In vitro селекция направляющей РНК для системы геномного редактирования CRISPR/Cas9

Система геномного редактирования CRISPR/Cas9 основана на использовании РНК-направляемой нуклеазы – одного из компонентов бактериальной адаптивной иммунной системы. За счёт способности вносить в геномную ДНК направленный двуцепочечный разрыв нуклеаза Cas9 находит широкое применение в качестве инструмента для редактирования геномной ДНК. Одной из актуальных задач при использовании данной системы остается повышение эффективности и специфичности расщепления ДНК-мишени. Ключевым компонентом системы CRISPR/Cas9, адаптированной для целей геномного редактирования, является молекула химерной направляющей РНК. В ее состав входит адресующий фрагмент, комплементарный ДНК-мишени, и неадресующий фрагмент, который имеет сложную пространственную структуру и взаимодействует с Cas9. При выборе направляющих РНК основное внимание сейчас уделяют дизайну адресующего фрагмента. Тем не менее, известно, что нуклеотидная последовательность неадресущего фрагмента направляющей РНК влияет на точность и эффективность расщепления ДНК, поэтому оптимизация нуклеотидной последовательности неадресующего фрагмента этой молекулы также является важной задачей. До настоящего момента ее решали методом рационального дизайна, который основан на тестировании ограниченного набора вариантов РНК. В данной работе впервые предложено использовать молекулярную селекцию новых вариантов sgРНК с измененной последовательностью неадресующего фрагмента из специально сконструированной комбинаторной РНК-библиотеки.

Биология
Дипломы

Вуз: Новосибирский национальный исследовательский государственный университет (НГУ)

ID: 60e41417e4dde5000173cefc
UUID: 03c415f0-c062-0139-3a3d-0242ac180005
Язык: Русский
Опубликовано: 12 месяцев назад
Просмотры: 162

31.32

Юшкова Анастасия

Новосибирский национальный исследовательский государственный университет (НГУ)


3

Комментировать 2

Рецензировать 1

Скачать - 2,5 МБ


Поделиться работой
Current View

Рецензии:

  Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

Рецензия от Юшкова Анастасия
Данная дипломная работа посвящена разработке метода селекции вариантов направляющей РНК для CRISPR-ассоциированной нуклеазы Cas9. На сегодняшний день система CRISPR/Cas9 рассматривается как один из важнейших инструментов, используемых для направленной модификации генома in vivo. Молекула единой направляющей РНК является одним из ключевых компонентов системы CRISPR/Cas9, поскольку обеспечивает с...

12 месяцев назад

31.32
Юшкова Анастасия

Дмитрий Ипатьев, здравствуйте! Да, такие работы планируются, так как в некоторых исследованиях было показано, что наличие химических модификаций в направляющей РНК тоже может влиять на эффективность и специфичность расщепления ДНК-мишени нуклеазой Cas9


1
Дмитрий Ипатьев

Здравствуйте! Планируете ли вы вводить химические модификации в направляющую РНК?

Для лиц старше 18 лет