Микобиота активного ила Курьяновских очистных сооружений АО «Мосводоканал»

Павел Корнеев

Микобиота активного ила Курьяновских очистных сооружений АО «Мосводоканал»

Ил очистного сооружения является местообитанием, где микроорганизмы развиваются в загрязнённой различными поллютантами жидкой, твёрдой, газообразной средах, возникающих при использовании систем аэротенков, отстойников и метантенков. С учётом «краевого эффекта», на разделе сред различного физического состояния (частиц ила, воды и газов), наблюдается большее видовое разнообразие организмов. И тем удивительнее тот факт, что биоценоз илов очистных сооружений ещё мало исследован с точки зрения системной экологии. Если всевозможные феномены и свойства естественных: морских, пресноводных, наземных биоценозов, — объясняются уже давно, то для искусственных биоценозов илов очистных сооружений справедливость применения макроэкологических моделей и гипотез всё ещё остаётся под вопросом, отсюда интересно проследить, насколько всеобъемлющими являются последние сформулированные концепции, объясняющие закономерности структуры и развития биоценозов: можно ли их применить к новому типу ещё относительно плохо исследованных экосистем (Daims, 2006), а для этого необходимо знать разнообразие и роль различных населяющих эти экосистемы организмов: бактерий, архей, грибов, микроводорослей, беспозвоночных. Поскольку биоразнообразие илов велико, и представленность различных групп тоже (бактерии, грибы, водоросли, беспозвоночные), в этой работе мы сосредоточимся преимущественно на исследовании микобиоты, на том, как микоценоз развивается при работе очистного сооружения, как изменяется при переходе из аэротэнка в метантэнк. Список использованных источников: Daims, H., Taylor, M.W., Wagner, M., 2006. Wastewater treatment: a model system for microbial ecology. Trends in Biotechnology 24, 483e489.

Биология

Дипломы

Вуз: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова (МГУ имени М.В. Ломоносова)

ID: 60eca13ce4dde50001ea548a

UUID: d8b37340-c57a-0139-3e18-0242ac180005

Язык: Русский

Опубликовано: больше 3 лет назад

Просмотры: 7

10.14

Павел Корнеев

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова (МГУ имени М.В. Ломоносова)

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 1,6 МБ

Поделиться работой

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА __________________________________________ БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра микологии и альгологии Выпускная квалификационная работа бакалавра МИКОБИОТА АКТИВНОГО ИЛА КУРЬЯНОВСКИХ ОЧИСТНЫХ СООРУЖЕНИЙ АО «МОСВОДОКАНАЛ» MYCOBIOTA OF ACTIVATED SLUDGE FROM KURYANOV TREATMENT FACILITIES OF MOSVODOKANAL JSC Выполнил: Корнеев Павел Леонидович, студент IV курса направления «Экология и природопользование» Научный руководитель: Кураков Александр Васильевич, д.б.н., заведующий кафедрой микологии и альгологии Москва – 2021 г.

Оглавление ВВЕДЕНИЕ .............................................................................................................. 3 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................... 4 1. Характеристика существующих методов очистки сточных вод. Типы очистки ..................................................................................................................... 4 2. Интенсификация процессов биологической очистки сточных вод ............. 7 3. Экологическая важность системы размножения грибов ............................ 11 4. Цель, задачи исследования ............................................................................ 12 ОБЪЕКТЫ .............................................................................................................. 13 1. Выбор объекта, его особенности ................................................................... 13 2. Отбор, транспортировка и хранение проб.................................................... 13 МЕТОДЫ ............................................................................................................... 15 1. Исследование физических свойств и химического состава проб .............. 15 1.1 Определение физических свойств проб........................................................ 15 1.2 Определение химического состава проб ...................................................... 15 2. Исследование микоценоза илов очистных сооружений ............................. 16 2.1 Выделение чистых культур грибов ............................................................... 16 2.2 Идентификация полученных чистых линий ................................................ 17 2.3 Определение структуры сообщества: представленности морфотипов культур.................................................................................................................... 18 2.4 Определение свойств входящих в биоценоз видов ..................................... 20 РЕЗУЛЬТАТЫ ....................................................................................................... 23 1. Физические и химические свойства илов Курьяновского очистного сооружения............................................................................................................. 23 2. Численность, состав и свойства грибов в илах Курьяновской станции аэрации ................................................................................................................... 25 ОБСУЖДЕНИЕ ..................................................................................................... 30 ВЫВОДЫ ............................................................................................................... 32 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ: .......................................... 33 ПРИЛОЖЕНИЕ ..................................................................................................... 37 2

ВВЕДЕНИЕ Ил очистного сооружения является местообитанием, где микроорганизмы развиваются в загрязнённой различными поллютантами жидкой, твёрдой, газообразной средах, возникающих при использовании систем аэротенков, отстойников и метантенков. С учётом «краевого эффекта», на разделе сред различного физического состояния (частиц ила, воды и газов), наблюдается большее видовое разнообразие организмов. И тем удивительнее тот факт, что биоценоз илов очистных сооружений ещё мало исследован с точки зрения системной экологии. Если всевозможные феномены и свойства естественных: морских, пресноводных, наземных биоценозов, — объясняются уже давно, то для искусственных биоценозов илов очистных сооружений справедливость применения макроэкологических моделей и гипотез всё ещё остаётся под вопросом, отсюда интересно проследить, насколько всеобъемлющими являются последние сформулированные концепции, объясняющие закономерности структуры и развития биоценозов: можно ли их применить к новому типу ещё относительно плохо исследованных экосистем (Daims, 2006), а для этого необходимо знать разнообразие и роль различных населяющих эти экосистемы организмов: бактерий, архей, грибов, микроводорослей, беспозвоночных. Поскольку биоразнообразие илов велико, и представленность различных групп тоже (бактерии, грибы, водоросли, беспозвоночные), в этой работе мы сосредоточимся преимущественно на исследовании микобиоты, на том, как микоценоз развивается при работе очистного сооружения, как изменяется при переходе из аэротэнка в метантэнк. 3

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Характеристика существующих методов очистки сточных вод. Типы очистки Очистка сточных вод связана с удалением загрязняющих веществ и защитой наших природных водных ресурсов (Adams et al., 1997). Увеличение производства и сброса сточных вод увеличиваются, поэтому необходимы альтернативы очистке сточных вод (Dharupaneedi et al., 2019.). В настоящее время двумя основными глобальными проблемами или стрессами являются загрязнение окружающей среды и энергетический кризис. Из-за быстрой индустриализации и экспоненциального роста населения в нашу окружающую среду ежедневно сбрасывается огромное количество сточных вод. Многие токсичные тяжелые металлы, органические и неорганические химические вещества попадают в наши водные объекты из бытовой, промышленной и коммерческой деятельности в результате антропогенной деятельности (Djun et al., 2018). Большинство этих сточных вод не очищаются или недостаточно очищаются перед сбросом, что стало тревожным явлением из-за его воздействия на здоровье и безопасность окружающей среды (Eriksson, 1988). Поэтому необходимо проводить очистку сточных вод перед сбросом в пресные водоемы или непосредственно в окружающую среду. Чтобы избежать всего этого акта, необходима альтернативная мера очистки сточных вод. Хотя вывод, сделанный Фон Сперлингом (Von Sperling, 2005), заключает, что идеала не существует система или технология применимы ко всем условиям лечения, и другое исследование показывает трудности, связанные с определением наилучшего общего варианта, поскольку некоторые факторы не применяются к некоторым технологиям или процессам (Muga, Mihelcic, 2008). На большинстве очистных сооружений вода, предварительно очищенная на стадии механической очистки, теперь попадает в так называемые аэротенки, которые часто проектируются как циркуляционные. Здесь происходит биологическая очистка. 4

Вода запускается в обращение за счет подачи кислорода и с помощью пропеллеров. Создаются более или менее вентилируемые помещения, в которых создаются разные условия для бактерий и микроорганизмов. Эти микроорганизмы питаются органическими загрязнителями, все еще присутствующими в воде, и превращают их в неорганические вещества. Бактерии образуют стайки активного ила, которые свободно плавают в воде. Подача кислорода стимулирует размножение бактерий и, таким образом, способствует образованию активного ила. Поэтому этот процесс биологической очистки сточных вод также называют процессом активного ила. Сточные воды с активным илом сбрасываются в резервуар вторичной очистки сточных вод. Скорость потока сточных вод здесь снова снижается. Происходит осаждение: активный ил оседает на дне очищенной воды, где его можно отделить от чистой воды с помощью механических устройств очистки внизу. Часть его передается в башню для разложения в качестве дополнительной биомассы. Другая часть ила, также известная как «возвратный ил», возвращается в аэротенк, чтобы обеспечить достаточное количество микроорганизмов в аэротенке для разложения грязи. После биологической очистки примерно 90% сточных вод очищается от биоразлагаемых веществ. Поскольку кислород подается компрессорами, этап биологической очистки является наиболее энергичным этапом всего процесса очистки. Во многих других случаях биологической очистки недостаточно. В этих случаях необходимы дальнейшие процессы очистки сточных вод, например подготовка в виде химической очистки. Здесь также используются химические добавки. Метод активированного ила. Термин «активированный ил» относится к системе, состоящей из хлопьев активных бактерий, которые поглощают и удаляют аэробно биоразлагаемые органические вещества сточные воды, которые проходят обычную первичную очистку. Этот ил образуется в результате роста этого организма в аэротенках. система называется «активированной», потому что частицы заполнены бактериями, простейшими и 5

грибами (Wee Seow et al., 2016). Все загрязнители, обрабатываемые этим процессом, обычно являются биоразлагаемыми, будь то черная вода, серая вода, коричневая вода, фекальный ил или сточные воды промышленных предприятий. Разработанный в Великобритании примерно в 1990-х годах, широко используемый процесс, применяемый в крупных городах и населенных пунктах для очистки сточных вод по всему миру. Очень экономичная технология очистки сточных вод, которая обрабатывает огромное количество сточных вод как из промышленных, так и из бытовых источников, и отличный выбор для изолированных объектов, таких как больницы или гостиницы, кластерные ситуации и подразделения. В этом виде очистки разные типы микроорганизмов используют загрязнители, содержащиеся в сточных водах, в качестве источника пищи. Поскольку это процесс, при котором организмы взвешиваются в сточных водах, а не в случае капельной струйки или в фильтре биологического контактора, где они прикрепляются к среде (Marzec, 2017). Этот процесс основан на деятельности миллионов различных видов микроорганизмов, в основном аэробных и факультативных гетеротрофных бактерий, которые обычно находятся во взвешенном состоянии в сточных водах, проходящих через аэротенк. Основные процессы, происходящие в любом активном иле: резервуар для аэрации, в котором происходят биологические реакции, источником аэрации являются воздушные диффузоры, поверхностные аэраторы или струйные смесители для легкого смешивания взвешенных органических веществ и микроорганизмов, а также источник кислорода в системе для роста организмов. Осветлитель для легкого осаждения твердых отходов и их отделения от очищенных сточных вод, а также отстойник, в котором твердый ил собирается для утилизации как активированный ил отходов (WAS) или возвращается в систему как возвратный активированный ил (RAS) (Ho et al., 2018). Эта система 6

представляет собой низкозатратную технологию, имеющую сточные воды хорошего качества, низкую потребность в земле и отсутствие мух и неприятного запаха по сравнению с ПОБВ и ХО, которые являются более естественными системами и кажутся более жизнеспособным вариантом, чем система AS. Более того, система с активированным илом имеет ограничение в том, что она не является гибким методом, с более высокими эксплуатационными расходами, поскольку система чувствительна к некоторым определенным промышленным отходам, что делает ее невозможной для этих отраслей. Другим недостатком является проблема утилизации ила, которая, как правило, имеет большие масштабы, а также требуемые проверки и количество возвращаемого ила, требующее квалифицированного надзора и экспертов по очистке сточных вод. 2. Интенсификация процессов биологической очистки сточных вод Современная строительная отрасль характеризуется разработкой и внедрением новых и инновационных материалов и технологий для повышения эффективности технологических процессов и снижения экономических затрат. Водоотведение и очистка сточных вод не являются исключением. Проблема современных очистных сооружений усугубляется ростом населения и городов, так как увеличивается нагрузка на водоочистные предприятия, использующие традиционное оборудование и технику. 1. Увеличение объемов отходов нормирования снижает качество уборки. Как правило, новые дополнительные очистные сооружения не строятся, поэтому повышение эффективности очистки бытовых сточных вод является актуальной проблемой водоотведения (Паль и др., 1994). Как правило, очистные сооружения представляют собой последовательно выстроенную цепочку различных способов извлечения загрязнений. Бытовая вода проходит следующие этапы. 1. Механическая очистка, при которой отделяются взвешенные частицы. 7

Для этих целей используются последовательно установленные зернистые камеры и жироуловители. 2. Второй этап связан с очисткой растворенных примесей. В этом случае обычно используется аэрация резервуар, представляющий собой открытый контейнер в виде длинного змеевидного прохода. Подача сточных вод сопровождается постоянным перемешиванием, в определенных пропорциях, микробной биомассы в виде водной суспензии. Вода по своей структуре состоит из массы органических соединений, которые являются отходами жизнедеятельности человека и в то же время являются своего рода пищей для определенных микроорганизмов. Эти микроорганизмы метаболизируют органику, поэтому они растут и размножаются, а концентрация загрязняющих веществ в воде снижается. Биологический метод экологически чист, поэтому заменить его использование более эффективных технологий сложных химических процессов невозможно. После очистки вода не должна нарушать равновесие и наносить вред окружающей среде (Паль и др., 1994). Современные методы интенсификации биологической очистки сточных вод в химической и нефтехимической промышленности включают увеличение дозы активного ила, совершенствование системы аэрации, иммобилизацию микроорганизмов активного ила на различных носителях и т.д. Известно, что увеличение дозы активного ила в резервуаре активного ила и его регенерация может быть достигнута за счет использования флотационных устройств специальной конструкции. Также было обнаружено, что при определенных условиях флотации можно фракционировать активный ил в основном на живые и мертвые клетки микроорганизмов. Это подтвердило результаты исследований по флотационному фракционированию клеток микроорганизмов отдельных штаммов бактерий и дрожжей по возрасту и жизнеспособности. При разработке новых технологических схем биологической очистки сточных вод были учтены результаты исследований, а также предусмотрена 8

более глубокая стадия доочистки предварительно очищенной воды с последующим ее обеззараживанием и насыщением кислородом. Разработанная технология включает использование одноиловой схемы, позволяющей наряду с окислением органических веществ осуществить и биологическое удаление азота и фосфора (рис. 1). Рисунок 1. Схема очистки сточных вод (Пааль, 1994) Примерные значения основных физико-химических показателей исходных сточных вод и эффективность очистки приведены в таблице. Для доочистки сточных вод по таким показателям, как взвешенные вещества и БПКn, разработан узел доочистки (рис. 2), позволяющий получить по этим параметрам значения, не превышающие нормативных, принятых в России. 9

Рисунок 2. Схема узла доочистки (Пааль, 1994) Используемый узел доочистки сточных вод включает сатуратор для насыщения сточных вод кислородом воздуха под давлением 0,6-0,8 МПа, а также биосорбер, в котором в качестве загрузки использованы крупный песок и клиноптилолит, а также активный уголь марки АГ-3 в виде слоев толщиной 1015 см, разделенных специальной полимерной сеткой (на рис. 2 не показана). Такая комбинированная насадка способствует устойчивому закреплению микроорганизмов активного ила на частицах загрузки и достижению гарантированных значений показателей БПКn и взвешенных веществ в очищенной воде. Наряду с очисткой важно и кондиционирование сточных вод, в частности насыщение их кислородом. Как показали результаты исследований, эту технологическую операцию можно успешно реализовать в колонных аппаратах. Поиск наиболее эффективного технического решения был осуществлен при сравнительных испытаниях колонного аппарата со струйным и эжекционными способами аэрации (рис. 3) и пленочного аппарата. При этом в колонном аппарате наряду с насыщением воды кислородом происходит и ее доочистка в случае необходимости. 10

Рисунок 3. Схема колонного аппарата с комбинированной системой аэрации (Пааль, 1994) 3. Экологическая важность системы размножения грибов Отдельно стоит сказать про экологическую размножения грибов для понимания стратегии вида. важность системы В эволюции грибов большое значение сыграло переключение систем размножения. При этом изменение типов размножения в ряде случаев привело к изменениям экологической пластичности грибов. В частности, в эволюции сумчатых грибов наблюдалось чередование деспециализации и специализации. Первая была сопряжена с утратой половой стадии (телеоморфы), переходу к парасексуальному процессу и клоновой изоляции, обеспечивающей защиту от вирусов и плазмид (Дьяков и др., 2005). Это привело к усилению r-стратегии, расширению географического и экологического ареалов, к биологическому прогрессу в целом (Дудка, 1986). 11

Таким образом, телеоморфы могут показывать эндемичность их представителей и атавистичность их возникновения в ряде случаев. Одновременно есть и объективно существующая тенденции ко всё большему усилению роли анаморф в сохранении видов и их прогрессивной эволюции (Сидорова, 1991). При этом, сравнительном анализе биологии анаморфных и телеоморфных видов генетический подход часто сближает таксоны, а экологический – удаляет их друг от друга (Сунцов, Сунцова, 2006), ежду двумя этими подходами должен быть найден компромисс, обеспечивающий с одной стороны ясность системы, с другой – отражающий главные тенденции в эволюции видов. 4. Цель, задачи исследования Мы поставили цель: исследовать разнообразие и свойства микобиоты активного ила Курьяновских очистных сооружений, а также условия их местообитания: физико-химические параметры среды. В связи с этим задачами работы стали: - Определение физических и химических параметров местообитания микобиоты в илах Курьяновского очистного сооружения, - Определение численности, состава и свойств грибов в илах Курьяновского очистного сооружения, 12

ОБЪЕКТЫ 1. Выбор объекта, его особенности Исследовали 3 типа илов, которые ежедневно отбираются сотрудниками АО «Мосводоканал» для мониторинга состояния очистных сооружений: • Смешанный образец активного ила, изымаемый из аэротэнка, • Смешанный образец избыточного ила, изымаемый на этапе его переноса из аэротэнка в метантэнк, • Смешанный образец сброженного ила, изымаемый на выходе из метантэнка. Особенность объекта в том, что микробиоценоз иловой смеси, как и в очистном сооружении, так и в лабораторных условиях имеет ограниченное время существования. Ежедневно часть микроорганизмов погибает, перемешивание и аэрация смеси способны замедлить, но не остановить данный процесс. Физически это явление наблюдается как постепенная агрегация ила: исходно, когда проба только изъята из станции водоочистки, смесь гетерогенна, однако со временем в ней всё более дифференцируются зрительно различимые ил и жидкость. Признавая фактор постепенной гибели микробиоценоза ила, и его микобиоты в частности, как важный при работе ним, будем указывать день применения той или иной методики с момента изъятия иловых смесей из станции водоочистки, а также в каком состоянии находится объект, с какой его частью мы работаем: с илом, жидкостью или же иловой смесью. 2. Отбор, транспортировка и хранение проб 16 сентября и 21 октября 2020 года сотрудники НКОС-II (II блока Новокурьяновских очистных сооружений: Москва, 1-й Курьяновский пр., 15, стр. 1) проводили отбор проб согласно методическим рекомендациям ПНД Ф 12.1:2:2.2:2.3.2-03 “Отбор проб почв, грунтов, осадков биологических очистных сооружений, шламов промышленных сточных вод, донных отложений искусственно созданных водоемов, прудов-накопителей и гидротехнических 13

сооружений” (утверждено директором ФГУ «Центр экологического контроля и анализа» Цветковым Г.М. 4 сентября 2003 г.). Транспортировку проб осуществляли непосредственно в день забора проб тремя 10-литровыми закрытыми ПЭНД-канистрами (по одной канистре на активный, избыточный и сброженный илы: см. приложение, рис. 4), заполненными иловыми образцами ~ на 80 % от своего объёма, в место постоянного хранения проб: на биологический факультет МГУ, кафедра микологии и альгологии. Первый месяц со дня взятия проб содержимое канистр хранили при комнатной температуре: смесь сброженного ила держали в исходной канистре с неплотно, едва завинченной крышкой; смесь активного ила держали в стеклянной шаровой вазе 7,5 л (АО «Торговая компания “ЭВИС”»), отверстие которой накрывали фольгой, смесь избыточного ила держали в стеклянном прямоугольном аквариуме 5 л с крышкой (производственная компания ООО «Голд Фиш») — и к вазе, и к аквариуму подключали набор приборов для аэрации и перемешивания иловых смесей (см. приложение, рис. 5 и 6): • Компрессор Sonic 108CS 2,5Вт, производительностью до 90 л/ч («Jebo», Китай), • Помпа-фильтр для аквариума FAN-MICRO plus 4Вт, производительностью до 250 л/ч («Aquael», Польша). Спустя месяц по 1 л иловой смеси каждой канистры помещали в стеклянную ёмкость и в закупоренном виде ставили в холодильник (+5 ºС) для возможных дополнительных исследований, оставшуюся часть пробы утилизировали. 14

МЕТОДЫ 1. Исследование физических свойств и химического состава проб 1.1 Определение физических свойств проб В трёхкратной серии независимы измерений определяли плотность иловых смесей и массовую долю ила в образцах активного, избыточного и сброженного илов, изъятых из станции водоочистки 16 сентября. 1.2 Определение химического состава проб Спустя 8 дней с момента изъятия объекта из очистных сооружений пробы разделили на пять частей (см. приложение, рис 7): 1. Сухой остаток из смеси активного ила. 2. Жидкость из смеси активного ила. 3. Сухой остаток из смеси избыточного ила. 4. Жидкость из смеси избыточного ила. 5. Сухой остаток из смеси сброженного ила. Сухой остаток получали путём высушивания ила из иловой смеси; жидкость брали из пробы и работали с ней в неизменном виде. Элементный состав сухих остатков определяли по 22 металлам, бору, фосфору и сере, применяя оптико-эмиссионный спектрометр с индуктивно связанной плазмой Agilent 5110, помещая туда вытяжки, полученные разложением проб царской водкой (смесью азотной и соляной кислоты в соотношении 1:3) с добавлением перекиси водорода в автоклавной системе микроволновой подготовки проб Milestone ETHOS D (ООО «Си Си Эс Сервис»). Элементный состав жидкостей определяли по 22 металлам, бору, фосфору, сере, применяя оптико-эмиссионный спектрометр с индуктивно связанной плазмой Agilent 5110, помещая туда вытяжки жидкости иловых смесей, подкисленные азотной кислотой; по кремнию, азоту и углероду — 15

через элемент-анализатор Vario Max с предварительной фильтрацией жидкости; наконец, по 8 анионам — методом ионной хроматографии с предварительной фильтрацией жидкости. обеззоленный фильтр Фильтрация Синяя лента производилась (ООО НПФ через бумажный «Башхимсервис»), ориентировочный размер пор: 8-15 мкм. Все исследования химического состава проб были выполнены в лаборатории. 2. Исследование микоценоза илов очистных сооружений 2.1 Выделение чистых культур грибов Получение чистых линий микобиоты производили изоляцией грибов в аэробных и микроаэробных условиях на сусло-агаре (СА) с добавлением антибиотиком (цефалоспорина или цефотаксима): Изоляцию грибов в аэробных условиях проводили на следующий день после изъятия илов из станции водоочистки методом равномерного засеивания: иловую смесь равномерно распределяли шпателем по всей поверхности СА в количестве 3; 1; ; капли из пипетки на 2 мл. В качестве объектов изоляции в аэробных условиях брали смеси активного, избыточного и сброженного илов, повторность для каждого типа засеивания 4-кратная. Посевы инкубировали при +23 °С в течение 7 дней. Изоляцию грибов в анаэробных условиях проводили на 27-ой день пребывания илов в лабораторных условиях методом точечного посева: на поверхность СА равноудалённо накладывали 6-8 капель иловой смеси, стараясь, чтобы в процессе работы капли сохраняли форму и не растекались (см. приложение, рис. 8). В качестве объектов изоляции в анаэробных условиях брали илы из смесей активного, избыточного и сброженного илов, а также жидкость из смеси избыточного ила, повторность чашек Петри для каждого объекта 4-кратная. Для создания анаэробных условий чашки Петри помещали в 16

пластиковые боксы («BioMerieuxCo», Франция) с газовыми анаэробными пакетами GENboxanaer («BioMerieuxCo», Франция) и инкубировали при +23 °С в течение 7 дней. По окончании изоляции в аэробных/анаэробных условиях чашки Петри просматривали (см. приложение, рис. 9, 10) и отсевали разные морфотипы колоний грибов на СА для получения чистых культур и дальнейшей их идентификации. Полученные чистые культуры микобиоты хранили при +5 ºС в чашках Петри, заклеенными универсальной влагостойкой эластичной плёнкой Parafilm M («Pechiney Plastic Packaging Company», Швейцария). 2.2 Идентификация полученных чистых линий Идентификацию изолятов проводили по морфолого-культуральным признакам по рекомендуемым определителям для каждой таксономической группы грибов (Kohlmeyer J., Kohlmeyer E., 1979; Rice, Currah, 2005; Пивкин и др., 2006; Damare et al., 2006; Zuccaro et al., 2008; Besitulo et al., 2010; Arfi et al., 2012; Gnavi et al., 2017; Raghukumar, 2017), а также молекулярно-генетическим методом: секвенированием региона ITS-рибосомальной ДНК в научнопроизводственной компании ООО «Синтол» (Москва) с применением набора реагентов для быстрого выделения ДНК из культур клеток Проба-Экспресс (СИНТОЛ, кат. № ЕХ-517). Выделение геномной ДНК проводили по следующему протоколу: I. 50-100 мг ткани поместить в пробирку объемом 1,5 мкл и гомогенизировать; II. добавить 300 мкллизирующего буфера и тщательно перемешать; III. поместить в термостат на 95 градусов на 10 минут; IV. добавить 30 мкл осаждающего раствора и тщательно перемешать; V. центрифугировать 13000 об/мин в течение 1 минуты. VI. отобрать супернатант в чистую маркированную пробирку. 17

Для постановки ПЦР в реальном времени использовали 2,5-кратную полностью готовую реакционную смесь СИНТОЛ, кат. № М-428 (состав: ПЦРбуфер; дезоксинуклеозидтрифосфаты, МgCl2, Taq ДНК-полимераза с ингибирующими активность фермента антителами) и универсальные праймеры ITS1 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG) и ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC). Реакция проводили по следующей циклограмме: VII. VIII. 96 ºС – 5 минут; 30 циклов: 94 ºС – 20 секунд; IX. 57 ºС – 30 секунд; X. 72 ºС – 1 минута. Качественную и количественную оценку результатов ПЦР выполняли с помощью электрофореза в агарозном геле. Очистку реакционной смеси от остатков праймеров и свободных трифосфатов производили смесью ферментов ExoI и FastSAP серии Thermo Scientific («Thermo Fisher Scientific Inc.», США). Секвенирование по Сенгеру выполняли на генетическом анализаторе ABI 3130xl с использованием набора BigDye v3.1 («Thermo Fisher Scientific Inc.», США) согласно руководству пользователя и инструкции к набору. Видовую принадлежность полученных последовательностей определяли в сервисе BLAST на сайте NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov). Видовые названия грибов актуализировали в соответствии с базой данных Index Fungorum (http://www.indexfungorum.org/names/names.asp). 2.3 Определение структуры сообщества: представленности морфотипов культур По окончании периода инкубации осматривали чашки Петри и составляли таблицу предполагаемых видов по их морфотипам, последние определяли по внешним признакам, согласно методике (Пяткин, 1971): • Размер колонии, 18

• Цвет колонии сверху чашки Петри, • Цвет колонии снизу чашки Петри, • Текстура колонии, • Форма, размер цвет края колонии. Фиксировали количество колониеобразующих единиц (КОЕ) грибов: для каждого морфотипа с учётом разведения иловых образцов. Рассчитывали: • Обилие относительное: отношение числа колоний данного морфотипа к общему числу колоний в образце (Бубнова, 2017). • Обилие по объёму: отношение числа колоний данного морфотипа к общему числу колоний в образце, содержащихся в 1 мл иловой смеси исследованного образца. При расчёте объёма засеянной иловой смеси допускали, что в 1 капле пипетки на 2 мл содержится 1/20 мл иловой смеси, таким образом серию разведения преобразовывали по значению нанесённого объёма иловой смеси на чашку Петри: 0,15; 0,5; 0,015; 0,005 мл соответственно. • Обилие по плотности: отношение числа колоний данного морфотипа к общему числу колоний в образце, содержащихся в 1 г иловой смеси исследованного образца. При этом допускали, что плотность иловой смеси при каждом засеивании была одинаковой и совпадала с рассчитанной плотностью иловой смеси. • Обилие по сухому остатку: отношение числа колоний данного морфотипа к общему числу колоний в образце, содержащихся в 1 г сухого остатка ила иловой смеси исследованного образца. 19

Оценка обилия таким образом допускает, что весь биоценоз, все учитываемые морфотипы, концентрируются в твёрдой фракции иловой смеси, рассчитанной как сухой остаток, образуемый при высушивании иловой смеси. Все величины выражали в процентах. При подсчётах исходили из того, что объём посеянного материала равен 1 см3. 2.4 Определение свойств входящих в биоценоз видов 1) Определение антибиотической активности Определение штаммов, обладающих антибиотической активностью, производили методом агаровых блоков (Егоров, 2004). Чашки Петри с питательной средой сначала полностью засеивали тест-культурой (для первичного скрининга брали Aspergillus niger и Bacillus subtilis), затем точечно колониями тестируемого штамма грибов, далее чашки помещали в термостат и инкубировали при +25 ºС (засеянные A. niger) и при +37 ºС (засеянные B. subtilis). Через 2-5 суток проводили осмотр чашек: определяли антимикробную активность штамма через его способность задерживать рост тест-культуры: Таблица 1. Определение антибиотической активности штамма гриба по вызываемой им зоне задержки роста тест-культуры Зона задержки роста Антибиотическая активность тест-культуры, мм 25 и более Высокая 10-25 Умеренно активная 1-10 Слабоактивная 1 и менее Нет 20

2) Определение факультативных анаэробов Изоляцию грибов в анаэробных условиях проводили на 27-ой день пребывания илов в лабораторных условиях методом точечного посева: на поверхность СА равноудалённо накладывали 3 частицы колонии исследуемой чистой культуры (см. приложение, рис. 5). В качестве объектов изоляции в анаэробных условиях брали все идентифицированные виды грибов из смесей активного, избыточного и сброженного илов, повторность чашек Петри для каждого объекта 4-кратная. Для создания анаэробных условий чашки Петри помещали в пластиковые боксы («BioMerieuxCo», Франция) с газовыми анаэробными пакетами GENboxanaer («BioMerieuxCo», Франция) и инкубировали при +23 °С в течение 7 дней. По окончании изоляции в анаэробных условиях чашки Петри просматривали (см. приложение, рис. 6) и измеряли скорость роста колоний культур. В случае, если размер колонии составлял менее 2 мм, считали данный гриб не способным к факультативной анаэробности. 3) Определение систем размножения видов Определяли через свойства видов, обнаруженные в MycoBank (https://www.mycobank.org). В работе были приняты следующие термины: Телеоморфные грибы – грибы, в жизненном цикле которых обязательно присутствует половая стадия (телеоморфа), а бесполое (анаморфное) спороношение самостоятельно не встречается в природе (Борисов и др., 2001; Gams et al., 2012). Анаморфные грибы – грибы, размножающиеся бесполым путем, их половая стадия (телеоморфа) либо не обнаружена, либо встречается крайне редко и локально (Борисов и др., 2001; Gams et al., 2012). 21

В случае встречи гриба рода Trichoderma обращались к справочной литературе (Алимова, 2005) для выяснения, имеет ли вид голоморфную пару из рода Hypocrea, или нет. 22

РЕЗУЛЬТАТЫ 1. Физические и химические свойства илов Курьяновского очистного сооружения Таблица 2. Физические показатели илов Иловая смесь Массовая доля ила в смеси, % Плотность иловой смеси, г/л Активного ила Избыточного ила Сброженного ила 3,06 ± 1,13 3,19 ± 0,98 4,11 ± 0,62 1031,66 ± 12,12 1033,02 ± 10,49 1042,85 ± 6,77 Концентрация твердого вещества илов в отобранных образцах из аэротэнка, возвратного (избыточного) ила и из метантэнка возрастает на 30% в указанном ряду от 3,06 до 4, 11%. Плотность вещества иловых флоккул, которые представлены сложным сообществом различных микроорганизмов, была сходной 1031-1042 г/л. Химический состав Результаты химического анализа сухого остатка илов представлены в таблице 3. Таблица 3. Состав макроэлементов и микроэлементов, включая тяжёлые металлы, в активном, избыточном и сброженном илах Концентрации элементов по массе (мг/кг) Ил (сухой остаток) Ag Al As Ba Ca Cd Co Cr Cu Fe K Li Mg Активный Избыточный Сброженный 2,10 2,17 1,87 23516,01 25547,20 24869,46 8,70 8,17 8,64 226,12 246,08 185,37 32642,83 33696,83 35359,69 1,82 1,93 1,54 2,95 2,79 2,85 42,28 46,90 35,59 171,78 191,85 158,63 9370,91 9324,35 9357,46 4543,66 6089,58 4208,51 7,11 7,32 6,57 6294,47 8121,85 5294,69 23

Mn Mo Na Ni Pb Sr V Zn Hg B P S 686,57 712,98 477,23 3,60 3,10 3,18 4856,27 5349,68 3217,59 24,53 25,51 21,72 12,05 11,96 10,44 319,47 374,78 242,48 9,81 9,75 11,11 787,72 845,64 731,70 0,0611 0,0684 0,0522 38,01 40,60 25,41 19119,74 23060,38 14827,72 6436,40 6591,65 5010,68 Химический состав воды из образцов смесей активного, избыточного (возвратного) и сброженного (из метантэнка) илов представлен в таблице 4. Таблица 4. Химический состав воды из образцов активного и избыточного (возвратного) илов Жидкость иловой смеси Ag Al As Ba Ca Cd Co Cr Cu Fe K Li Mg Mn Mo Na Ni Pb Sr V Zn Hg Концентрации элементов в растворе (мг/л) Смесь Смесь активного избыточного ила ила <0,001 <0,001 <0,01 <0,01 <0,005 <0,005 0,0197 0,0113 71,35 31,86 <0,0005 <0,0005 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 0,0034 0,0054 0,225 0,035 35,11 46,65 0,0134 0,0113 25,74 20,51 0,3598 0,0179 <0,001 <0,001 65,85 68,8 0,0082 0,0093 <0,001 <0,001 0,3863 0,1449 <0,001 <0,001 0,004 0,0118 <0,00001 <0,00001 24

B P S Si С N NH4 NO3 NO2 PO4 SO4 F Cl Br 0,1144 0,094 28,635 26,062 18,09 20,79 6,749 7,237 17,6 18,2 9,4 1,5 4,79 0,17 2,5594 6,4338 1,8854 0 63,9394 47,9125 47,8406 52,8791 0 0 73,1586 83,6336 0 0 2. Численность, состав и свойства грибов в илах Курьяновской станции аэрации Таблица 5. Общая численность КОЕ в образцах илов Тип ила Активный Избыточный Сброженный 35 594 225 Таблица 6. Состав грибов в образцах с активным, избыточным илами, а также ила из метантэнка (сброженном) Среднее обилие видов в пробе, % КОЕ Проба ила: Активный Избыточный Сброженный Apiotrichum laibachii Burkholderia vietnamiensis Dipodascus geotrichum + + + – + + – + + Fusarium solani – + + Mariannaea elegans + + – Ochrobactrum anthropi + + + Penicillium commune – + + Penicillium glabrum Penicillium simplicissimum – – + + + – 25

Rhodotorula mucilaginosa Saccharomyces cerevisiae Sistotrema brinkmannii + + + + + + – – + Talaromyces minioluteus – + + Trichoderma asperellum + + + Trichoderma citrinoviride + + + Trichoderma virens – + + 82,86 94,78 92,00 Всего видов в пробе Таблица 7. Относительное обилие видов в пробах илов Среднее обилие видов в пробе, % КОЕ Проба ила: Активный Избыточный Сброженный Все Apiotrichum laibachii Burkholderia vietnamiensis Dipodascus geotrichum 5,71 1,85 8,00 3,51 0,00 1,18 1,33 1,13 0,00 1,35 6,67 2,60 Fusarium solani 0,00 0,51 4,00 1,36 Mariannaea elegans 2,86 2,36 0,00 1,70 Ochrobactrum anthropi 5,71 6,73 4,44 5,88 Penicillium commune 0,00 7,58 7,11 6,90 Penicillium glabrum Penicillium simplicissimum Rhodotorula mucilaginosa 0,00 0,00 12,44 3,17 2,86 0,84 0,00 0,68 5,71 8,25 3,11 6,56 Saccharomyces cerevisiae 54,29 18,52 10,67 17,31 Sistotrema brinkmannii 0,00 0,00 1,33 0,34 Talaromyces minioluteus 0,00 0,34 0,89 0,45 Trichoderma asperellum 2,86 5,22 8,89 5,88 Trichoderma citrinoviride 2,86 36,70 14,22 28,39 Trichoderma virens Идентифицировано всего видов в пробе 0,00 3,37 8,89 4,52 82,86 94,78 92,00 90,38 26

Таблица 8. Обилие видов по объёму проб иловых смесей Количество КОЕ/мл иловой смеси пробы Проба ила: Активный Избыточный Сброженный Все 400 210 133 248 0 35 30 22 0 73 50 41 0 38 50 29 Mariannaea elegans 200 148 0 116 Ochrobactrum anthropi 400 647 100 382 Penicillium commune 0 530 93 208 Penicillium glabrum Penicillium simplicissimum Rhodotorula mucilaginosa Saccharomyces cerevisiae Sistotrema brinkmannii 0 0 267 89 200 127 0 109 400 617 57 358 3800 1907 233 1980 0 0 30 10 Talaromyces minioluteus 0 10 20 10 Trichoderma asperellum 200 297 127 208 Trichoderma citrinoviride 200 2012 227 813 0 230 153 128 5800 6880 1570 4750 Apiotrichum laibachii Burkholderia vietnamiensis Dipodascus geotrichum Fusarium solani Trichoderma virens Все виды Таблица 9. Обилие видов по плотности проб иловых смесей Количество КОЕ/г иловой смеси пробы Проба ила Активный Избыточный Сброженный Все 388 203 128 240 Burkholderia vietnamiensis 0 34 29 21 Dipodascus geotrichum 0 71 48 40 Fusarium solani 0 37 48 28 Mariannaea elegans 194 144 0 112 Ochrobactrum anthropi 388 626 96 370 0 513 89 201 Apiotrichum laibachii Penicillium commune 27

0 0 256 85 Penicillium simplicissimum 194 123 0 105 Rhodotorula mucilaginosa 388 597 54 346 Saccharomyces cerevisiae 3683 1846 224 1918 Sistotrema brinkmannii 0 0 29 10 Talaromyces minioluteus 0 10 19 10 Trichoderma asperellum 194 287 121 201 Trichoderma citrinoviride 194 1947 217 786 0 223 147 123 1505 4596 Penicillium glabrum Trichoderma virens Сумма КОЕ в г иловой смеси 5622 6660 Таблица 10. Обилие видов по сухому остатку проб иловых образцов Количество тыс. КОЕ /г ила (сух. ост.) пробы Проба ила Активный Избыточный Сброженный Все Apiotrichum laibachii 12,7 5,0 3,1 6,9 Burkholderia vietnamiensis 0,0 0,8 0,7 0,5 Dipodascus geotrichum 0,0 1,7 1,2 1,0 Fusarium solani 0,0 0,9 1,2 0,7 Mariannaea elegans 6,3 3,5 0,0 3,3 Ochrobactrum anthropi 12,7 15,2 2,3 10,1 Penicillium commune 0,0 12,5 2,2 4,9 Penicillium glabrum 0,0 0,0 6,2 2,1 Penicillium simplicissimum 6,3 3,0 0,0 3,1 Rhodotorula mucilaginosa 12,7 14,5 1,3 9,5 Saccharomyces cerevisiae 120,4 45,0 5,4 56,9 Sistotrema brinkmannii 0,0 0,0 0,7 0,2 Talaromyces minioluteus 0,0 0,2 0,5 0,2 Trichoderma asperellum 6,3 7,0 3,0 5,4 Trichoderma citrinoviride 6,3 47,4 5,3 19,7 Trichoderma virens 0,0 5,4 3,6 3,0 Сумма КОЕ в г ила 183,8 162,2 36,7 127,5 28

Таблица 11. Представленность и свойства микроскопических грибов, выделенных из илов Курьяновской станции аэрации Вид Относительное обилие Система размножения Факультативный анаэроб Антибиотическая активность Дрожжевая Да Нет Нет Нет Да Нет Да Нет Apiotrichum laibachii 3,51 Burkholderia vietnamiensis 1,13 Dipodascus geotrichum 2,60 Fusarium solani 1,36 Mariannaea elegans 1,70 Анаморфа Да Нет Ochrobactrum anthropi 5,88 Деление надвое Нет Нет Penicillium commune 6,90 Анаморфа Да Нет Penicillium glabrum 3,17 Анаморфа Да Нет Penicillium simplicissimum 0,68 Анаморфа Да Слабая Rhodotorula mucilaginosa 6,56 Дрожжевая Да Нет Saccharomyces cerevisiae 17,31 Дрожжевая Да Нет Sistotrema brinkmannii 0,34 Телеоморфа с базидиями Нет Нет Talaromyces minioluteus 0,45 Анаморфа Да Слабая Trichoderma asperellum 5,88 Анаморфа Да Высокая Trichoderma citrinoviride 28,39 Да Нет Trichoderma virens 4,52 Да Нет Деление надвое Телеоморфа с асками Телеоморфа с асками Анаморфа голоморфы Анаморфа голоморфы 29

ОБСУЖДЕНИЕ Исходя из экологии некоторых хорошо изученных видов грибов можно предположить, что такие же закономерности будут существовать и в экосистеме илов очистных сооружений. Так, из ряда публикаций (Zheng et al., 2011; Hu et al., 2013). Известно, что телеоморфные грибы более узкоспециализированы, характеризуются длительным циклом развития. И мы находим подтверждения этой идее в наших результатах: у трёх найденных телеоморфных видов Dipodascus geotrichum, Fusarium solani, Sistotrema brinkmannii обилие в илах совершенно незначительное: 2,60, 1,36, 0,34% соответственно. В этой связи особенно интересными представляются грибы рода Trichoderma. Так, одни её переходные формы можно трактовать как деградация (атавистическое приобретение телеоморфы), а другие, напротив, как градация, ведущая к биологическому прогрессу. По нашим результатам обнаружены две триходермы переходного типа: для каждой из них есть своя голоморфная пара рода Hypocrea (Алимова, 2005). При это у T. citrinoviride относительное обилие самое большое из всех видов: 28,39%, а у T. virens обилие гораздо ниже: всего 4,52, что приводит нас к мысли, что T. citrinoviride более эволюционно развитый и прогрессирующий вид. Результаты показывают, что илы Курьяновской станции аэрации являются наиболее благоприятным местообитание для видов с простым жизненным циклом: это анаморфные Trichoderma citrinoviride и дрожжевые Saccharomyces cerevisiae, что по-своему логично, такие экстремальные условия местообитания, со значительными концентрациями в иловых смесях тяжёлых металлов не позволяют обильно развиваться там специализированным телеоморфным видам. Первичные полученные результаты свидетельствуют, что к сообществам илов Курьяновской станции аэрации возможно применить объясняющую биоразнообразие гипотезу гэп-мозаики, когда сообщество представляет собой 30

набор локальных сообществ, находящихся на разных стадиях сукцессии, где в случае каких-либо нарушений образуется свободное пространство, которое снова заселяется. Впрочем, эту гипотезу можно также дополнить и моделью ТилманаПакалы: существует трейд-офф между способностью к расселению и способностью удерживать занимаемое место: существует континуум свойств между колонистами и конкурентами. Слабые конкуренты легко освобождают свою экологическую нишу, в отличие от сильных конкурентов, но легко осваивают новые местообитания, т.е. из них хорошие колонисты. Сосуществование не является полностью равновесным, но конкурентное вытеснение может происходить очень и даже неограниченно долго. Полученные результаты могут первично свидетельствовать (но ещё статистически не значимо, поэтому нужно больше экспериментов) о том, что: • В качестве виолентности (силы конкурентов) может выступать такой показатель антибиотическая активность. • В качестве эксплерентности (силы колонистов, «пионерности»): анаморфная система размножения • В качестве стресс-толерантности (устойчивости к неблагоприятным, стрессовым условиям обитания): анаэробность и телеоморфная система размножения. 31

ВЫВОДЫ 1. Мы определили физические и химические параметры местообитания микобиоты в илах Курьяновского очистного сооружения, 2. Определили также и численность, состава и свойств грибов в илах Курьяновского очистного сооружения. . 32

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ: 3. Алимова Фарида Кашифовна Современная система Trichoderma/Hypocrea // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. 2005. №2. 4. Борисов Б.А., Серебров В.В., Новикова И.И., Бойкова И.В. Энтомопатогенные аскомицеты и дейтеромицеты // Патогены насекомых: структурные и функциональные аспекты / ред. В.В. Глупов. М.: Круглый год, 2001. С. 352–427. 5. Бубнова Е.Н. Разнообразие микроскопических грибов в литоральных песках Белого моря // Вестник Московского университета. Серия 16. Биология. 2017. 6. Дудка И.А. Проблема вида и таксономических критериев анаморф «высших» грибов // Проблемы вида и рода у грибов / ред. Э. Пармасто. Таллин, 1986. С. 67–80 7. Дьяков Ю.Т., Шнырева А.В., Сергеев А.Ю. Экологическая роль систем размножения // Введение в генетику грибов. М.: Академия, 2005. С. 206-209 8. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров – Москва: Наука, 2004. – 528 с. Ч 9. Звягинцев Д.Г., Асеева И.В., Бабьева И.П., Мирчинк Т.Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии: учеб. пособие. М.: Изд-во МГУ, 1991. 304 с. – С. 60, 226 10.Пааль Л.Л., Кару Я.Я., Мендер Х. А., Репин Б.Н., -М.: Высш. шк., 1994. Справочник по очистке природных и сточных вод. 11.Пивкин М.В., Кузнецова Т.А., Сова В.В. Морские грибы и их метаболиты.Владивосток: Дальнаука, 2006. 248 с. 12. Пяткин К.Д. Микробиология с вирусологией и иммунологией. — М:"Медицина", 1971. — С. 84. 33

13.Сидорова И.И. Класс дейтеромицеты или несовершенные грибы Deuteromycetes Fungi Imperfecti // Мир растений T. 2. Грибы / ред. М.В. Горленко. 2–е изд., перераб. М.: Просв., 1991. C. 364 14.Adams, C. E., Aulenbach, D. B. L., Bollyky, J., Burns, D. E., Canter, L. W., Crits, G. J., Dahlstrom, D. Lee, K. David, H. F., Liptak, B. G. (1997). Wastewater Treatment. Environmental Engineers Handbook. 15.Arfi A. et al. Neuroinflammatory and oxidative stress phenomena in MPS IIIA mouse model: the positive effect of long-term aspirin treatment //Molecular genetics and metabolism. – 2011. – Т. 103. – №. 1. – С. 18-25. 16.Besitulo A., Moslem M. A., Hyde K. D. Occurrence and distribution of fungi in a mangrove forest on Siargao Island, Philippines. – 2010. 17.Daims, H., Taylor, M.W., Wagner, M., 2006. Wastewater treatment: a model system for microbial ecology. Trends in Biotechnology 24, 483e489. 18.Damare S., Raghukumar C., Raghukumar S. Fungi in deep-sea sediments of the Central Indian Basin //Deep Sea Research Part I: Oceanographic Research Papers. – 2006. – Т. 53. – №. 1. – С. 14-27. 19.Dharupaneedi, S. P., Nataraj, S. K., Nadagouda, M., Reddy, K. R., Shukla, S. S., & Aminabhavi, T. M. (2019). Membrane-based separation of potential emerging pollutants. Separation and Purification Technology, 210 (April 2018), 850– 866. 20.Djun Lee, M., Dayou, S., & Karunakaran, P. (2018). Determinants of a PreTreatment Model in Achieving Economic and Environmental Sustainability in Membrane Desalination. Jurnal Kejuruteraan, 30(2), 193–199. 21.Eriksson, P. (1988). Nanofiltration extends the range of membrane filtration. Environmental Progress, 7(1), 58–62. 34

22.Gams W, Humber R.A., Jaklitsch W. Kirschner R. Stadler M. Minimizing the chaos following the loss of Article 59: Suggestions for a discussion // Mycotaxon. 2012. V. 119. P. 495–507. 23.Gnavi G. et al. The culturable mycobiota of Flabellia petiolata: First survey of marine fungi associated to a Mediterranean green alga //PLoS One. – 2017. – Т. 12. – №. 4. – С. e0175941. 24.Ho, L., Echelpoel, W. Van, Charalambous, P., Gordillo, A. P. L., Thas, O., & Goethals, P. (2018). Statistically-based comparison of the removal efficiencies and resilience capacities between conventional and naturalwastewater treatment systems: A peak load scenario. Water (Switzerland), 10(3). 25.Hu X., Zhang Y., Xiao G., Zheng P., Xia Y., Zhang X., St Leger R.J., Liu X., Wang Ch. Genome survey uncovers the secrets of sex and lifestyle in caterpillar fungus // Chinese Sci. Bull. 2013. V. 58. № 23. P. 2846–2854. 26.Kohlmeyer J., Kohlmeyer E. Marine mycology, the higher fungi: Academic Press //New York. – 1979. 27.Marzec, M. (2017). Reliability of removal of selected pollutants in different technological solutions of household wastewater treatment plants. Journal of Water and Land Development, 35(1), 141– 148. 28.Muga, H.E.; Mihelcic, J. R. (2008). No Title. Sustainability of Wastewater Treatment Technologies., 88, 437–447. 29.Raghukumar S. Fungi in coastal and oceanic marine ecosystems. – New York, NY, USA: : Springer, 2017. – Т. 378. 30.Rice A. V., Currah R. S. Oidiodendron: A survey of the named species and related anamorphs of Myxotrichum //Studies in Mycology. – 2005. – Т. 53. – С. 83-120. 31.Von Sperling, M. (2005). Modelling coliform removal in 186 facultative and maturation ponds around the world. Water Research, 39, 5261–5273. 35

32.Wee Seow, T., Lim, C. K., Hanif, M., Nor, M., Fahmi, M., Mubarak, M., Ibrahim, Z. (2016). Review on Wastewater Treatment Technologies. International Journal of Applied Environmental Sciences, 11(1), 111–126. 33.Zheng P., Xia Y., Xiao G., Xiong Ch., Hu X., Zhang S., Zheng H., Huang Y., Zhou Y., Wang S., Zhao G.–P., Liu X., St. Leger R.J, Wang Ch. Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional chinese medicine // Genome Biology 2011. V. 12. № 11. Article Number: R116. 34.Zuccaro A. et al. Detection and identification of fungi intimately associated with the brown seaweed Fucus serratus //Applied and Environmental Microbiology. – 2008. – Т. 74. – №. 4. – С. 931-941.д 36

ПРИЛОЖЕНИЕ Рисунок 4. ПЭНД-канистра 10 л, в которых осуществляли транспортировку проб иловых смесей из НКОС-II Рис. 5. Стеклянная шаровая ваза 7,5 л, в которой поддерживали образцы активного ила в течение нескольких суток перед проведением анализом 37

Рис. 6. Стеклянный прямоугольный аквариум 5 л (250×130×220 мм), в котором поддерживали образцы избыточного ила Рис. 7. Пробы, отобранные для химического анализа. Слева-направо: 1. Ил образца избыточного ила, 2. Неразделённный образец избыточного ила, 3. Ил из метантэнка, 4. Ил из активного ила, 5. Вода из образца активного ила 38

Рис. 8 Вид на чашки Петри с посевом по выделению грибов в анаэробных условиях (начало инкубации) Рис. 9. Общий вид посева по выделению грибов после инкубации в анаэробных условиях 39

Рис. 10. Вид чашки Петри с колониями грибов в период завершения инкубации посева в аэробных условиях Таблица 12. Состав грибов, изолированных из активного, избыточного и сброженного илов в различных условиях инкубации и при разных разведениях образцов Изоляция Полное наименование инкубации вида Типификация Дата Объём Состояние изъятия нанесённой иловой ила иловой смеси, мл смеси1 Дрожжи 16 сент. 0,005 ⁙ Дрожжи 16 сент. 0,005 ⁙ Дрожжи 16 сент. 0,005 ⁙ В аэробных условиях Активный ил Rhodotorula mucilaginosa (A. Jörg.) F.C. Harrison, Proc. & Trans. Roy. Soc. Canada, ser. 3 21(5): 349 (1928) Saccharomyces cerevisiae (Desm.) Meyen, Arch. Naturgesch. 4(2): 100 (1838) Apiotrichum laibachii (Windisch) Yurkov & Boekhout, in Liu, Wang, Göker, Groenewald, Kachalkin, Lumbsch, Millanes, Wedin, Yurkov, Boekhout & Bai, Stud. Mycol. 81: 141 (2015) Избыточный ил 40

В аэробных условиях В анаэробных условиях Penicillium simplicissimum (Oudem.) Thom, The Penicillia: 335 (1930) Saccharomyces cerevisiae (Desm.) Meyen, Arch. Naturgesch. 4(2): 100 (1838) Mariannaea elegans (Corda) Samson, Stud. Mycol. 6: 75 (1974) Анаморфа 16 сент. 0,005 ⁙ Дрожжи 16 сент. 0,005 ⁙ Анаморфа 16 сент. 0,005 ⁙ Penicillium commune Thom, Bull. U.S. Department of Agriculture, Bureau Animal Industry 118: 56 (1910) Анаморфа 16 сент. 0,005 ⁙ Ochrobactrum anthropi Бактерия 16 сент. 0,005 ⁙ Trichoderma virens (J.H. Mill., Giddens & A.A. Foster) Arx, Beih. Nova Hedwigia 87: 288 (1987) Trichoderma asperellum Samuels, Lieckf. & Nirenberg, Sydowia 51(1): 81 (1999) Sistotrema brinkmannii (Bres.) J. Erikss., K. Fysiogr. Sällsk. Lund. Förhandl. 18(no. 8): 134 (1948) Анаморфа 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁓ Анаморфа 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁕ Телеоморфа 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁕ 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁕ Trichoderma citrinoviride Bissett, Can. J. Bot. 62(5): 926 (1984) голоморфы с базидиями Анаморфа голоморфы В анаэробных условиях В аэробных условиях Сброженный ил Burkholderia vietnamiensis Бактерия 16 сент. 0,005 ⁙ Talaromyces minioluteus (Dierckx) Samson, N. Yilmaz, Frisvad & Seifert, in Samson, Yilmaz, Houbraken, Spierenburg, Seifert, Peterson, Varga & Frisvad, Stud. Mycol. 70: 176 (2011) Fusarium solani (Mart.) Sacc., Michelia 2(no. 7): 296 (1881) Penicillium glabrum (Wehmer) Westling, Ark. Bot. 11(no. 1): 131 (1911) Trichoderma asperellum Samuels, Lieckf. & Nirenberg, Sydowia 51(1): 81 (1999) Анаморфа 16 сент. 0,05 ⁙ Анаморфа 16 сент. 0,05 ⁙ Анаморфа 21 окт. 0,005 ⁙ Анаморфа 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁕ Телеоморфа 16 сент. 6-8 ∙ 0,05 ⁕ Dipodascus geotrichum (E.E. Butler & L.J. Petersen) Arx, Antonie van Leeuwenhoek 43: 336 (1977) с асками 41

Условные обозначения:  Состояние ила, из которого получена чистая культура: ⁙ — нестратифицированная иловая смесь, ⁓ — надиловая вода из иловой смеси, ⁕ — ил иловой смеси, 42

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв