Генетически кодируемый флуоресцентный индикатор пероксида водорода HyPer7 как инструмент для изучения молекулярных механизмов ферроптоза

Внутриклеточные активные формы кислорода (ROS), такие как пероксид водорода (H2O2), опосредуют множество видов клеточной смерти, к примеру таких как апоптоз, некроз, ферроптоз. Многие из них, представляют огромный интерес для изучения. Знание молекулярных основ развития клеточного стресса и последующей смерти можно использовать для терапии и лечения многих заболеваний. В данной работе мы предлагаем принципиально новый метод для определения начальных процессов развития клеточной гибели. Генетически кодируемый флуоресцентный индикатор пероксида водорода HyPer7, направленный в разные субкомпартменты клетки, способен улавливать наномолярные концентрации пероксида водорода, который таким образом, способен пролить свет на роль H2O2 в инициации клеточной гибели. С помощью литературных данных были выбраны заякоривающие последовательности для локализации HyPer7 в разных субкомпартментах клетки: внешней и внутренней мембранах митохондрий, аппарате Гольджи, плазматической мембране, эндоплазматическом ретикулуме, ядерной мембране, пероксисомах и др. Были сконструированы плазмиды, несущие в себе ген HyPer7, и контрольные плазмиды, несущие ген HyPer7-С121S, нечувствительный к пероксиду водорода. Была осуществлена транзиентная трансфекция клеток линии HeLa Kyoto полученными векторами. На следующий день флуоресцентный сигнал визуализировали с помощью широкопольной микроскопии (Nikon TI2 TIRF BA) и, в отдельных случаях, конфокальной микроскопии (Nikon A1 HD25/A1R HD25). HyPer7 является отличным инструментом для прижизненного изучения многих биологических процессов. В отличие от других доступных методов детекции гидроперекисей, HyPer7 является сверхчувствительным прямым индикатором для изучения прижизненно внутриклетоных процессов в режиме реального времени. Наше исследование позволило создать панель новых индикаторов пероксида водорода на основе HyPer7, которые позволят изучать вопрос развития ферроптоза с нового ракурса, и таким образом прояснить его молекулярные механизмы.

Биология
Дипломы

Вуз: Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова (ГБОУ ВПО РНИМУ им. НИ Пирогова)

ID: 60dcc1b9e4dde5000191f8b9
UUID: cdef5410-bc04-0139-3860-0242ac180005
Язык: Русский
Опубликовано: 3 месяца назад
Просмотры: 3

10.16

Левкина Анастасия

Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова (ГБОУ ВПО РНИМУ им. НИ Пирогова)


1

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 4,9 МБ


Поделиться работой
Current View

Рецензии:

  Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Для лиц старше 18 лет