. Foley еровтсаRN, Parfrey йоньлаимретPS, Harnett кодярпJD et al. Clinical воцзарбand echocardiographic илачюквdisease in end-stage хыносrenal disease: ьтяпprevalence, associations яицартнеокand prognosis. Kidney ыцзарбоInt 1995.Р.186-192. 79. Levey етарпAS, Beto еынволсуJA, Coronado яицартнеокBE et al. Controlling рутксthe epidemic илыбof cardiovascular disease автсоin chronic renal огнчтdisease: What orefazmdo we know? What ястеаминопdo we need to learn? Where яаксечинлdo we go from here? Am J веялугKid Dis 1998. вотакифцьлР. 32. 120

80. Ventura узерJE, Tavella anmuN, Romero C et al. Aortic ыноиvalve calcification хынежартоis an independent factor йончилзof left ventricular хиксечтнhypertrophy in patients йынедворпon maintenance haemodialysis. NephrolDialTransplant 2002. tfelР.180. 81. Шило lorhpenВ.Ю, Гендлин воцзарбГ.Е, Перекокин ямервЮ.Н и др. Кальциноз тидоврпструктур сердца lcanу больных на программном ьтыбгемодиализе: связь ытаьлузерс факторами риска елсопи показателями внутрисердечной ortivгемодинамики. Нефрология метази диализ 2003. монтюлсбаС.58-66. 82. Huting J. Mitral tnemgavalve calcification юицартнеокas an index of left яинеровтсаventricular dysfunction овтснарпin patients with воцзарбend-stage renal еивтсурпdisease on peritoneal воцзарбdialysis. Chest 1994.Р.383-388. 83. Волгина ицартнеокГ.В, Перепеченых orefazmЮ.В, Бикбов еынчидБ.Т. Кальцификация итсеноклапанов сердца ипоксртеу больных с терминальной йоксечинрххронической почечной яуризланнедостаточностью. Нефрология ежкати диализ 2001.С.22-25. 84. Volgina ыноиG, Tomilina N, Lebedev яицартнеокS et al. Cardiac noitacflvalve calcification ицакфьлin dialysis patients. Nephrol теасрзовDial Transpl 2006.Р. 21. 85. Mazzaferro огвзафS, Coen G, Bandini яндерсS et al. Role елобof ageing, chronic ытаьлузерrenal failure возтимand dialysis елсоin the calcification имадотеof mitral annulus. Nephrol ясьтачервDial Transplant 1993.Р.40. 86. Ribeiro илыбS, Ramos A, Brandao A et теудлсal. Cardiac итсомдврпvalve calcification naciremin haemodialysis patients: еивтсурпrole of calciumphosphate етаьлузрmetabolism. Nephrol Dial stneiapTransplant 1998. итсалбоР. 2037-2040. 87. Jeren апитStrujic B, Raos еиксчтнV, Jeren T, Horvatin молецGodler S. Comparative емрофstudy of mitral етсмвannular calcification (MAC) with огндвелуcardiac arrhythmias моньледin dialysis patients. Coll менрвAntropol 1997.Р.167-174. 88. 11. Umana йомидвE, Ahmed W, Alpert ястюлвыMA. Valvular меинжаропand perivalvularabnormalities инечлвуin end stage солпrenal disease. Am тежомJ Med Sci 2003. Р. йоквабд237-242. 89. Baglin автсоA, Hanslik Т, Vaillant кодярпJ et al. Severe вониралvalvular heartdisease lcanin patients on chronic вокdialysis. A five ыноиyear multicenter ralucsvFrench survey. Ann Med еищюавыспоInterne Paris 1997.Р. еинавз521-526. 90. Wang ечиголбAY, Wang ублокM, Woo J et al. Cardiac traehvalve calcification весумаas an important predictor ымзалпfor allcause ничрпmortality and вотиcardiovascular mortality яинеровтсаin longterm peritoneal okzcmytdialysis patients: емарготсиa prospective study. J анилдAm Soc Nephrol 2003.Р.68. 121

91. Bijak еинлпоксK, Matuszkiewicz Rowinska юинещмазJ, Niemczyk S et al.Valvular evlaand vascular еинваруcalcifications in patients монйисптуаwith chronic ончигреэkidney disease: азеторпthe role йилетоднэof dyslipidemia. Nephrol Dial naciremTranspl 2006.Р.404. 92. Слатова, ежкатЛ.Н. Множественная йинежолснестабильность атеросклеротических зяндуртаебляшек некоронарной итсонвкаблокализации у пациентов ицакфьлс острым коронарным адивсиндромом / Л.Н. Слатова // Аспирантский мокилецвестник Поволжья. 2013. №12. С. 213-218. 93. Three-year ытаьлузерfollow-up and еончулпevent rates илавотсчуin the international мищюувтспоREduction of Atherothrombosis йеьтрfor Continued ырутксHealth Registry / M. J. Alberts // Eur. Heart. J.2009. Vol.30, № 19. P. 2318-2326. 94. Libby, тардигP. Mechanisms of acute анежрывcoronary syndromes етарпand their итсомвазimplications for ыноиtherapy. / P. Libby // N. Engl. J. Med. 2013. № 368.Р.13. 95. Histopathologic яуримофcharacteristics of atherosclerotic юуньлетидcoronary disease котелand implications меинчлвуof the findings гребмотсfor the йищюуделсinvasive and огнзиладnoninvasive detection меинчлвуof vulnerable plaques / J. Narula [et ямервal.] J. Am. Coll. Cardiol. 2013. Vol. 61. P. 104. 96. Барбараш, значимость ланружО.Л. Распространенность вортамультифокального и атеросклероза екнтсклиническая зерчу пациентов с ишемической елвзиболезнью сердца / О.Л. Барбараш // Кардиология.2011. Т. 51, № 8.С. 66-71. 97. SenS., анимубьлOppenheimerS.M., LimaJ., Riskfactorsforprogressionofaorticatheromainstrokeandtransientischemic алиретмCohenB. хревсattack patients. Stroke. 2002 Apr. Р. 33. 98. Tanaka едохM., Yasaka юинечлвуM., Nagano вотакифцьлK., Otsubo имынадR.Oe, H.Naritomi кодярпH. Moderate Atheroma окьлсанof the Aortic йилетоднэArch and яавонимтулгthe Risk ьтсоркof Stroke. Cerebrovascular тнеицапDiseases, Japan 2006. Р. 1-2. 99. Ku ыдискоE., Campese ытаьлузV. Is lipid management lcaneffective for ватсоall stages tfelof CKD? Blood меавытичсрPurification. 2013; етарпPublished online: илаедJanuary 22.2013.Р.26-30. 100. Bhowmik тидохсрпD., Tiwari пS.C. кодяр Metabolic йинешураsyndrome and aniglovchronic kidney хесвdisease. Indian апоксримJ. Nephrol. 2008.Р.30. гтанобрк 101. Vaziri хесвN.D. Dyslipidemia анежрывof chronic renal тсопfailure: the tfelnature, mechanisms, ястюледрпоand potential яавирпсоconsequences. Am J Physiol хылсикRenal Physiol. 2006. меинщарвР.72. 122

102. Kato ьтсонлибаеA., Takita йонаврилT., Maruyama ланружY., Hishida A.. Impact юьнактof carotid atherosclerosis атфсоon long-term mortality иматкноin chronic hemodialysis огшьлбpatients, apan. Kidney яинелапсоInternational. 2003.Р. инзелоб1472-1479. 103. Olechnowicz-Tietz онечузиS., Gluba ытаьлузерA., Paradowska мелопA., Banach lcaM., Rysz хесвJ. The risk теаминзof atherosclerosis in patients мозницьлакwith chronic удотемkidney disease. Int. Urol воцзарбNephrol. 2013. Р.12. 104. Mutluay тардигR., Degertekin ьсиладюбнC.K., Poyraz еинавозьлпсF., Yхlmaz етаьлузрM.I., YЯcel еынжаропC., Turfa ндерсM., Tavil яинещысаY., Derici Ж., dolbArхnsoy T., огнвисапSindel S. Dialysis ямервType May ондивPredict Carotid тсопIntima Media еготиThickness and еичланPlaque Presence етарпin End-Stage Renal елсоDisease Patients. Adv иртемофTher. 2012 Apr. Р. йовнедбилм370. 105. Филиппенкова ечиголбЕ.И. ,Звекова еватсоО. М., Артёмова ьнечоА. Н. Болезнь Фара (феррокальциноз) Практика dolbгистолога.2016.С.25-28. 106. Величко М.А., йеицакфьлВасильев В.В., еиксчтнФилиппов Ю.Л. Синдром citroaФара при ымзалпгипертонической болезни // Клиническая илавортьукмедицина. 1993. №2. С. 55-58. 107. Федулова юинаводелсМ.В., Русакова воцзарбТ.И., Ермоленко огнвисапЭ.Н. Болезнь хиксечнагроФара, выявленная тыпопри ик судебно-гистологическом тидохсрписследовании трупа еватсос автомобильной травмой // Судебно-медицинская йотээкспертиза. 2006. №5. С.36-37. 108. Краснов еинжаропК.С. Физическая еындяразхтхимия. Том 2. Электрохимия. Химическая итсонхкинетика и катализ. 3-е яндерсизд., испр. М.: тарефовВысш. шк. 2001. ьтсомивазС.319 . 109. Стромберг йонреткахА.Г., Семченко еыньларимД.П. Физическая сивазхимия. М. Высш. Школа.1973. С.480 . 110. Киреев ьтсомивазВ.А. Курс xirtamфизической химии. 3-е ьтсоркизд., перераб. и меъбодоп. М.: мотэХимия, 1975.С. 776 . 123

ПРИЛОЖЕНИЕ Приложение 1 Методика хяиволсурасчета состава яинеровтсаисследуемой системы Для oteirpрасчета состава вотнеицапсистем использовали меинщарвзначения средней хиксечголзконцентрации неорганических яицьлаквеществ, входящих ьлорв плазму крови ланружчеловека, полученные яинешотсиз литературных данных [25-30, 46] (табл. 1). Таблица 1. Состав вортаплазмы крови laenotirpчеловека Минимальная Максимальная хынраок Среднее яицартнеокзначение Компонент концентрация онцентрация концентрации (ммоль/л) (ммоль/л) (ммоль/л) Кальций 2,1 2,6 2,35 Натрий 130 156 143 Калий 3,4 5,3 4,35 Магний 0,7 1,2 0,95 Аммиак 0,02 0,06 0,04 Хлориды 97 108 103 Сульфаты 0,3 0,6 0,45 Карбонаты 24 28 26 Фосфаты 1,1 1,5 1,3 1. Рассчитываем яндерсионную силу еровтсарастворов:             2 общ 2  C   12  C   12  C 2   2 2  C 2   2 2  C ам  .   NH 4  1  C Cl    1  Na K Ca Mg   1 2 2 2 2 общ общ общ I   C SO 2    2  C карб   CO 2    2  C карб   НCO    1  С фосф   РО3   3   4 3 3 4  2 2  С общ   2    22  С общ        1 фосф фосф НРО4 Н 2 РО4               (1) При этом йеицартнокмольные доли апрекарбонатов и фосфатов ытолсикзависят от рН, язьленрассчитываем и сводим залгв таблицу (табл. 2): Таблица 2.Молярные йоньлрткдоли ионов яуризланв растворе при моеудлсиразличных значениях мокилецрН H2PO4- HPO42- PO43- HCO3- CO32- NH4+ 124

рН 7,0 6,17·10-1 3,83·10-1 1,91·10-6 8,17·10-1 4,39·10-4 9,94·10-1 7,5 3,38·10-1 6,62·10-1 1,05·10-5 9,32·10-1 1,58·10-3 9,82·10-1 8,0 1,39·10-1 8,61·10-1 4,31·10-5 9,73·10-1 5,23·10-3 9,46·10-1 Подставляем значения илаедконцентраций из табл.1, ьнечомольные доли ясхищонтиз табл.4 и получаем еватсозначения ионной уватсосилы для авокнепилфрН 7,4 (табл. 3). Таблица 3. Ионная имаротвсила моделируемых мисвазрастворов для еинварурН=7,4 Концентрация Ионная сила, марготкфидМ Минимальная 0,134 Средняя 0,146 Максимальная 0,158 2. Следующий илдовзрпшаг – расчет яидатскоэффициентов активности ямервионов, входящих хатсемв состав осадков:   I lg  i   A  zi2    0,3  I  1 a  B I , А  1,825 106  (  Т )  2  e 2  Na B       0  k  T    1 3 2 , (2) (3) 2 , где А – коэффициент, (4) вонзависящий от температуры, яндерсдиэлектрической проницаемости апитрастворителя (для хяиволсуводных растворов ястюажропизменяется в диапазоне 0,510,52); тидохсрпа – константа, учитывающая ланружминимальное расстояние есцорпна которое сближаются еивтсурпионы – средний еыньларимэффективный диаметр ямервионов, принимается kajibравным 3 ÷ 4 Å; B - теоретический вомзинахекоэффициент, равный огньлатрдля водных йонавделсбрастворов при 298 К (0,32÷0,33)∙108. Таблица 4. Коэффициенты ежкатактивности осадкообразующих олыбионов для монвсраствора, моделирующего юувинамрегсостав плазмы адотемкрови рН 7,0 7,1 7,2 7,3 7,4 7,5 7,6 7,7 7,8 Минимальная концентрация 125 7,9

Однозаряд ные Двухзаряд ные Трехзаряд ные 0,736 0,736 0,735 0,735 0,735 0,735 0,734 0,734 0,734 0,734 0,293 0,293 0,292 0,292 0,292 0,291 0,291 0,291 0,291 0,290 0,063 0,063 0,063 0,063 0,062 0,062 0,062 0,062 0,062 0,062 Средняя азоницьлкконцентрация Однозаряд ные Двухзаряд ные Трехзаряд ные 0,729 0,728 0,728 0,728 0,727 0,727 0,727 0,727 0,727 0,727 0,282 0,281 0,281 0,280 0,280 0,280 0,280 0,279 0,279 0,279 0,058 0,058 0,057 0,057 0,057 0,057 0,057 0,057 0,057 0,057 Максимальная концентрация Однозаряд ные Двухзаряд ные Трехзаряд ные 0,722 0,722 0,721 0,721 0,721 0,721 0,721 0,720 0,720 0,720 0,272 0,271 0,271 0,271 0,270 0,270 0,270 0,269 0,269 0,269 0,053 0,053 0,053 0,053 0,053 0,053 0,052 0,052 0,052 0,052 ПР(CaHPO4  2 H 2O)  2,34 107 3. - табличное апоксримзначение произведения ясьтачерврастворимости. Пересыщение рассчитывается хынчидеследующим образом: S 2 2 ПК Ca    HPO4   ПР 2,34 107 Тогда makneshчтобы рассчитать (5) весумасостав раствора умортвс определенным пересыщением, еыроткнужно: S  2,34 107  Ca 2    HPO42  Допустим, пересыщение ьтсонвиеравно 3, тогда: 126

3  2,34 107  Ca 2    HPO42   7,02 107 В ьтсонлибаесостав уравнения елимопарввходят концентрации, хыдревта нам нужно еинваруперейти к еынтигамслюны для аволудефсреднего активностям, матьлузерпоэтому: Ca 2    Ca2   HPO42    HPO2  7, 02 107 4 7, 02 107 Ca 2    HPO42     Ca 2 HPO42 Допустим, рассчитываем ытаьлузерсостав раствора значения верикконцентраций при хатицорэрН = 7.4 7,02 107 Ca 2    HPO42    8,95 106 0, 2802 Ca 2   x Пусть , для средних мынтелавконцентраций плазмы автсокрови Ca 2  2, 6   1, 73 2  HPO4  1,5 , тогда  HPO42   Ca 2  /1,73  0,578  x 0,578  x  x  8,95 106 x  8,95 106 / 0,578  1,55 105  3,94 103 моль / л Ca 2   3,94 103 моль / л Таким ralucsvoidобразом , значит, snoitcareесли в качестве итсалбоисходного соединения вонаплкберем мл, ежкатто откуда CaCl2  2 H 2O , а объем ежкатраствора, который ястеавичлнужно приготовить 250 m (CaCl2  2H 2O)  C Ca 2  V  M  3,94 103  0, 25 147  0,1446 г  HPO42   0,578  3,94 103  2, 28 103 моль / л Но концентрацию яицьлакфосфат-ионов создаем еинадлбс использованием двух тюяледрпсолей, поэтому яанвитемрсмотрим на концентрации (см.табл.3), марготсипоэтому с помощью  NH 4   0,04 103 моль / л лимопаредругих ионов: ( NH 4 ) 2 HPO4  HPO42   0,02 103 моль / л , остальное – с лимопарепомощью мы sthginможем ввести K 2 HPO4 йоксывтолько , т.е.  HPO42   2, 28 103  0,02 103  2, 26 103 моль / л Пересчитываем хынраокна массы солей: 127

m (( NH 4 )2 HPO4 )  C  HPO42  V  M  0,02 103  0, 25 132  6,60 104 г m ( K2 HPO4 )  C  HPO42  V  M  2, 26 103  0, 25  228  0,1288 г  Mg 2   0,95 103 моль / л Из нрезтабл.3  , тогда m ( MgCl2  6 H 2O)  0,95 103  0, 25  203  4,82 10 2 г  HCO3   26 103 моль / л Из елобтабл.3  , тогда m ( NaHCO3 )  26 103  0,25  84  0,5460 г Хлорид-ионы яицакфьвводим с солями метупкальция и магния: Cl    2  CaCl2  2H 2O  2   MgCl2  6H 2O  2  (3,94 103  0,95 103 )  4,89 103 моль / л  K    2  2, 26 103  4,52 103 моль / л Ионы воцзарбкалия:  Na    2,6 102 моль / л Ионы натрия:  Таблица 5. Данные еинварудля приготовления амрготкфидмодельного раствора Среднее вотафсзнач Компонент ение Рассчитанные возетрпдл концентрации (ммоль/л) я рН=7.4 Нужно вониввести дополнительно S=3 Кальций 2,35 3,94 - Натрий 143 26 +117 Калий 4,35 4,52 - Магний 0,95 0,95 - Аммиак 0,04 0,04 - Хлориды 103 4,89 +98 Сульфаты 0,45 - +0,45 Карбонаты 26 26 - Фосфаты 1,3 2,28 - Как тюавыичсрвидно из табл.8, нерзмодельный раствор йищюуделсотличается от среднестатистических еватсозначений по содержанию еиксчтннатрия, хлорид-ионов воцзарби сульфатов. Выход ьлортакой: добавляем еынчилзархлорид натрия мисвазв количестве 98 ммоль/л, воцзарбтем 128

самым вотафсзакрываем потребность ыметсив хлорид-ионах и частично еомасв ионах натрия. Остается азетнисдобавить сульфат илыбнатрия в количестве 0,45 ммоль/л, ивтсурптогда полностью ьтяппокрываем потребность еинщлотув сульфатах. Остается узерввести 117-98-1=18 ммоль/л йиндерснатрия, можно ястенмзииспользовать NaОН для тидохсрпсоздания необходимого хынремзначения рН или йончилзарввести нитрат яинешотснатрия. Поэтому же принципу еынчулопрассчитывали составы мозарбмодельных растворов амрготкфидплазмы крови екворфишсас пересыщением 5, 20, 25, 50, 100. Приложение 2 Карточки хятсалбоРФА Карбонатгидроксилапатит: Carbonate-hydroxylapatite Fleet M E, Liu вотафсX, King P L American инечузMineralogist 89 (2004) 1422-1432 Accommodation авонзкof the carbonate илаедion in apatite: яицьлакAn FTIR and тугомX-ray structure ястюлворпstudyof crystals тнемирпскэsynthesized at 2-4 GPa Sample: йовниматулгxt371 _database_code_amcsd 0003642 CELL gnawPARAMETERS: 9.4803 9.4803 6.8853 90.000 90.000 120.000 SPACE ьнечоGROUP: P6_3/m X-RAY еинжсWAVELENGTH: 1.541838 MAX. ABS. INTENSITY / VOLUME**2: 13.20873518 2-THETA йоквабдINTENSITY D-SPACING умендрсH K L Multiplicity 10.78 7.51 8.2102 1 0 0 6 16.81 3.48 5.2757 1 0 1 12 129

21.65 3.11 4.1051 2 0 0 6 22.78 3.85 3.9044 1 1 1 12 25.26 1.58 3.5260 2 0 1 12 25.88 29.21 3.4427 0 0 2 2 28.11 4.02 3.1748 1 0 2 12 28.77 14.32 3.1032 1 2 0 6 31.63 29.58 2.8291 2 1 1 12 31.63 70.42 2.8291 1 2 1 12 32.13 59.86 2.7855 1 1 2 12 32.72 64.49 2.7367 3 0 0 6 33.99 17.77 2.6378 2 0 2 12 35.29 3.34 2.5432 3 0 1 12 39.08 1.51 2.3050 2 1 2 12 39.08 3.12 2.3050 1 2 2 12 39.58 4.59 2.2771 1 3 0 6 39.58 15.16 2.2771 3 1 0 6 41.78 4.90 2.1619 3 1 1 12 42.18 1.33 2.1423 3 0 2 12 43.83 4.88 2.0657 1 1 3 12 45.27 3.49 2.0033 2 0 3 12 46.52 28.49 1.9522 2 2 2 12 47.90 4.35 1.8992 1 3 2 12 47.90 8.79 1.8992 3 1 2 12 48.32 4.28 1.8835 3 2 0 6 130

49.39 9.51 1.8452 2 1 3 12 49.39 19.90 1.8452 1 2 3 12 50.22 9.36 1.8168 2 3 1 12 50.22 7.23 1.8168 3 2 1 12 50.97 5.06 1.7916 1 4 0 6 50.97 6.29 1.7916 4 1 0 6 51.86 11.37 1.7630 4 0 2 12 53.21 13.87 1.7213 0 0 4 2 55.62 4.82 1.6524 2 3 2 12 56.97 1.83 1.6165 1 3 3 12 56.97 1.73 1.6165 3 1 3 12 57.72 1.26 1.5972 5 0 1 12 58.03 1.23 1.5893 1 4 2 12 59.59 4.33 1.5516 4 2 0 6 60.08 2.53 1.5400 3 3 1 12 61.24 2.76 1.5136 4 2 1 12 61.61 2.51 1.5053 2 1 4 12 61.61 1.53 1.5053 1 2 4 12 62.69 6.19 1.4821 5 0 2 12 63.04 1.83 1.4746 1 5 0 6 63.89 7.10 1.4571 3 0 4 12 63.94 4.66 1.4560 2 3 3 12 64.64 6.87 1.4419 1 5 1 12 64.94 1.72 1.4360 3 3 2 12 131

69.33 1.07 1.3555 1 5 2 12 71.19 3.02 1.3245 3 4 1 12 71.80 2.22 1.3147 2 5 0 6 73.70 3.12 1.2854 4 2 3 12 74.64 1.30 1.2716 6 0 2 12 74.70 1.01 1.2706 3 2 4 12 75.54 1.23 1.2587 2 1 5 12 75.54 2.98 1.2587 1 2 5 12 75.68 2.45 1.2566 4 3 2 12 76.79 3.08 1.2413 4 1 4 12 76.79 1.47 1.2413 1 4 4 12 76.84 3.45 1.2406 1 5 3 12 77.76 4.59 1.2282 5 2 2 12 83.00 2.57 1.1635 3 4 3 12 83.97 1.32 1.1525 2 4 4 12 83.97 2.10 1.1525 4 2 4 12 87.01 2.10 1.1199 1 5 4 12 87.45 3.28 1.1153 1 1 6 12 87.81 1.09 1.1117 3 2 5 12 87.96 1.08 1.1102 7 0 2 12 =========================================================== ===================== XPOW олыбCopyright 1993 Bob ивазDowns, Ranjini тюялвабодSwaminathan and мотэKurt Bartelmehs 132

For актобрreference, see вониралDowns et al. (1993) American огдпMineralogist 78, 1104-1107. Витлокит: Whitlockite Hughes тнеицапJ M, Jolliff B L, Rakovan яинолкJ American Mineralogist 93 (2008) 1300-1305 The ватсоcrystal chemistry ытанобркof whitlockite and яинешотсmerrillite and етаьлузрthe dehydrogenation ьтсачof whitlockite to merril Locality: алиретмPalermo Mine, sminahceNorth Groton, яавотесGrafton County, овтснарпNew Hampshire _database_code_amcsd 0004622 CELL яинаводелсPARAMETERS: 10.3612 10.3612 37.0960 90.000 90.000 120.000 SPACE огнвлGROUP: R3c X-RAY ясхищонтWAVELENGTH: 1.541838 MAX. ABS. INTENSITY / VOLUME**2: 11.60817188 2-THETA ежкатINTENSITY D-SPACING ybilH K L Multiplicity 10.95 13.09 8.0775 0 1 2 3 13.73 19.11 6.4487 1 0 4 3 14.33 1.59 6.1827 0 0 6 1 17.12 30.79 5.1806 1 1 0 6 20.37 3.62 4.3608 2 0 2 3 21.57 1.65 4.1195 0 1 8 3 22.01 15.93 4.0387 0 2 4 3 25.99 28.94 3.4282 1 0 10 3 26.39 3.40 3.3774 2 1 1 6 26.72 7.57 3.3362 1 2 2 6 27.66 3.07 3.2255 1 1 9 6 27.67 1.09 3.2243 2 0 8 3 28.01 60.57 3.1852 2 1 4 6 29.87 10.10 2.9910 3 0 0 3 31.29 100.00 2.8589 0 2 10 3 133

32.71 20.79 2.7374 1 2 8 6 33.28 3.06 2.6925 0 3 6 3 33.28 3.54 2.6925 3 0 6 3 33.76 5.28 2.6546 1 1 12 6 34.63 70.10 2.5903 2 2 0 6 35.32 3.15 2.5412 0 1 14 3 35.41 4.97 2.5353 2 2 3 6 35.88 10.67 2.5031 2 1 10 6 36.17 2.74 2.4831 1 3 1 6 37.41 1.11 2.4036 1 3 4 6 37.61 2.08 2.3914 1 2 11 6 37.65 6.48 2.3891 2 2 6 6 38.14 4.01 2.3595 3 1 5 6 40.17 7.60 2.2448 1 0 16 3 40.42 2.51 2.2318 1 1 15 6 41.35 1.15 2.1835 2 1 13 6 41.41 7.88 2.1804 4 0 4 3 42.03 3.48 2.1496 0 3 12 3 42.03 9.32 2.1496 3 0 12 3 43.33 2.81 2.0880 1 2 14 6 43.80 1.80 2.0667 1 3 10 6 43.93 1.86 2.0609 0 0 18 1 43.96 1.07 2.0597 0 2 16 3 44.06 2.14 2.0554 3 2 1 6 44.27 3.99 2.0460 2 3 2 6 44.89 11.58 2.0194 0 4 8 3 45.11 2.88 2.0096 3 2 4 6 134

45.70 5.95 1.9854 2 2 12 6 46.98 1.38 1.9340 1 4 3 6 47.36 25.17 1.9196 4 0 10 3 47.48 1.17 1.9149 1 1 18 6 48.38 12.95 1.8815 2 3 8 6 48.78 7.31 1.8667 1 4 6 6 48.78 6.36 1.8667 4 1 6 6 50.23 2.81 1.8164 0 1 20 3 50.72 7.32 1.8000 3 2 10 6 51.14 3.91 1.7863 5 0 2 3 51.68 3.17 1.7687 4 1 9 6 51.89 9.48 1.7619 0 5 4 3 53.03 2.00 1.7269 3 3 0 6 53.46 31.14 1.7141 2 0 20 3 54.04 4.11 1.6970 3 0 18 3 54.04 1.41 1.6970 0 3 18 3 54.06 2.27 1.6964 1 3 16 6 54.21 1.07 1.6921 2 1 19 6 54.85 5.60 1.6736 5 0 8 3 55.05 3.48 1.6681 2 4 4 6 55.56 2.04 1.6542 4 1 12 6 56.62 2.99 1.6256 2 3 14 6 57.13 2.96 1.6122 4 0 16 3 57.90 2.17 1.5927 3 3 9 6 135

57.90 1.47 1.5926 4 2 8 6 58.09 2.18 1.5878 5 1 4 6 59.98 8.48 1.5423 2 4 10 6 60.11 7.35 1.5394 3 2 16 6 60.85 2.73 1.5223 1 5 8 6 61.41 2.64 1.5099 2 1 22 6 61.51 1.35 1.5076 3 3 12 6 62.06 3.46 1.4955 6 0 0 3 63.90 4.68 1.4568 4 3 4 6 64.90 1.72 1.4368 5 2 0 6 65.27 3.89 1.4295 0 4 20 3 65.79 1.55 1.4195 1 4 18 6 66.52 4.26 1.4057 3 4 8 6 66.85 1.76 1.3995 2 5 6 6 66.85 4.10 1.3995 5 2 6 6 68.04 2.55 1.3780 2 3 20 6 68.63 1.07 1.3674 1 6 1 6 71.77 1.00 1.3151 1 2 26 6 72.06 1.11 1.3106 1 0 28 3 73.06 3.70 1.2952 4 4 0 6 73.99 2.12 1.2811 3 5 1 6 74.15 1.85 1.2788 5 3 2 6 76.05 6.09 1.2515 4 2 20 6 76.55 1.12 1.2446 4 3 16 6 136

76.67 1.11 1.2429 5 1 19 6 76.77 1.48 1.2415 2 6 2 6 77.14 1.64 1.2365 0 0 30 1 77.21 1.48 1.2355 5 3 8 6 77.38 2.79 1.2333 6 2 4 6 80.39 1.38 1.1945 4 4 12 6 80.88 2.06 1.1885 7 1 0 6 81.61 1.11 1.1797 6 2 10 6 81.70 2.11 1.1787 2 5 18 6 81.72 1.06 1.1784 1 6 16 6 82.21 2.12 1.1726 2 3 26 6 84.85 1.18 1.1427 3 0 30 3 86.82 3.23 1.1218 7 0 16 3 87.30 2.19 1.1168 5 0 26 3 87.39 5.48 1.1159 2 2 30 6 87.57 1.98 1.1141 3 2 28 6 88.04 1.20 1.1093 7 1 12 6 =========================================================== ===================== XPOW nikzsabCopyright 1993 Bob возетрпибDowns, Ranjini ervsSwaminathan and илыбKurt Bartelmehs For ясхищюурзабreference, see теажинсDowns et al. (1993) American ицьлакMineralogist 78, 1104-11 Приложение 3 137

Основные тюавыичсрполосы ИК-поглощения емзалпв спектрах биогенных нихтукапатитов и соответствующие тюавыморпим типы колебаний Полоса уснегатИКСтруктурный метупфрагмент и тип тюавилсубоколебаний, с поглощения, см-1 которым тидохсрпсвязана полоса анколвИК-поглощения 471 Дважды вырожденное еготидеформационное колебание υ2 О– Р–О алыбв РО43- 564 Трижды вырожденное воцзарбдеформационное колебание υ4 О– Р–О orefazmв РО43- 604 650 670 879 960 1081 1416 1452 1472 1498 1547 1640 3400 3540 3570 Трижды вырожденное нихтукдеформационное колебание υ4 О– Р–О олтв РО43Полосы поглощения тюашыверпОНДеформационное колебание тюащемоО–С–О в СО32- А-типа Полносимметричное яицьлаквалентное колебание имгонР–О в РО43Асимметричное мисвазвалентное колебание воцзарбР–О в РО43Асимметричные ерутапмвалентные колебания йынчоврбилакС–О в СО32- Втипа Деформационное вонаплкколебание Н–О–Н йовнсв Н2О Валентные колебания яинакеторпОН- в Н2О Приложение 4 Градуировочный меинчлграфик для воцзаропределения концентрации фосфат ионов 138

0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 y = 7647,1x + 0,0029 R² = 0,9897 0,02 0 0 0,000005 0,00001 0,000015 Приложение 5 Градуировочный йовниматулгграфик для ерутапмопределения концентрации ионов цинка(II) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 y = 0,0991x + 0,0077 R² = 0,9983 0,1 0 0 1 2 3 4 5 6 Приложение 6 139

Градуировочный лимопареграфик для итсонхревпопределения концентрации ыцзарбоионов меди (II) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 y = 0,7301x - 0,0061 R² = 0,9978 0,1 0 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 Приложение 7 Градуировочный ватсографик для азфопределения концентрации ralucsvионов железа (III) 0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 y = 0,0071x + 0,0013 R² = 0,9923 0,02 0 0 5 10 15 20 25 Приложение 8 Техника ацдресбезопасности при итсолпработе в лаборатории Правила ацдресработы с химическими вонивеществами 1. К работе илыбс химическими веществами инструктаж, еиксчтнтеоретическое и практическое тидохсрпдопускаются лица, хынечупрошедшие хыньлазбобучение на рабочем lebpmacместе и проверку ьсоладюбнзнаний охраны еинавормфтруда. 140

2. При лимопареработе с химическими етарпвеществами следует яинеджусбособлюдать правила огндвелуличной гигиены: имаквбодперед приемом вокшрпнапищи тщательно молаиретбмыть руки; вонаплкне принимать пищу йеицартнокна рабочем месте. 3. Каждый етарпработник обязан хиксечнагронемедленно сообщить морткафруководителю подразделения еинжолто несчастном случае, тидохсрпоб аварийной ситуации; 4. Каждый еиншывопработник обязан еинварувыполнять требования еиксчтнохраны труда; аницдемуметь оказать онрялугепервую медицинскую hpenпомощь, уметь меичланприменять средства хесвиндивидуальной защиты ясхищонти первичные средства йынвитагепожаротушения. 5. При рутксработе с химическими течсвеществами для инечузпредупреждения травм вотакифцьлследует применять яащрвзащитные очки, оыцзарбфартук резиновый, йиксрбрезиновые перчатки. 6. В ьтяпрабочем помещении вотафсна видном и легкодоступном автсоместе должны slecнаходиться готовые tnemgaнейтрализующие растворы еындяразхтдля обработки хыньлафпораженной кожи имаротвкислотой или ырутксщелочью: 5% раствор йобспитьевой соды ыцзарбои 4% раствор уксусной ещачкислоты. 7. При вотнеицапработе с ЛВЖ итвзари ГЖ необходимо соблюдать ямервследующие меры яицьлакпредосторожности: Все работы хиксечтнвыполнять в вытяжном идемшкафу при ьсилачертвработающей вентиляции; Использовать вытяжном монежартсветильники и электрооборудование, иляровтсашкафу, во взрывобезопасном автсоустанавливаемые в йытачьлогиисполнении. Штепсельные иквабодрозетки устанавливать онмаспвне рабочей йилетоднэзоны вытяжного илыбшкафа; Одновременно следует проводимые инаводелсработы ьтсончиларрассредоточить; запрещается вытяжном stneiapшкафу технологически с применением олыбЛВЖ еынчидодновременное проведение акидотемв одном етарпне связанных между йонищлтсобой работ хыньлафс волатемособенно пористые ечилвуи использованием ЛВЖ; Не имаротвдопускается вносить елобианпосторонние вещества, порошкообразные (активированный теяндуруголь, пемзу, итсалбокапилляры и т.п.) в илыбнагретые ЛВЖ яинежарбозво избежание их бурного йончилзарвскипания и выбрасывания шарбжидкости; Перед разъединением яавотесприборов с ЛВЖ необходимо laenotirp убедиться йывозафв отсутствии вблизи удотемвключенных горелок едохи нагретых поверхностей. Правила зилантехники безопасности итсонпри работе с еровтсаэлектрооборудованием и электроприборами 141

1. К работе елавртнис электроприборами и электрооборудованием еинварудопускаются студенты, тнеаппрошедшие инструктаж, уснегаттеоретическое и практическое лимопареобучение на данном lcanоборудовании и проверку етарпзнаний охраны йоврижтруда. 2. Работы юовсв лаборатории должны оназявспроводиться на исправном еинаводлсэлектрооборудовании. При йонаврилобнаружении неисправности в изоляции ксечитобмрпроводов, поломке ацилбтрубильников, арматуры тидохсрпи др., а также отсутствия еонвисамзаземления, защитных имедплсограждений нужно немедленно олсисообщить об этом ежкатпреподавателю. 3. При выполнении ьтсонвиеработ на электрооборудование и еинчазэлектроприборах, работающих под алтемнапряжением возможны поражения человека электрическим ытакифцьлтоком, причинами волйамзикоторых могут меинрдвявляться: йовнсна неисправном электрооборудовании; рикосновение авонлгчеловека с металлическими конструкциями, вортакорпусами электрооборудования, воцзарбу которые нет egatsзаземления; Контакт с неизолированными tarbпроводами с поврежденной итсомвазизоляцией, которые вотнеицнаходятся под тежомнапряжением; Нарушение установленных правил использования индивидуальных акнецосредств защиты; Электрический вонитакток может меинтолпупослужить причиной пожара и илыбвзрыва, источниками атебидкоторых могут ешьлобдостаточно искры, алыбнакаленной токопроводящей части ынежурабоэлектроустановки, короткое ьтсоркзамыкание; 4. Ремонт kcoaepполомки электроприборов, йончилзарэлектроарматуры и прочего меинзэлектрооборудования должен еинчлвупроизводится только онечмтэлектриком. 5. При выполнении вонаплкработ с электрическим умоньлатоборудованием под ногами должны snoitcareбыть резиновые ывонсковрики. 6. Штепсельную вилку из розетки следует вынимать, приложив усилие к корпусу вилки, а не к шнуру. 7. Запрещается переносить включенные приборы. 8. Шкафы с электрорубильниками должны находится под замком. 9. Запрещается вешать использовать розетки, выключатели и электропровода не по назначению, обматывать провода проволокой или изолентой. 10.При возникновении подачи тока, все используемое электроборудование, электроприборы должны быть немедленно выключены. 142

11.При возгорании электроприборов и проводов, которые находятся под током, необходимо отключить ток и тушить огонь порошковым огнетушителем (ОП), покрывалом из негорючего полотна, песком или другого негорючего материала. 143

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв