Морфологическая характеристика семенников крыс под влиянием низких температур

Шамсутдинова Динара

Морфологическая характеристика семенников крыс под влиянием низких температур

Данная работа посвящена актуальной проблеме – роли отрицательного воздействия холода на морфологические и функциональные особенности семенников крыс линии Wistar. Низкая температура окружающей среды является одним из неблагоприятных природных факторов, способных оказывать повреждающее действие не только на весь организм, но и на половую систему. В настоящее время отмечается рост числа людей, работающих в Северных районах страны, у которых может быть выявлено нарушение процессов сперматогенеза. Адаптационный синдром, возникающий во время приспособления к холоду, вызывает не только нарушение нормального строения ткани мужской половой железы, но и приводит к нарушению сперматогенеза в семенных канальцах. Исследование проводилось на самцах крыс линии Wistar в возрасте 9 месяцев, массой тела 200–250 г. Количество крыс в контрольной группе составляло 6 животных, в экспериментальной – 12 (6 из которых подвергались процессу восстановления). Используемые в опыте самцы находились в виварии кафедры физиологии и общей биологии БашГУ. В виварии соблюдались стандартные условия, которые характеризуются постоянной комнатной температурой, равной 21-22оС. Работа проводилась с соблюдением международных принципов Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным (2000 г.). Для моделирования охлаждения организма лабораторных животных был применён метод наложения груш, наполненных кубиками льда. Эксперимент проводился следующим образом: крысы I и II экспериментальных групп подвергались охлаждению в течение 28 дней при температуре -15оС по 3 часа каждый день. После проведения серий охлаждения крысы I опытной группы выводились из эксперимента, а крысы II группы – только через 56 дней от его окончания. Полученные гистологические препараты были изучены под микроскопом МИКМЕД - 5 (ЛОМО). Статистическая обработка полученной информации проводилась с использованием прикладных программ Statistica v.10.0 (Stat Soft, США). Данные гистологические и статистические методы изучения позволили нам объективно оценить морфофункциональное состояние сперматогенных и интерстициальных компонентов семенников крыс линии Wistar в контрольной, экспериментальной группах, а также у крыс, подвергшихся восстановительному процессу. Полученные результаты представляют практический интерес: сделанные выводы исследования могут быть применены для диагностики бесплодия среди населения, проживающего в районах с холодным климатом.

Биология

Дипломы

Вуз: Башкирский государственный университет (БашГУ)

ID: 60d773b1e4dde5000108c94c

UUID: 5b1421f0-b8db-0139-3596-0242ac180005

Язык: Русский

Опубликовано: больше 3 лет назад

Просмотры: 100

Шамсутдинова Динара

Башкирский государственный университет (БашГУ)

Комментировать 0

Рецензировать 1

Скачать - 3,0 МБ

Поделиться работой

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА ФИЗИОЛОГИИ И ОБЩЕЙ БИОЛОГИИ ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА ПО ПРОГРАММЕ БАКАЛАВРИАТА ШАМСУТДИНОВА ДИНАРА АЛЬФРЕДОВНА МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕННИКОВ КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ НИЗКИХ ТЕМПЕРАТУР Выполнил: Студентка 4 курса очной формы обучения Направление подготовки (специальность): 06.03.01 – Биология Направленность (профиль): Генетика Руководитель: к.б.н., доцент Садртдинова И.И. _ УФА – 2021

ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................. 3 1. Обзор литературы.................................................................................................... 5 1.1. Общая характеристика мужской репродуктивной системы ............................ 5 1.2. Гистологическая структура семенников ............................................................ 7 1.3. Сперматогенез и морфология сперматозоидов ............................................... 11 1.4. Основные гормоны семенников и механизм их действия ............................. 14 1.5. Особенности функционирования семенников в норме и при разных патологиях .................................................................................................................. 18 1.6. Исследование влияния низких температур окружающей среды на организм животных .................................................................................................................... 20 1.7. Связь репродуктивной системы с антиоксидантной системой (АОС) ......... 23 2. Материалы и методы исследования .................................................................... 25 2.1. Объекты исследования ...................................................................................... 25 2.2. Методы исследования ........................................................................................ 25 2.2.1. Метод моделирования .................................................................................... 25 2.2.2. Техника удаления половых органов самцов крыс ....................................... 26 2.2.3. Гистологические методы ................................................................................ 27 2.2.4. Метод статистической обработки данных.................................................... 29 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение ................................ 30 3.1. Результаты исследования морфологических особенностей семенников в норме и при воздействии низких температур ........................................................ 30 3.2. Результаты исследования морфологических особенностей семенников у крыс после восстановления ...................................................................................... 39 3.3. Результаты морфометрического анализа семенников крыс в норме и после эксперимента.............................................................................................................. 42 ВЫВОДЫ ................................................................................................................... 46 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ И ЛИТЕРАТУРЫ ................ 47 2

ВВЕДЕНИЕ Изучение нарушений структуры мужской репродуктивной системы и её функционирования является необходимым пунктом при решении демографических и медицинских проблем в стране. Значимость охраны репродуктивного здоровья базируется на равной роли мужчины и женщины в воспроизведении потомства, при этом на долю мужского фактора, по данным Всемирной организации здравоохранения, приходится 45–50% [36]. Важную роль составляет анализ состояния половых органов животных не только в норме, но и при патологическом и повреждающем действии различных факторов [30, 34, 41]: токсических веществ, лекарственных препаратов, ионизирующего облучения, вибрации, нездоровом образе жизни инфекций [22], и вызываемых ими воспалительных заболеваний, психологического стресса [31, 34]. Из данных литературы понятно, что основными результатами влияния всех этих факторов являются нарушения деятельности генеративной и инкреторной систем семенников, способных привести к мужскому бесплодию [30]. Особенность мужских репродуктивных органов заключается в большой чувствительности и малых возможностях к восстановлению повреждённых структур [36]. Обзор литературы показал, что кроме множества производственных и антропогенных факторов, токсические эффекты на семенники оказывают и факторы природного происхождения [22, 38, 42]. Наиболее важными из них являются холодные условия окружающей среды [27]. Следует отметить, что Россия входит в список стран, характеризующихся более низкими температурами воздуха, которые в некоторых районах достигают до -40оС. К тому же в настоящее время наблюдается тенденция к росту числа людей, работающих на Севере и Дальнем Востоке. Тем не менее, у нынешней молодёжи распространена так называемая мода легко одеваться в зимнее время года, что может привести к охлаждению всего организма, включая половые органы [33]. 3

К настоящему времени установлено, что возникающий во время приспособления к холоду адаптационный синдром вызывает не только патологическое изменение нормального строения ткани семенника, но и приводит к нарушению сперматогенеза в семенных канальцах [26, 31, 42]. Мужские гонады человека и животных, в общем, не служат прямой мишенью для влияния низких температур окружающей среды и поэтому, как показывают экспериментальные методы, отрицательные воздействия холода на семенники реализуются в большинстве случаев через систему гипоталамус-гипофизгонады, осуществляющую регуляторную функцию [6, 14, 52]. Исследования воздействия низких температур на семенники проводят на половозрелых крысах самцах линии Wistar. На сегодняшний день, несмотря на актуальность темы, в литературе существуют лишь несколько научных работ, посвящённых изучению влияния холода на особенности структуры мужской половой системы крыс, полученные данные которых мы могли бы интерпретировать для человека. В связи с вышеизложенным, целью работы стало исследование морфологических особенностей семенников крыс в норме и под влиянием низких температур. Для достижения цели нами были поставлены следующие задачи: 1. Описать морфологическую картину семенников крыс линии Wistar в норме и после воздействия низких температур. 2. Описать морфологическую картину семенников крыс спустя 56 дней после окончания эксперимента. 3. Провести морфометрическое исследование семенников крыс в норме, под воздействием низких температур и после восстановления. 4

1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика мужской репродуктивной системы Репродуктивная система мужчин – это система органов, играющая роль в размножении. Она представлена внешними и внутренними половыми органами (рис. 1.1). Внутренние половые органы включают: яички вместе с их придатками и оболочками, семявыносящие и семявыбрасывающие протоки, добавочные половые железы – семенные пузырьки, предстательную железу и бульбоуретральные железы. Внешние половые органы образованы половым членом и мошонкой [1]. Яички (семенники) – парные мужские железы, функцией которых является синтез мужских гормонов – андрогенов (эндокринная) и образование сперматозоидов (репродуктивная). Место расположения яичек – мошонка. Как правило, левый семенник находится чуть ниже правого. Снаружи яички окружены белочной оболочкой, образованной плотной соединительной тканью, и отделяются друг от друга перегородкой мошонки [1]. У яичника выделяют верхний и нижний концы, латеральную и медиальную поверхности и два края – передний и задний, рядом с которым граничит придаток семенника. Яичко подвешено с помощью семенного канатика, в состав которого, кроме семявыносящего протока, входят мышцы, кровеносные и лимфатические сосуды, нервы [25]. Развитие яичников в эмбриональный период происходит в брюшной полости, затем, в момент рождения, они опускаются в мошонку. Усиленное развитие семенников начинается только после полового созревания [24]. Семенной пузырёк – парный орган, который расположен над предстательной железой и продуцирует секрет, необходимый для повышения функциональной активности гамет. Его выводной проток сливается с семявыносящим и образует семявыбрасывающий проток, открывающийся в мочеиспускательный канал [25]. 5

Предстательная железа – непарный орган репродуктивной системы, включающий простатические железки и гладкомышечные волокна между ними. Расположена под мочевым пузырём и охватывает мочеиспускательный канал [24]. Железки служат для секреции особого секрета, необходимого для разжижения эякулята, а миоциты служат субстратом для образования сфинктера, предотвращающего смешивание мочи и спермы при эякуляции. Рис. 1.1 Мужская репродуктивная система: 1 – яички, 2 – придаток яичка, 3 – семявыносящий проток, 4 – семенные пузырьки, 5 – предстательная железа, 6 – бульбоуретральная железа, 7 – мужской половой член [25] Бульбоуретральная, или по-другому Куперова, железа – парный орган мужской репродуктивной системы, местом расположения которой является верхняя область корня полового члена. Своими выводными протоками они выделяют в просвет мочеиспускательного канала слизь, способную нейтрализовать раздражающее действие мочи [1]. С возрастом эта железа омертвляется. 6

1.2. Гистологическая структура семенников Самая наружная оболочка мужской гонады – это серозная оболочка (брюшина), под которой лежит белочная, образованная соединительной тканью [1]. Перегородки, отходящие от белочной оболочки, разделяют полость семенника и формируют около 250–300 долек. Дольки являются структурной единицей яичка (рис. 1.2). Рис. 1.2 Поперечный разрез семенника: 1 – белочная оболочка, 2 – сосудистая оболочка, 3 – извитые семенные канальцы, 4 – интерстиций яичка [1] Извитые канальцы в каждой дольке представлены в количестве 1–4, в дальнейшем выпрямляющиеся рядом с задним краем яичка, где белочная оболочка, утолщаясь, формирует средостение [6, 7]. Прямые канальцы являются продолжением извитых и сами впадают в сеть яичка, расположенную в средостении. Из сети яичка выходят выносящие канальцы, которые проходят через соединительнотканную оболочку и переходят в придаток семенника. Выносящие канальцы объединяются в проток придатка в его начальной части – головке [20]. Важной особенностью придатка является то, что он является местом как хранения, так и созревания сперматозоидов (рис. 1.3). 7

Пространство между извитыми семенными канальцами – интерстиций заполнено рыхлой соединительной тканью, содержит макрофаги, кровеносные, лимфатические капилляры и продуцирующие тестостерон клетки Лейдига, подругому интерстициальные эндокриноциты (рис. 1.4). Популяция этих клеток в органе различаются друг от друга функциональной активностью и положением. Активность клеток Лейдига находится под контролем лютеинизирующего гормона гипофиза [5, 35]. Иммунная система в межканальцевой ткани представлена лимфоцитами и макрофагами, удаляющими разрушенные клетки. Рис. 1.3 Строение семенника [4] Рис. 1.4 Интерстициальная ткань яичка: 1 – участок интерстиция, 2 – клетки Лейдига, 3 – кровеносный сосуд [7] Семенные канальцы в своём составе содержат сперматогенный эпителий, клетки которого находятся на разных стадиях развития, и поддерживающие 8

клетки Сертоли [4, 11, 50]. Сперматогонии лежат на базальной мембране, куда прилегают также миофибробласты (рис. 1.5). Благодаря сокращающейся способности миоидного слоя семенная жидкость движется в семенных канальцах. Поддерживающие сустентоциты основанием прилегают к базальной мембране и своей поверхностью обращены в просвет канальца (рис. 1.6). Эти клетки имеют большие размеры и соединяются между собой, образуя плотные связи. Таким образом, клетки Сертоли формируют гематотестикулярный барьер, через который происходит получение более глубоко лежащими сперматогониями питательных веществ из тканевой жидкости [31, 37]. Также он ограничивает прохождение половых клеток в кровь. Рис. 1.5 Клетки, прилегающие к базальной мембране семенных канальцев [6] Ещё одной важной функцией сустентоцитов является синтез жидкости, которая находится вокруг семенных канальцев, тем самым создавая необходимую среду для сперматозоидов. К свойствам клеток Сертоли относится и продуцирование андроген-связывающего белка, несущего тестостерон, уничтожение подвергшихся к апоптозу клеток сперматогенного эпителия [5, 6]. 9

Сперматогенные клетки простираются от базальной мембраны до просвета канальца через клетки Сертоли в ходе их созревания. Так в самом наружном слое находятся сперматогонии, а во внутреннем слое, ближе к просвету – сперматоциты, сперматиды и сперматозоиды [23, 50]. Отличительная черта сперматогоний – это их способность к митотическим делениям, благодаря которой возможно восстановление нарушенного сперматогенеза. Различают тёмные и светлые сперматогонии типа А, сперматогонии типа В [31]. Тёмные относятся к стволовым клеткам, не всегда делящимся и расположенным рядом с базальной мембраной. Светлые появляются путём деления тёмных клеток и через четыре митотические деления превращаются в сперматогонии типа В, вступающих в сперматогенез [47]. Рис. 1.6 Клетка Сертоли: 1 – ядро, 2 – цитоплазматические отростки, 3 – бухтообразные углубления, 4 – межклеточные контакты [11] Эпидидимис – придаток яичка, представленный выносящими канальцами, каждый из которых составляет дольку придатка [20]. Далее эти выносящие канальцы объединяются в один проток придатка. Неровный контур просвета отличает выносящие канальцы от общего протока. Это достигается наличием только высоких реснитчатых или только низких кубических клеток [7, 11]. В протоке эпидидимиса эти клетки располагаются поочерёдно. В эпителии 10

канальцев можно различать также соединительнотканные клетки и миоциты (рис. 1.7). Рис. 1.7 Выносящие канальцы придатка яичка: 1 – реснитчатые клетки, 2 – кубические клетки, 3 – гладкие миоциты, 4 – соединительнотканные клетки [11] 1.3. Сперматогенез и морфология сперматозоидов Сперматогенез – развитие мужских половых клеток в извитых канальцах семенников, начинающийся после достижения репродуктивного возраста [16]. Оптимальной температурой, необходимой для созревания сперматозоидов, является 2-3оС ниже температуры всего тела. Процесс сперматогенеза у человека длится примерно 75 дней. В стимуляции сперматогенеза принимает участие гипоталамо- гипофизарно-гонадная система [55]. Клетки Лейдига под воздействием лютеинизирующего гормона секретируют тестостерон, а он, в свою очередь, проникая в семенные канальцы, объединяется с андроген-связывающим белком, продуцируемым клетками Сертоли [45]. Такой комплекс активизирует репродуктивную функцию семенников. Сперматогенез включает следующие этапы: 1) сперматогонии делятся митотически, 2) деления сперматоцитов путём мейоза, 3) морфологическое формирование сперматид, 4) созревание сперматозоидов [47, 49]. В момент, когда сперматогонии делятся митотически, деление их цитоплазм происходит не до конца, и в результате они начинают контактировать между собой цитоплазматическими мостиками. В результате дальнейших делений образуется клональный синцитий [16]. 11

Часть сперматогоний сохраняют способность самовоспроизводения, а другая часть подвергается последовательным митотическим делениям, в результате чего формируются разные типы сперматогониевых клеток [62]. Из сперматогии А1 формируется сперматогонии А2, которые делясь дают начало сперматогониям А3, а из А3 митотическим делением получаются сперматогонии А4. Далее из А4 образуются промежуточные сперматогонии. Конечным элементом делений служит сперматогоний типа В, движущийся к просвету канальца для дальнейшего развития (рис. 1.8). После сперматогоний (дальнейших делений клеток типа В) в цикле делений занимают место сперматоциты I порядка, вступающие в мейоз [31, 62]. В первую очередь, для них характерно удвоение хромосом, а затем первое деление мейоза. В результате у одного сперматоцита I порядка образуется два сперматоцита II порядка (рис. 1.9). После второго деления мейоза они превращаются в четыре сперматиды. Тогда как сперматогонии обладают диплоидным набором хромосом, у сперматид он гаплоидный [16]. Рис. 1.8 Схема сперматогенеза [11] Образовавшиеся сперматиды претерпевают изменения в строении [60]. Для этого им нужны новые белки, питательные вещества, которыми их обеспечивают клетки Сертоли через их межклеточные контакты. Завершением процесса спермиогенеза является выход освободившихся от связи с сустентоцитами клеток в просвет семенных канальцев [23, 47]. При этом округлая форма сперматогенных 12 клеток теряется, пропадают

цитоплазматические мостики. Следовательно, образуются сперматозоиды (рис. 1.10). Находившиеся в извитых семенных канальцах сперматозоиды получают способность осуществлять движения и оплодотворять в результате смешивания с секретом половых желёз [47]. Рис. 1.9 Клеточные стадии образования сперматозоидов [16] Рис. 1.10 Созревание сперматид [16] Сперматозоиды – мужские гаметы, содержащие гаплоидный набор хромосом и играющие важную роль в оплодотворении ооцита. У него различают головку, шейку и хвост. В головке сосредоточены ядро и акросома, расположенную в передней части. Акросома построена небольшой частью 13

аппарата Гольджи и содержит такие ферменты, как трипсин и гиалуронидаза, способные растворить оболочку яйцеклетки [11]. Шейка сперматозоидов состоит из двух центриолей. От нижней до хвоста продвигается центральная нить, окружённая девятью парами микротрубочек. Благодаря такому оснащению мужская половая клетка способна к подвижности. 1.4. Основные гормоны семенников и механизм их действия Мужскими половыми гормонами являются стероидные гормоны, отвечающие за нормальное протекание процесса сперматогенеза. В семенниках вырабатываются андрогены, эстрогены и гормоны роста [3]. 1. Андрогены Мужскими половыми гормонами являются стероидные гормоны, отвечающие за созревание сперматозоидов, развитие вторичных мужских половых признаков и мужской психики [48]. Андрогены синтезируются у мужчин в яичках клетками Лейдига из холестерина липопротеидов [53]. Их выработка характеризуется цикличностью – утром вырабатывается больше, чем вечером. Также в образовании андрогенов принимает участие кора надпочечников. В семенниках продуцируются гормоны тестостерон, андростерон, андростендион, дегидроэпиандростерон и 11β-гидроксиандростендион. Все андрогены, кроме тестостерона, обладают низкой активностью, хотя и могут превращаться в тестостерон. Основные гормональные функции выполняет метаболит тестостерона дигидротестостерон, полученной при помощи фермента под названием 5αредуктазы [48]. В крови они сосредоточены в свободном виде или соединены с белками. Местом разрушения служит печень, далее они выводятся из организма мочой и желчью. Андрогены способны вызвать такие структурные изменения в организме, как рост костей, увеличение массы гладких мышц, нормализация показателей 14

гемоглобина в крови. Они участвуют в процессах белкового обмена, дифференцировки центральной нервной системы. Также они играют роль в функционировании как мужских, так и женских половых органов. Своё воздействие андрогены оказывают и на переднюю долю гипофиза, где подавляют синтез гонадотропных гормонов – фолликулостимулирующего гормона и лютропина [51]. 2. Эстрогены Наряду с мужскими половыми гормонами в семенниках вырабатываются и женские. К ним относятся эстрадиол, эстриол и эстрон [53]. У мужчин они секретируются клетками Сертоли. Известно также то, что эстрогены могут образоваться и путём ароматизации андростендиона в эстрон и тестостерона в эстрадиол в жировых клетках. Уровень эстрогенов в мужском организме может определять степень ожирения человека, влияет на развитие предстательной железы. Эстрадиол является главным фактором, обеспечивающим регуляцию метаболизма костной ткани у мужчин [32]. Увеличение концентрации эстрадиола внутри мужской гонады способно снижать секрецию лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов, а это в свою очередь подавляет продуцирующую способность клеток Лейдига, снижая концентрацию тестостерона в крови [32, 35]. 3. Гестагены Прогестерон называют самым известным из гормонов этого типа. У мужчин он вырабатывается семенной жидкостью яичек и корой надпочечников. Хотя его и считают гормоном беременности, в мужском организме он также играет весьма значительную роль. Так, из прогестерона формируется тестостерон, кортизол. Он регулирует функционирование головного мозга [3]. Причиной разрастания тканей простаты является частое превращение тестостерона в дигидротестостерон. Значимость прогестерона в этом случае заключается в том, что он ограничивает образование метаболитов. Нормальное 15

содержание уровня прогестерона снижает риск образования большой концентрации эстрогенов в организме мужчин. Прогестерон влияет на обмен веществ и белков, предупреждая многие заболевания [3]. 4. Гормоны роста – это гормоны, связывающиеся с рецепторами на мембране клеток и способствующие их дифференцировку. К ним относятся, прежде всего, активин и ингибин, вырабатывающиеся в яичках и в гипофизе. Активин – пептидный фолликулостимулирующего гормон, гормона (ФСГ) активирующий и процесс синтез созревания сперматозоидов. Вырабатывается клетками Лейдига [57]. Ингибин – пептидный гормон, в выработке которого участвуют клетки Сертоли у мужчин [51]. В отличие от активина, повышенная концентрация ингибина тормозит образование ФСГ в гипофизе. Как показывает анализ литературы, более интенсивно секретируется ингибин В [3]. Действие гормонов осуществляется гипоталамо-гипофизарной системой (рис. 1.11). В гипофизе различают переднюю (аденогипофиз) и заднюю долю (нейрогипофиз). Как мы уже знаем, в аденогипофизе происходит образование фолликулостимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов. ФСГ обеспечивает активацию сперматогенеза в семенниках, ЛГ инициирует развитие интерстициальных эндокриноцитов и синтез тестостерона [11, 51, 57]. Рис. 1.11 Регуляторные взаимоотношения в системе «гипоталамус – гипофиз - семенники» [5] 16

Гипоталамус – это участок промежуточного мозга со скоплениями клеток, получивших название ядра гипоталамуса. В образующих эти ядра нейронах происходит преобразование нервных импульсов в нейрогормоны, участвующие в регуляции синтеза гормонов гипофизом. Другими словами, в гипоталамусе происходит связывание эндокринного и нервного механизмов регуляции с образованием нейроэндокринной системы [46, 65]. В передней области гипоталамуса сосредоточены крупные нейроны супраоптического и паравентрикулярного ядер, вырабатывающих такие гормоны, как вазопрессин и окситоцин [25]. Взаимосвязь между гипоталамусом и нейрогипофизом осуществляется посредством ножки, т. е. аксоны этих нейронов подходят к сосудам нейрогипофиза и формируют в них синапсы. Через такие синапсы гормоны выделяются в кровь. Аденогипофиз с гипоталамусом связаны через воротную систему гуморальным путём [64]. Регуляция эндокринной функции аденогипофиза возникает при помощи мелких нейронов ядер, расположенных в средней области гипоталамуса. Они продуцируют освобождающие, или рилизинг-гормоны (либерины), и тормозящие (статины) [29]. К гонадолиберинам относятся люлиберин и фоллиберин. Синапсы этих ядер через воротную гипофизарную артерию передают в аденогипофиз эти сигналы, а аденогипофиз, в свою очередь осуществляет освобождение ФСГ и ЛГ гонадотропными клетками [57, 65]. Центр секреции гонадотропин-рилизинг-гормона у мужчин функционирует постоянно, тогда как у женщин он работает эпизодически [9]. Существует и принцип обратной связи: если концентрация половых гормонов выше, то подавляется продукция гонадотропных гормонов, а если содержание стероидных гормонов снижается – усиливается секреция ФСГ и ЛГ [51, 55]. 17

1.5. Особенности функционирования семенников в норме и при разных патологиях Как было указано выше, семенники реализуют две главные функции: генеративную, основанную на осуществлении сперматогенеза, и эндокринную, то есть продукцию половых гормонов [24]. В момент рождения в мужском организме в семенниках семенные канальцы лишены просвета, что ограничивает начало созревания сперматозоидов [7, 20]. Становление репродуктивной активности начинается в пубертатном периоде, в то время, когда кора надпочечников начинает более интенсивно продуцировать андрогены – мужские половые гормоны. Благодаря возросшей концентрации андрогенов увеличиваются размеры и количество клеток Лейдига интерстициальной ткани, а это, в свою очередь, приводит к повышению содержания тестостерона в яичках [23, 35, 40]. Функционирование мужской репродуктивной системы не подвергается цикличности, как в женском организме. Для нормального протекания созревания сперматозоидов в мошонке требуется поддержание определённой температуры – чуть ниже температуры тела [23, 24]. Соответствующая температура регулируется температурным обменом между притекающей (артериальной) и оттекающей (венозной) кровью, а также подниманием и опусканием гонады с помощью мышцы [7]. Созревание сперматозоидов в семенных канальцах, протягивающийся от сперматогенного эпителия к просвету канальца, поддерживается клетками Сертоли, расположенными между ними [16, 42]. Благодаря им существует так называемый гематотестикулярный барьер, защищающий организм от аутоиммунных реакций, то есть от поступления половых клеток, содержащих антигены, в кровь. Начинающийся в половозрелом возрасте сперматогенез у мужчин длится всю жизнь При [23]. этом количество образуемых сперматозоидов в 1 мл спермы огромно – до 100 млн, а в одном семяизвержении доходит до 300–400 млн [20]. Сформированный сперматозоид 18

приобретает свойство оплодотворять при смешении его с семенной жидкостью, выделяемой другими железами репродуктивной системы. Процесс развития сперматозоидов происходит под влиянием определённых гормонов [3, 42]. Регуляция половых функций осуществляется гипоталамусом. Гипоталамус, прежде всего, оказывает влияние на секретирующую способность гипофиза, гормоны которого настраивают работу половых желёз [3, 24]. Нейроны ядер, расположенных в гипоталамусе, вырабатывают нейросекреты, которые далее по аксонам достигают передней доли гипофиза [1]. В аденогипофизе связываясь со специализированными рецепторами, способствуют высвобождению гонадотропных гормонов. К таким гормонам гипофиза, которые служат факторами воздействия на половые железы, относятся фолликулостимулирующий и лютеинизирующий гормоны [11]. ЛГ активирует увеличение количества клеток Лейдига и продукцию тестостерона, ФСГ инициирует созревание сперматозоидов, развитие извитых семенных канальцев и выработку белков, участвующих в связывании андрогенов. Развитие вторичных признаков и становление мужских половых рефлексов также находятся под воздействием гормонов [24, 48]. Действие лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов, эстрагена, прогестерона направлено и на процесс эякуляции, на образование семенной жидкости [32]. В контроле работы репродуктивной системы играют роль надпочечники и щитовидная железа [20]. Выделяемая щитовидной железой гормон тироксин способствует секреции глобулина печенью, который является связывающим компонентом для стероидов. А это отражается на содержании свободных половых стероидных гормонов. Параллельно с действием на периферические эндокринные органы, щитовидная железа и надпочечники влияют и на гипоталамо-гипофизарную систему, тем самым вмешиваясь в их взаимосвязь с гонадами [55]. Болезнями, возникшими в результате изменений в работе надпочечников и щитовидной железы, и в ходе которых нарушается нормальный процесс эякуляции, сперматогенез и развитие половых признаков, 19

являются гипотиреоз и гипертиреоз (недостаток и повышенное содержание гормонов щитовидной железы), болезнь Аддисона и синдром Кушинга (гипофункция и гиперфункция коры надпочечников) [23, 64]. 1.6. Исследование влияния низких температур окружающей среды на организм животных Известно, что низкие сезонные температуры являются одними из природных факторов окружающей среды, способных негативно воздействовать на весь организм животных, в том числе и крыс [13, 34, 41]. Из результатов исследований учёных понятно, что в результате адаптации организма к холоду, в нём развивается холодовой стресс [2]. Он вызывает такие защитные реакции организма, как изменения биохимических и физиологических характеристик, способных поддерживать гомеостаз. Репродуктивные органы вследствие адаптации к стрессу имеют изменения в морфологических, секреторных и эндокринных показателях [26, 27, 39]. При исследовании адаптационных способностей наибольшую роль играет изучение систем организма, которые могут реализовать возникновение холодового стресса при низких температурах [2, 31]. К таким системам относятся гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая и симпатоадреналовая системы [14, 55]. Также, наряду со стресс-реализующими, присутствуют и лимитирующие системы, повышающие адаптационные возможности организма [15, 61]. Как отмечается многими авторами, возникновение холодового стресса в организме сопровождается метаболическим распадом липидов и активизацией окислительно-восстановительных процессов [12, 36, 38]. Это, в дальнейшем, сводится к возрастанию в тканях реакций перекисного окисления липидов. К тому же, во многих исследованиях показано, что у самцов крыс в репродуктивных органах продукты перекисного окисления содержались в зимнее время года в наибольшей степени [26, 33]. 20

Как выше было сказано, при стрессовом состоянии, в независимости от причины возникновения, нарушению подвергается именно гипоталамогипофизарно-гонадная система [12, 14, 15]. И, поэтому, прямому воздействию экстремальных факторов среды подвергается не только мужская половая система, но и составные части регулирующей системы [40]. Ряд авторов полагают, что низкая, как и повышенная, температура является одной из причин, изменяющих морфологию, количество сперматозоидов и их способность передвигаться по семявыносящим протокам [13, 22, 26]. Хорошо известно, что качественные показатели спермы определяются присутствием генеративных клеток. Также многими учёными неоднократно была отмечена зависимость между мужскими половыми клетками и содержанием тестостерона, что, безусловно, отражает важную роль регуляторной гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы [14, 15]. Таким образом, нарушение морфологической организации мужских гонад реализуется через определяется через центральные органы регуляции [27, 42]. Токсический эффект низких температур окислительный стресс (ОС), который в настоящее время считается механизмом возникновения множества заболеваний и апоптоза [2, 45, 56]. Понятие окислительного стресса объясняется тем, что активные формы кислорода (АФК) превышают физиологические нормы и тем самым, оказывают токсическое действие на клетки, или нарушением функционирования антиоксидантной системы тканей организма [21, 40]. К АФК относятся, в основном, перекись водорода (Н2О2), гидроксильный радикал (HO•), окись азота (NO) [12, 21, 38]. В семенниках влияние окислительного стресса направлено на разрушение герминативных клеток и интерстициальных эндокриноцитов (клеток Лейдига) и на снижение концентрации тестостерона [43, 44, 60]. Нужно отметить, что половые клетки более чувствительны к действию свободных радикалов [31, 56]. Именно поэтому, актуальным является исследование сперматогенного компонента, чем инкреторной активности. 21

Процессы свободнорадикального окисления в организме могут играть как положительную, так и отрицательную роль [12, 39, 41]. Активные метаболиты кислорода, являющиеся свободными радикалами, в физиологических количествах в эякуляте нужны для образования и созревания сперматозоидов [21, 34, 41]. Избыточное формирование активных форм кислорода, которое возникает при ослабленном функционировании ферментов антиокислительной системы, вызывает процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), белков на мембране клеток, содержащихся в тканях половой системы [9, 21, 29]. Перекисным окислением липидов является процесс, при котором происходят химические реакции превращения липидов под действием свободных радикалов [29, 34, 45]. Их превращения в клетках обычно осуществляется постоянно, но, как правило, в нормальных количествах. Они нужны для поддержания процессов естественного апоптоза клеток [40]. Также их необходимость объясняется тем, чтобы поддерживать функциональную активность клеточных мембран: передачу сигналов, работу ионных каналов. Однако, если происходит возникает чрезмерное стимуляция процессов свободнорадикальное разрушения клеточной окисление, мембраны, содержимого ядра и в итоге самой клетки [31, 59]. Содержащийся докозогексаеновая в мембране кислота является сперматозоидов полиненасыщенная чувствительным компонентом для перекисного окисления [29, 38, 39]. Следующими элементами восприимчивости мужских половых клеток к ПОЛ являются малое количество цитоплазмы, содержание в мембране белков-рецепторов и активное участие в трансмембранном транспорте [9, 12]. Обзор литературы показал, что существует три механизма возникновения инфертильности у мужчин при наступлении окислительного стресса [9, 32, 34]. К ним относятся: 1) снижение подвижности сперматозоидов; 2) ослабление способности проникать в яйцеклетку; 3) повреждение ДНК мужских половых клеток. В первом случае, активные формы кислорода разрушают структуру митохондрий, что приводит к снижению выработки энергии и ограничению 22

передвижения сперматозоидов. Второй механизм характеризуется перекисным окислением акросомальной зоны сперматозоидной мембраны [58, 59, 61]. А в третьем случае наблюдается патологическое изменение молекулы ДНК. 1.7. Связь репродуктивной системы с антиоксидантной системой (АОС) Защитой организма от усиленного свободнорадикального окисления является антиоксидантная система. Она сдерживает образование активных форм кислорода и поддерживает их нормальную концентрацию [2, 56]. Содержит как ферментативные, так и неферментативные компоненты. К ферментативным относят: 1) супероксиддисмутаза; 2) каталаза; 3) глутатионпероксидаза; 4) глутатион-трансфераза. Они разлагаютгидропероксиды и ускоряют обладающих меняющейся валентностью металлов. Неферментативные элементы АОС представлены низкомолекулярными и высокомолекулярными соединениями. Низкомолекулярные соединения – мочевая кислота, витамины Е, А, С, К и Д [14, 29]. Их главной функцией является нейтрализация радикалов, супероксида. Витамин С участвует в восстановлении окисленного витамина Е. Церулоплазмин, трансферрин и ферритин составляют высокомолекулярные соединения [9, 38]. По другой классификации антиоксидантную систему составляют ферментами-перехватчиками и липофильными перехватчиками. К первой группе относятся супероксиддисмутаза, превращающий супероксид анионрадикал O2·-в перекись водорода, глутатион-пероксидаза, способствующей обращению Н2О2 до воды, и каталаза. Гидрофильные защитники от радикалов – это тиолы, аскорбат [34, 58]. Ко второй группе входят каротиноиды, билирубин, токоферол, убихиноны и флавоноиды. Таким образом, при изучении влияния природных токсикантов, важное значение имеет анализ состояния антиоксидантов [15, 44]. Из научных исследований известно, что высокой концентрацией в семенниках обладают 23

аскорбат, тиолы. Также большую роль в системе АОС семенников играют токоферол, глутатион, ферменты-перехватчики [29, 34]. Основным составляющим элементом антиоксидантной системы является витамин Е, при снижении концентрации которого в семенниках происходит ослабление сперматогенеза и увеличение содержания в его ткани свободных радикалов [29, 34]. Резкое же увеличение его количества ведёт к разрушению нормальной структуры органа. Низкое содержание витамина С не ведёт к усилению свободнорадикальных процессов, так как при присутствии токоферола он заменяется им [39]. При окислительном стрессе, как известно, происходит снижение концентрации тестостерона вследствие нарушения связи половой системы с гипофизом [31, 60]. При этом в гипоталамусе не происходит секреция рилизинг-факторов, а это ведёт к ослаблению выработки гонадотропных гормонов в гипофизе. А витамин Е (α-токоферол) в большом количестве содержится не только в семенниках, но и в гипофизе [14]. При увеличении количества витамина Е как в гипофизе, так и в гонадах, происходит усиление секреции тестостерона из-за увеличения содержания лютеинизирующего гормона (ЛГ) в гипофизе [29]. Поэтому, можно сделать вывод о значительной роли α-токоферола в синтезе половых гормонов и взаимосвязи центральной гипоталамо-гипофизарной системы с половой [34, 65]. 24

2. Материалы и методы исследования 2.1. Объекты исследования Исследование проводилось на самцах крыс линии Wistar в возрасте 9 месяцев, массой тела 200–250 г. Количество крыс в контрольной группе составляло 6 животных, в экспериментальной – 12 (6 из которых подвергались процессу восстановления). Используемые в опыте самцы находились в виварии кафедры физиологии и общей биологии БашГУ. В виварии соблюдались стандартные условия, которые характеризуются постоянной комнатной температурой, равной 21-22оС. Работа проводилась с соблюдением международных принципов Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным (2000 г.). 2.2. Методы исследования 2.2.1. Метод моделирования Моделированием называют метод, основной идеей которой является замена исследуемого объекта его моделью. Моделирование адаптации к низким температурам окружающей среды осуществлялось по схеме опыта, сделанного Саяпиной И.Ю. в 2011 году [26]. Эксперимент проводился следующим образом: крысы I и II экспериментальных групп подвергались охлаждению в течение 28 дней при температуре -15оС по 3 часа каждый день. После проведения серий охлаждения крысы I опытной группы выводились из эксперимента, а крысы II группы – только через 56 дней от его окончания. В результате мы получили крыс с моделью адаптационного синдрома, индуцированного холодными условиями. Благодаря этой модели мы смогли сравнивать морфологическое строение семенников у интактных крыс и крыс с изменениями в структуре полового органа вследствие влияния на них холода. 25

2.2.2. Техника удаления половых органов самцов крыс Удаление семенников крыс (кастрация) осуществляется путём наркотизации хлоралгидратом в расчёте m (крысы)х400/1000 в брюшную полость. Хлоралгидрат – прозрачный порошок, легкорастворимый в воде и способный в больших дозах тормозить процесс возбуждения и ускорять наступление сна [64]. Перед проведением операции инструменты тщательно стерилизовали для предупреждения попадания микробов в рану. После погружения в сон крысу фиксировали на предметном столике в спинном положении и перевязали за лапки при помощи марлевой нитки. Далее сбрили шерсть на мошонке, где находятся семенники. Делая небольшой надрез, скальпелем рассекали все слои мошонки, включая общую влагалищную оболочку семенника. После того, как семенник извлекается наружу, мы обвязали специальные рассасывающиеся нитки – кетгут вокруг семенного канатика и семяпровода чтобы передавить кровеносные сосуды. Далее удаляли оба семенника. Шов накладывали тем же кетгутом, а мошоночный надрез обрабатывали БФ-клеем и бриллиантовым зелёным. Удалённые семенники после взвешивания и маркировки помещали в 10% раствор формалина. После операции крысу следует положить в отдельную, постеленную чистой фильтровальной бумагой клетку. Обязательным также является постоянное наблюдение за швом и его обработка хлоргексидином [19]. Рис. 2.1. Мочеполовая система самцов крыс: 1 – почка, 2 – мочеточник, 3 – мочевой пузырь, 6 – семенник с придатком, 7 – половой член [8] 26

2.2.3. Гистологические методы Техника фиксации материала для гистологических исследований Фиксация – самый первый этап среди гистологических методов, целью которого служит остановка жизненных процессов и обеспечение стабильности живых структур. Фиксированные ткани получают либо глубоким замораживанием, либо под воздействием особых растворов [19]. Чаще всего в практике используют простой фиксатор – 10% раствор формалина. Под действием фиксирующих растворов происходят такие изменения, как уменьшение объёма ткани, её уплотнение. Время фиксации материала наблюдается в течение 24–48 часов. Техника обезвоживания образцов ткани Обезвоживание образцов ткани является важным этапом в приготовлении гистологического препарата до его заливки в уплотняющую среду – в парафин. Это объясняется тем, что вода, содержащаяся в фиксаторах, не смешивается с уплотняющими веществами. Дегидратацию (обезвоживание) осуществляли обработкой фиксированного материала спиртами восходящей концентрации: 70о, 80о, 96о, 100о. Перед проводкой в спиртах следует промывать образцы в проточной воде 24 часа. Техника заливки обезвоженного материала в парафин После обезвоживания образца его переносили в смесь равных частей абсолютного спирта (100о) и хлороформа. Хлороформ, в отличие от парафина, смешивается со спиртами и способно растворять сам парафин [19]. Далее материал погружали в чистый хлороформ и смесь хлороформа с расплавленным парафином и при 37о оставляли в термостате. При комнатной температуре парафин находится в твёрдом состоянии и его необходимо заранее растопить, подогревая в термостате при 54-55о. Из смеси парафина с хлороформом образцы перекладывали последовательно в две порции чистого растопленного парафина. Время пребывания объектов в парафине определяется толщиной кусочков и особенностью ткани. 27

В заранее приготовленные самодельные бумажные коробочки, дно которых смазывают глицерином, пинцетом перемещали органы из второй порции парафина и осторожно сверху заливали парафином с добавлением воска. Для того, чтобы формочки с материалом быстрее охлаждались, мы погружали их в чашку с холодной водой. При помощи скальпеля затвердевший парафин вырезали в виде блоков и закрепляли их на деревянных формочках. Техника приготовления и окрашивания парафиновых срезов Для приготовления парафиновых срезов нами был использован микротом. Парафиновый блок фиксировали в объектодержателе микротома и далее осуществляли последовательно удаление чистого парафина и среза с тканью. Полученные срезы кисточкой мы перемещали в чашку с кипячёной водой. Расправленные в воде срезы закрепляли в заранее приготовленных предметных стёклах. Далее предметные стёкла со срезами держали в термостате 2 часа. Окрашивание является необходимым звеном, обеспечивающим возможность различать отдельные структуры ткани и клеток при изучении их под микроскопом [18]. Различают по химическим свойствам основные (к таким относятся гематоксилин), которые окрашивают ядра клеток; кислые (эозин), объектами окрашивания которых являются цитоплазма с неклеточными структурами и нейтральные красители. Перед окраской мы удаляли парафин при помощи растворителя ксилола. Остатки ксилола следует смывать, проводя их через нисходящие концентрации спиртов (1000, 960, 700) и далее промыть срезы водой, для удаления спирта. После воды гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Общая схема окрашивания и заключения препаратов выглядит следующим образом: ксилол-1 (1-2 мин), ксилол-2 (1-2 мин), ксилол-3 (1-2 мин), спирт 100о (2 мин), спирт 96о-1 (1-2 мин), спирт 96о-2 (2 мин), спирт 70о (2 мин), вода (2 мин), гематоксилин (3-5 мин), вода-1 (полоскание), вода-2 28

(полоскание), вода-3 (40 мин), эозин (3-5 мин), спирт 96о (1-2 мин), спирт 96о (1-2 мин), спирт 96о (1-2 мин), карбол-ксилол (1-2 мин), ксилол (1-2 мин). В заключении препаратов применяется бальзам, приготавливаемый из смолы хвойных деревьев [18]. После окрашивания в предметные стёкла со срезами мы капали 1–2 капли бальзама и покрывали заранее стерилизованным покровным стеклом. Полученные препараты были изучены под микроскопом. 2.2.4. Метод статистической обработки данных Статистическая обработка полученных результатов стала завершающим этапом в выполнении нашей работы. Она позволяет выявить закономерности, сравнивать экспериментальные данные с контрольными и делать обоснованные выводы. Статистическая обработка полученной информации проводилась с использованием прикладных программ Statistica v.10.0 (Stat Soft, США). Использованный нами в статистическом методе U-критерий МаннаУитни применяется при сравнении выраженностей показателей в двух несвязных выборках и не требующий наличия нормального распределения сравниваемых совокупностей. Ещё одним преимуществом метода является то, что он подходит для сравнения выборок с малым количеством объектов. Критической вероятностью ошибки при отклонении нулевой гипотезы, когда она достоверна, в статистике служит p(уровень значимости) [10]. Если уровень значимости равен или меньше 0,05, допускается 5%-я вероятность ошибки, если же вероятность ошибки больше 5%, то нельзя отклонить нулевую гипотезу. При p≤0,01 считается, что различия достоверны на 1%-ом уровне значимости, а при уровне значимости ≤0,001 говорят о возможности 0,1% ошибочного прогноза. Различия считали статистически значимыми при p≤0,05. 29

3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 3.1. Результаты исследования морфологических особенностей семенников в норме и при воздействии низких температур При сравнении особенностей морфологии семенников в норме и при воздействии холода были исследованы такие признаки, как форма и диаметр семенных канальцев, толщина сперматогенного эпителия, наличие разных генеративных клеток в канальце, включая наличие в его базальной мембране клеток Сертоли, характер распределения интерстициальной ткани между канальцами, количество и размеры клеток Лейдига. В ходе сравнительного анализа нами было обнаружено, что на гистологических срезах семенные канальцы семенников интактных крыс имели округлую или эллипсоидную форму и занимали большую часть объёма ткани полового органа (рис. 3.1). 2 2 1 Рис. 3.1 Поверхность семенника крыс линии Wistar (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10, ок. 10. Обозначения: 1 – просвет семенного канальца, 2 – семенной каналец Извитые семенные канальцы опытных крыс отличались от контрольных структурной организацией: большая часть среди них имели форму прямых 30

ходов (рис. 3.2). В таких семенных канальцах диаметр сужается вследствие уменьшения состава эпителиосперматогенного слоя. Кроме того, необходимо отметить, что из-за уменьшения диаметра увеличивается количество извитых семенных канальцев в поле зрения. 1 2 3 Рис. 3.2 Общий вид семенных канальцев (Wistar) (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 4, ок. 10. Обозначения: 1 – семенной каналец, 2 – интерстициальная ткань, 3 – кровеносный сосуд Сравнительный соединительная ткань анализ также семенников показал, контрольной что межканальцевая группы распределена равномерно, что не характерно для интерстициальной ткани семенников крыс опытной группы (рис. 3.3). В интерстиции яичка в норме присутствовали артериолы, соединительнотканные клетки, интерстициальные эндокриноциты (рис. 3.4) [7]. В семенниках опытных крыс отмечалась отёчность межканальцевой стромы (рис. 3.5). Такая отёчность характеризуется тем, что извитые семенные канальцы в этом состоянии находятся в отдалённом друг от друга расстоянии и разрушением нормальной структуры клеток соединительной ткани и сосудов кровеносного русла. Отёчное изменение структуры интерстициальной ткани также было обнаружено под воздействием других факторов [17]. 31

Как выше было сказано, межканальцевую строму составляют интерстициальные эндокриноциты (клетки Лейдига). В норме большинству из них была свойственна полигональная форма с оксифильной цитоплазмой [35]. Кроме того, нами были обнаружены и клетки Лейдига с округлой или овальной структурой. Но их количество было значительно реже. Наблюдалось их разнообразное расположение друг относительно друга: поодиночке или группами. В основном, они находились вокруг кровеносных сосудов, что менее часто наблюдается, чем у опытных крыс. 1 2 3 Рис. 3.3 Интерстициальная ткань семенника крыс линии Wistar (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – клетки Сертоли, 2 – клетки Лейдига, 3 – сперматогенный эпителий семенного канальца 1 2 3 Рис. 3.4 Интерстициальная ткань семенника (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – кровеносный сосуд, 2 – интерстиций с расположенными на нём клетками Лейдига, 3 – извитой семенной каналец 32

1 2 3 Рис. 3.5 Отёчная интерстициальная ткань крыс линии Wistar (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10, ок. 10. Обозначения: 1 – отёчный интерстиций, 2 – семенной каналец, 3 – клетки Лейдига, расположенные в виде конгломерата вблизи сосудов Анализ семенников крыс экспериментальной группы показал, что в них эндокриноциты интерстициальной межканальцевой ткани имели отростчатую форму и расположены, в основном, большими скоплениями около кровеносных сосудов (рис. 3.6). К тому же, нужно заметить, что их количество было меньше в межканальцевой строме семенников. Это может свидетельствовать о снижении концентрации тестостерона в крови животных (рис. 3.7) [28, 37]. 1 2 Рис. 3.6 Интерстиций семенника (Wistar) (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – кровеносный сосуд, 2 – клетки Лейдига отростчатой формы вокруг кровеносного сосуда 33

3 2 1 Рис. 3.7 Отёчная интерстициальная ткань крысы линии Wistar (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10, ок. 10. Обозначения: 1 – клетки Лейдига, расположенные в виде скопления вблизи сосудов, 2 – отёчный интерстиций, 3 – разрушение кровеносного сосуда под воздействием низких температур Результаты морфологического исследования межканальцевого интерстиция семенников интактных крыс демонстрируют присутствие всех морфофункциональных типов клеток Лейдига: малых, средних и больших (рис. 3.8; рис. 3.9). 1 2 3 Рис. 3.8 Морфофункциональные типы клеток Лейдига (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1- средние клетки, 2 – малые клетки, 3 – клетки Сертоли 34

Как показывает морфометрический анализ интерстициальных эндокриноцитов, соотношение их морфофункциональных типов изменяется. Если в контроле большую часть поверхности соединительнотканной стромы составляют средние и большие клетки, то уже в интерстициальной ткани семенников крыс опытной группы преобладают клетки Лейдига малого типа, которые характеризуются малой активностью (рис. 3.10). Это объясняет уменьшение секреторной активности в яичках [27, 65]. 1 2 Рис. 3.9 Морфофункциональные типы клеток Лейдига крыс линии Wistar (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – большой тип клеток Лейдига, 2 – семенной каналец 2 1 Рис. 3.10 Клетки Лейдига в интерстициальной ткани семенника (Wistar) (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – малый тип, 2 – отростчатые клетки Лейдига 35

Неспецифическим изменениям в структуре семенников крыс опытной группы подвергся и сперматогенный слой семенных канальцев. На гистологических препаратах мы видим то, что в сперматогенном эпителии контрольной группы присутствовали все генеративные клетки: от сперматогоний и сперматоцитов I, II порядков до сперматид и сперматозоидов (рис. 3.11). Также, для него была свойственна правильная упорядоченность расположения генеративных клеток в пространстве канальца. Сперматогонии имели эллипсоидную форму маленьких размеров. На гистологических срезах они располагались в базальной мембране и их цитоплазмы были окрашены в тёмный цвет. Сперматоциты I и II порядка следуют за сперматогониями в направлении к просвету и тоже обладали округлой формой, но для них было характерно больший размер клеток. Следующий слой клеток составляли сперматиды, которые находились в несколько рядов. Было видно, что они имели удлинённую структуру со светлым ядром. Их развивающиеся хвостики были направлены в просвет канальца (рис. 3.11). 1 6 2 3 4 5 Рис. 3.11 Сперматогенный эпителий семенного канальца крыс линии Wistar (контрольная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – базальная мембрана, 2 – сперматогонии, 3 – сперматоциты I порядка, 4 – сперматоциты II порядка, 5 – сперматиды, 6–просвет семенного канальца 36

После исследования сперматогенного слоя семенных канальцев экспериментальных животных понятно, что количество генераций половых клеток снижается: иногда присутствуют только сперматогонии и сперматоциты I порядка (рис. 3.12). Наличие сперматоцитов II порядка и сперматид в составе эпителиосперматогенного слоя наблюдалось редко. Это свидетельствует о том, что находящиеся в более поздней стадии развития генеративные клетки, а именно сперматоциты порядка II и сперматиды, являются более чувствительными к низким температурам окружающей среды [31, 35, 40]. 1 2 3 4 5 Рис. 3.12 Семенной каналец опытной крысы. Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – базальная мембрана, 2 – сперматоциты I порядка, 3 –клетки Сертоли, 4 – сперматогонии, 5 – отслоившийся слой сперматогенного эпителия Сокращение числа генераций половых клеток в извитых канальцах приводит к дальнейшем, уменьшению к генеративной нарушению процесса активности семенников сперматогенеза. В и, в результате морфологического анализа мы можем понять, что нарушение структуры клеток сперматогенного слоя является причиной уменьшения диаметра извитых семенных канальцев и изменения их округлой формы в сторону удлинения (рис. 3.13). 37

Изучение гистологических препаратов также показало, что в состав семенников опытных крыс входят такие извитые семенные канальцы, просвет которых заполнен отслоившимися от сперматогенного слоя генеративными клетками, находящимися на разных стадиях развития (рис. 3.14). Это может привести к нарушению развития половых клеток и называется эпителиосперматогенной пробкой [17]. 1 2 3 Рис. 3.13 Семенные канальцы с изменёнными формами крыс линии Wistar (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 4, ок. 10. Обозначения: 1 – многоугольной формы, 2 – каналец в форме прямолинейных ходов, 3 – округлые 1 2 4 3 Рис. 3.14 Клетки сперматогенного эпителия семенника (Wistar) (опытная группа). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10. Обозначения: 1 – сперматогонии, 2 – сперматоциты I порядка, 3 – просвет канальца с отслоившимися половыми клетками, 4 – клетки Лейдига 38

Клетки Сертоли, или сустентоциты, нами были обнаружены почти во всех базальных мембранах семенных канальцев интактных крыс (рис. 3.3; рис. 3.8). Однако в составе мембраны канальцев крыс опытной группы сустентоциты почти не выявлялись (рис. 3.10; рис. 3.12). Уменьшение диаметра семенных канальцев связано не только с сокращением числа генераций половых клеток, а также и с разрушением клеток Сертоли, которые играют роль в поддержании половых клеток [33, 52]. 3.2. Результаты исследования морфологических особенностей семенников у крыс после восстановления Морфологическая структура семенников в ходе обновления приобретает определённые признаки, характерные для восстановления. При этом семенные канальцы имели как округлую форму, так и форму прямолинейного хода (рис. 3.15). При изучении гистологических препаратов мы наблюдали уменьшение диаметра некоторых извитых канальцев. Как раньше было упомянуто, с уменьшением их диаметра обнаруживается увеличение их количества в наблюдаемом участке ткани, что и было нами выявлено и у крыс после периода восстановления. 2 1 Рис. 3.15 Форма семенных канальцев крыс линии Wistar (группа восстановления). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 4, ок. 10 Обозначения: 1 – извитой каналец округлой формы, 2 – каналец в виде прямолинейных ходов 39

Отёчность интерстициальной ткани яичка в большей степени сохранилась (рис. 3.16), тем не менее присутствовали области, где нарушение межканальцевой стромы не наблюдалось. Это может говорить о том, что в семеннике происходят восстановительные процессы [27]. 1 2 3 Рис. 3.16 Интерстициальная ткань семенника (группа восстановления). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10, ок. 10 Обозначения: 1 – Отёчный интерстиций, 2 – семенной каналец, 3 – межканальцевая строма не нарушена Вместе с тем, в интерстициальной строме семенников отмечалось присутствие клеток Лейдига, расположенных поодиночке или в виде скоплений около сосудов органа. Нужно подчеркнуть, что основной структурной организацией эндокриноцитов после восстановления является удлинённая форма, что было присуще и для клеток Лейдига опытных крыс (рис. 3.17). Кроме того, наличие больших, более активных популяций этих клеток в период обновления наблюдалось редко. Это свидетельствует о том, что функциональные возможности эндокринной составляющей семенников менее подвержены к восстановлению [54]. Изучение гистологических препаратов семенников крыс, подвергшихся восстановлению, показало, что во многих извитых канальцах отчётливо прослеживается присутствие всех генераций половых клеток. Также, наблюдается их упорядоченное расположение от мембраны канальца до его 40

просвета (рис. 3.18). Повышение числа сперматоцитов II порядка и сперматид после восстановления, при сравнении с опытной группой, привело к увеличению диаметра семенных канальцев и активации генеративной активности семенников. 1 3 2 Рис. 3.17 Клетки Лейдига в интерстициальной ткани крысы линии Wistar (группа восстановления). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10 Обозначения: 1 – эндокриноциты удлинённой формы, 2 – кровеносный сосуд, 3 – семенной каналец 4 1 2 3 5 Рис. 3.18 Сперматогенный слой семенного канальца (группа восстановления). Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10 Обозначения: 1 – сперматогонии, 2 – сперматоциты I порядка, 3 – сперматоциты II порядка, 4 – сперматиды, 5 – просвет канальца 41

3.3. Результаты морфометрического анализа семенников крыс в норме и после эксперимента Анализируя состав сперматогенного эпителия в канальцах семенников крыс после эксперимента, было выявлено резкое снижение числа сперматоцитов II порядка: оно было равно 65,88±1,47, что на 18,45% меньше, чем у крыс в контрольной группе (p <0,05). При изучении сперматогенного пласта нами были отмечено, что количество половых клеток, находящихся на завершающем этапе дифференцировки – сперматид, также уменьшилось. Если их число в семенниках контрольных крыс составляло 194,29±3,44, то в семенниках крыс после проведения опыта – 139,76±1,87, что на 28,07% было меньше (p <0,05). Эти изменения в числе половых клеток могут служить критерием ослабления процессов сперматогенеза [47]. Численность сперматогоний и сперматоцитов I порядка в стенке извитых канальцев у крыс в норме была равна 58,56±0,88 и 68,15±0,91 соответственно. Их количество у экспериментальных крыс уменьшилось на незначительное число: 6,01% и 11,9% соответственно. Из этого следует, что популяции ранних половых клеток менее чувствительны к воздействию низких температур по сравнению с половыми клетками на поздней стадии развития. В нашем исследовании наибольший интерес вызывали изменения диаметра семенных канальцев после эксперимента. Структура их диаметров имела тенденцию к значительному уменьшению своих значений. Среднее значение диаметра канальцев при этом составляло 236,20±1,74, что на 13,93% меньше по сравнению с данными контрольных крыс (p <0,05). Данные модификации в диаметре канальцев крыс опытной группы свидетельствуют о снижении числа слоёв сперматогенных клеток [26]. У крыс после восстановления мы наблюдали незначительное увеличение сперматогоний и сперматоцитов первого порядка (табл.). Однако, повышение 42

сперматоцитов II порядка и сперматид было достаточно выраженным в ходе восстановления: на 3,75% и 0,36% соответственно (p <0,05). Таблица Морфометрические показатели извитых семенных канальцев семенников крыс линии Wistar № Показатели п/п 1 Сперматогонии, n 2 Сперматоциты порядка, n 3 Сперматоциты порядка, n 4 Сперматиды, n 5 6 7 Контрольная группа 58,56±0,88 I 68,15±0,91 Опытная группа 55,04±1,06 60,04±1,44 Группа восстановления 55,87±1,04 61,08±1,35 65,88±1,47* 68,45±1,33 194,29±3,44 139,76±1,87* 140,27±1,65 Число канальцев, n 1,23±0,69 Диаметр извитых 274,44±0,96 канальцев, мкм Индекс 3,25±0,01 сперматогенеза 0,62±0,89* 236,20±1,74* 0,95±0,75* 241,15±1,71 3,22±0,06 3,16±0,05 II 80,78±1,22 Примечание: * - статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой при p <0,05 Диаметр канальцев семенников в период восстановления также имела тенденцию к увеличению своего показателя: от 236,20±1,74 до 241,15±1,71 (на 2,05% выше) (p <0,05). Возможно, существует связь между составом сперматогенного слоя и диаметром, так как при повышении числа генеративных клеток в сперматогенном пласте наблюдается и увеличение диаметра канальцев (при восстановлении) (табл.) [27]. Главным генеративной количественным активности показателем, мужской половой отражающим железы, состояние является индекс сперматогенеза, который показывает соотношение количества слоёв клеток сперматогенной ткани к общему числу канальцев. Количественный анализ показал, что в стенке извитых канальцев семенников крыс опытной группы значение индекса сперматогенеза не имело 43

чётких различий от такового в семенных канальцах интактных крыс (табл.). Однако при восстановлении наблюдалось его уменьшение на 1,86% по сравнению с опытом. Анализируя популяцию интерстициальных эндокриноцитов экспериментальных крыс, нами было отмечено то, что количество малых, менее активных клеток Лейдига, меньше, чем у интактных крыс (p <0,05). В численности клеток средней и большой группы, наоборот, происходили изменения в сторону увеличения числа (рис. 3.19). Увеличение содержания более активных эндокриноцитов (средних и больших) в ткани семенника в ходе адаптации к холоду показывает их большую роль в секреции тестостерона и генеративной активности семенных канальцев в это время [17, 28]. * * * Рис. 3.19 Показатели среднего количества клеток, составляющих эндокринный аппарат семенников крыс линии Wistar Морфометрический анализ семенников показал, что количество сустентоцитов (клеток Сертоли) у крыс после эксперимента было меньше на на 16, 99% (p <0,05) (рис. 3.19). Эти изменения в сторону уменьшения их числа могут быть связаны с сужением диаметра семенных канальцев, так как, по 44

литературным данным, они играют роль в поддержании клеток сперматогенного пласта [33, 49]. У крыс, подвергшихся восстановительному процессу, нами было отмечено понижение численности более активных средних и больших клеток Лейдига, а рост малых эндокриноцитов был на 67,21% (p <0,05) по сравнению со значениями опытных крыс (рис. 3.19). Полученные данные указывают на возможное возвращение показателей интерстициальных эндокриноцитов до уровня интактных [28]. Таким образом, результаты морфометрического анализа семенников позволяют сделать вывод о том, что у крыс после эксперимента наблюдаются изменения в количестве сперматогенных клеток в извитых семенных канальцах, в их диаметре. Также выявляются нарушения в численности интерстициальных эндокриноцитов и клеток Сертоли, что отражается в экскреторной активности мужской гонады. К тому же, в процессе восстановления мы наблюдали увеличение числа ранее уменьшённых сперматоцитов II порядка и сперматид, что может свидетельствовать о возобновлении сперматогенной активности. 45

ВЫВОДЫ 1. Морфологический анализ семенников крыс опытной группы выявил следующие структурные изменения: для семенных канальцев была свойственна прямолинейная форма, суженность их диаметра ввиду уменьшения в них ширины эпителиосперматогенного слоя. Также наблюдалась отёчность межканальцевой стромы. Находящиеся в интерстициальной ткани клетки Лейдига были, в основном, округлой или отростчатой формы и располагались либо поодиночке, либо в виде скоплений вблизи сосудов. Сперматогенные клетки были представлены в основном сперматогониями и сперматоцитами I порядка. Это может говорить о нарушении генеративной и экскреторной активности семенников. 2. В семенниках крыс, подвергнувшихся восстановлению, было выявлено наличие разных структурных конфигураций семенных канальцев: как округлой, так и удлинённой формы. Отёчная интерстициальная ткань обнаруживалась не во всей наблюдаемой ткани, что свидетельствует о развитии восстановительных процессов. В межканальцевой строме, в основном, обнаруживались клетки Лейдига малых размеров отростчатой формы. Сперматогенный слой был представлен половыми клетками разной степени развития, о чём свидетельствует активизация генеративной активности гонады. 3. Морфометрический анализ показал, что диаметр канальцев опытных крыс был меньше, чем показатели интактных животных. Это свидетельствует о том, что число генераций половых клеток у них меньше, по сравнению с данными контрольной группы: сперматогоний 55,04±1,06 против 58,56±0,88, сперматоцитов I порядка 60,04±1,44 против 68,15±0,91, сперматоцитов II порядка 65,88±1,47 против 80,78±1,22, сперматид 139,76±1,87 против 194,29±3,44. В семенниках крыс в восстановительном периоде после охлаждения мы определили следующие показатели: сперматогоний стало 55,87±1,04, сперматоцитов I порядка 61,08±1,35, сперматоцитов II порядка 68,45±1,33 и сперматид – 140,27±1,65. 46

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ И ЛИТЕРАТУРЫ 1. Афанасьев, Ю. И. Гистология/ Ю. И. Афанасьев, Н. А. Юрина, Е. Ф. Котовский. – М.: Медицина, 2002. – 744 с. 2. Величковский, Б. Т. Свободно-радикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды/ Б. Т. Величковский. – Вестник РАМН, 2001. – №6. – 45–53 с. 3. Верин, В. К. Гормоны и их эффекты: Справочник/ В. К. Верин, В. В. Иванов. – СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2011. – 136 с. 4. Гарстукова, Л. Г. Наглядная гистология (общая и частая)/ Л. Г. Гарстукова, С. Л. Кузнецов, В. Г. Деревянко. – М.: Медицинское информационное агентство, 2008. – 121–126 с. 5. Дедов, И. И. Эндокринология: учеб. пособие/ И. И. Дедов, Г. А. Мельниченко, В. В. Фадеев. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2007. – 432 с. 6. Долгов, В. В. Лабораторная диагностика мужского бесплодия/ В. В. Долгов, С. А. Луговская, Н. Д. Фанченко, И. И. Миронова, Е. К. Назарова, Н. Г. Ракова, С. С. Раков, Т. О. Селиванов, А. М. Щелочков. – М. – Тверь: ООО «Издательство Триада», 2006. – 145 с. 7. Дуденкова, Н. А. Морфологические особенности строения семенников самцов белых крыс в период постнатального онтогенеза/ Н. А. Дуденкова, О. С. Шубина// Врач-аспирант. – 2015. – №5 (72). – С. 31–40. 8. Елизарова, О.Н. Пособие по токсикологии для лаборантов/ О.Н. Елизарова, Л.В. Жидкова, Т.А. Кочеткова. – М.: Медицина, 1974. – 169 с. 9. Карбышев, М. С. Биохимия оксидативного стресса: учебно- методическое пособие/ М. С. Карбышев, Ш. П. Абдуллаев; под общ. ред. проф. А. В. Шестопалова. – Москва: ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н. И. Пирогова Минздрава России, Издательство ХХ, 2018. – 60 с. 10. Кожевников, С.П. Алгоритмы биологической статистики: учебн.метод. пособие/ С.П. Кожевников. Ижевск: Изд. центр «Удмуртский университет», 2018. – 75 с. 47

11. Кузнецов, С. Л. Гистология, цитология и эмбриология: Учебник для медицинских вузов/ С. Л. Кузнецов, Н. Н. Мушкамбаров. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – 600 с. 12. Курашова, Н. А. Окислительный стресс и качество спермы при различных репродуктивных нарушениях у мужчин с учётом региональных особенностей (обзор литературы)/ Н. А. Курашова// Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2013. – №4 (92). – С. 172–176. 13. Кутузов, М. Н. Влияние образа жизни и факторов внешней среды на репродуктивное здоровье мужчин/ М. Н. Кутузов// Актуальные проблемы экологии и здоровья человека, 2015. – С. 86–90. 14. Логинов, П. В. Влияние витамина Е (α-токоферола) на гипоталамогипофизарно-гонадную систему самцов белых крыс при окислительном стрессе, индуцированном природными токсикантами: автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.13/ Логинов Павел Вадимович. – Астрахань, 2004. – 24 с. 15. Мамина, В.П. Оценка функционального состояния семенников и яичников у крыс, подвергнутых действию шестивалентного хрома в малых дозах/ В.П. Мамина//Проблемы репродукции. – 2017. – №1. – С. 25–28. 16. Маслова, Г. Т. Строение и развитие мужских половых клеток: Метод. указания/ Г. Т. Маслова, А. В. Сидоров. – Мн.: БГУ, 2001. – 14 с. 17. Мацюк, Я.Р. Возрастные особенности структуры семенников крыс второго поколения, полученного от самок, развивавшихся в условиях холестаза матери/ Я.Р. Мацюк, Ю.Н. Вороник, Е.Ч. Михальчук// Вестник Смоленской государственной медицинской академии. – 2018. – Т. 17. – №1. – С. 63–68. 18. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники. – 5-е изд., испр. и доп. – Ленинград: Медицина. Ленингр. отд-ние, 1969. – 423 с. 19. Мочалов, С.М. Большой оперативный практикум: метод. указания для студ. 3–4 курсов биофака/ С.М. Мочалов. – Уфа: РИО БашГУ, 2000. 20. Мухотрофимова, О. М. Сравнительная морфофункциональная характеристика органов размножения некоторых видов грызунов (Rodentia): 48

автореф. дис. ... канд. биол. наук: 06.02.01/Мухотрофимова Ольга Михайловна. – Москва, 2010. – 142 с. 21. Пожилова, Е. В. Активные формы кислорода в физиологии и патологии клетки/ Е. В. Пожилова, В. Е. Новиков, О. С. Левченкова// Вестник Смоленской государственной медицинской академии. – 2015. – Т.14. – №2. – С.13 – 22. 22. Радченко, О. Р. Влияние образа жизни мужчин, состоящих в бесплодном браке, на показатели эякулята/ О. Р. Радченко// Проблемы репродукции. – 2010. – №6. – С. 94–98. 23. Райцина, С. С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции/ С. С. Райцина; под общ. ред. О. И. Епифановой. – Москва: Наука, 1985. – 206 с. 24. Самойлов, Н. Н. Анатомия, физиология и патология репродуктивной системы: учеб. пособие/ Н. Н. Самойлов. – Брянск, 2008. – 124 с. 25. Сапин, М. Р. Анатомия человека: учеб. пособие для студ. пед. вузов: в 2 кн.: кн. 2. / М. Р. Сапин, З. Г. Брыксина. – М.: Издательский центр «Академия», 2006. – 384 с. 26. Саяпина, И. Ю. Количественный анализ функциональной активности семенника крыс при окислительном стрессе, индуцированном адаптацией к низким температурам/ И. Ю. Саяпина// Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т.XVIII. – №2. – С. 155–157. 27. Саяпина, И.Ю. Репродуктивная функция семенников крыс после семидневной адаптации к низким температурам по данным морфологического анализа/Саяпина И.Ю.// Научный журнал КубГАУ. – 2013. – №89 (05). – С. 1– 13. 28. Саяпина, И.Ю. Функциональная морфология органов мужской репродуктивной системы при адаптации к низким температурам на фоне коррекции дигидрокверцетином/И.Ю. Саяпина, С.С. Целуйко, С.А. Лашин, В.С. Остронков; Благовещенск: ООО «Типография», 2018. – 179 с. 29. Северин, Е. С. (ред) Биохимия. М: ГЭОТАР-МЕД, 2003. 784 с. 49

30. Скворцов, В. С. Влияние производственных и непроизводственных факторов на репродуктивное здоровье молодых мужчин/ В. С. Скворцов// Экология и здоровье населения, 2015. – С. 147–155. 31. Солодова, Е. К. Состояние сперматогенеза и эндокринного аппарата семенников крыс в условиях острого иммобилизационного стресса/ Е. К. Солодова, К. А. Кидун, Т. С. Угольник// Проблемы здоровья и экологии, 2015. – С. 57–60. 32. Тюзиков, И. А. Роль эстрогенов в мужском организме. Часть 2. Частная клиническая эндокринология и патофизиология эстрогенов у мужчин/ И. А. Тюзиков, С. Ю. Калинченко, Л. О. Ворслов, Ю. А. Тишова// Андрология и генитальная хирургия. – 2015. - №1. – С. 23–30. 33. Хакимов, М.С. Морфология семенников белых крыс при воздействии холода: Экспериментально-морфологическое исследование: автореферат дис. … кандидата медицинских наук: 14.00.02/Хакимов Мустафокул Сафоевич. – Первый ташкентский мед. ин-т. – Ташкент, 1993. – 18 с. 34. Хлякина, О. В. Влияние неблагоприятных эколого-физиологических факторов на репродуктивное здоровье мужчин в аспекте современного подхода к проблеме и профилактике мужского бесплодия/ О. В. Хлякина// Вестник ТГУ. – 2011. – Т.16. – №1. – С. 356–359. 35. Шевлюк, Н. Н. Клетки Лейдига семенников позвоночных (онтогенез, ультраструктура, цитофизиология, факторы и механизмы регуляции): монография/ Н. Н. Шевлюк, А. А. Стадников. – Оренбург: Издательство ОрГМА, 2010. – 484 с. 36. Ширшов, В. Н. Современное состояние проблемы мужского бесплодия: обзор клинических рекомендаций Европейской ассоциации урологов/ В. Н. Ширшов// Клиническая практика. – 2016. – №1. – С. 39–49. 37. Adamczewska, D. Features of gonadal dysgenesis and Leydig cell impairment in testes with Sertoli cell-only syndrome/D. Adamszewska, J. Slowikowska-Hilczer, K. Marchlewska//Folia Histochem Cytobiol. – 2020. – № 58 (2). – P. 73–82. 50

38. Aitken, R. J. Antioxidant systems and oxidative stress in the testes/ R. J. Aitken, S. D. Roman// Oxidative Medicine and Cellular Longevity. – 2008. – №1. – P. 115–124. 39. Armagan A., Uzar E., Uz E., Yilmaz H. R. Caffeic acid phenethyl ester modulates methotrexate-induced oxidative stress in testes of rat// Human & Experimental Toxicology. – 2006. – Vol. 25. – P. 119–125. 40. Blanco-Rodriguez, J. Mild hypothermia induces apoptosis in rat testis at specific stages of the seminiferous epithelium// J. Blanco-Rodriguez, C. MartinezGarcia// Journal of Andrology. – 1997. – Vol. 18. – №5. – P. 535–539. 41. Bonde, J. How work-place conditions, environmental toxicants and lifestyle affect male reproductive function// J. Bonde, L. Storgaard. – Int. J. Androl. – 2002. – №25. – P. 262–268. 42. Busuttil Leaver R. Male infertility: an overview of causes and treatment options// British Journal of Nursing. – 2016. – Vol. 25. – №18. – P. 35–40. 43. Cheng, C. Y. Stress induced glucocorticoid-mediated apoptosis of rat Leydig cells in vivo. / C. Y. Cheng, Q. Wang, F. F. Wang et al. // Stress. – 2012. – Vol. 15. – №1. – P. 74–78. 44. Darbandi, M. Reactive oxygen species and male reproductive hormones/M. Darbandi, S. Darbandi, A. Agarwal, P. Sengupta, R. Henkel// Reproductive Biology and Endocrinology. – 2018. – Vol. 16. 45. Halliwell, B. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement, and significance// B. Halliwell, S. Chirico. – Am. J. Clin. Nutr. – 1993. – Vol. 57. – P. 715–725. 46. Hess, R. A. Estrogens and development of the rete testis, efferent ductules, epididymis and vas deferens/R. A. Hess, R. M. Sharpe, B. T. Hinton//Differentiation. – 2021. – №118. – P. 41–71. 47. Hess, R. A. Spermatogenesis and cycle of the seminiferous epithelium. Molecular mechanisms in spermatogenesis/ R. A. Hess, R. L. Franca// Austin. TX. Landes Bioscience/ Springer Science. – 2008. – pp. 1–15. 51

48. Kelly, D. M.Testosterone: a metabolic hormone in health and disease. // D. M. Kelly, T. H. Jones Journal of Endocrinology. – 2013. 217. – P. 25–45. 49. Kubota, H. Spermatogonial stem cells/H. Kubota, R. Brinster//Biology of reproduction. – 2018. – №99 (01). – P. 52–74. 50. Logan, M. J. Anatomy of the male reproductive organs. Cole and Cupps, Reproduction in domestic animals/ M. J. Logan, W. S. Tyler// I. Acad. Press, N. Y., London. – 1959. – P. 253–267. 51. Moraga-Amaro R., van Waarde, A., Doorduin, J., & de Vries, E. F. J. Sex steroid hormones and brain function: PET imaging as a tool for research// Journal of Neuroendocrinology. – 2018. – № 30 (2). – P. 1 – 12. 52. Ni Fei-Da Molecular insights into hormone regulation via signaling pathways in Sertoli cells: With discussion on infertility and testicular tumor/ Fei-Da Ni, Shuang-Li Hao, Wan-Xi Yang//Gene. 2020. 53. O’Shaughnessy, P. J. Hormonal control of germ cell development and spermatogenesis/ P. J. O’Shaughnessy// Seminars in cell and developmental biology. – 2014. – № 29. – P. 55–65. 54. O’Shaughnessy, P. J. Leydig Cell regeneration and expression of cell signaling molecules in the germ cell-free testis/P.J. O’Shaughnessy, I.D. Morris, P.J. Baker// Reproduction. – 2008. 135. – P. 851–858. 55. Oyola, M. G. Hypothalamic-pituitary-adrenal and hypothalamic-pituitarygonadal axes: sex differences in regulation of stress responsivity/M. G. Oyola, R. J. Handa//Stress. Author manuscript. – 2017. – № 20 (5). – P. 476–494. 56. Ramana K. V., Srivastava S., Singhal S. S. Lipid peroxidation products in human health and disease// Oxid Med Cell Longev, 2014. 57. Ramaswamy, S. Endocrine control of spermatogenesis: Role of FSH and LH/testosterone/ S. Ramaswamy, G. F. Weinbauer// Spermatogenesis. – 2014. - № 4(2). 58. Sharma R. K., Pascualotto F. F., Nelson D. R. et al. The reactive oxygen species – total antioxidant capacity score is a new measure of oxidative stress to predict male infertility// Hum. Reprod. – 1999. – Vol. 14. – P. 2801 – 2807. 52

59. Taepogsorat, L. Stimulating effects of quercetine on sperm quality and reproductive organs in adult male rats/ L. Taepogsorat [et al.]// Asian Journal of Andrology. – 2008. – Vol. 10. – №2. – P. 249–258. 60. Turner, T. T. Oxidative stress: a common factor in testicular dysfunction/ T. T. Turner, J. J. Lysiak// Journal of Andrology. – 2008. – Vol. 29, №5. – P. 488– 498 61. Valko M., Leibfritz D., Moncol D. et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological function and human disease// Intern. J. Biochem. Cell. Biol. – 2007. – Vol. 39. P. 44–84 62. Zogbi, C. Gonocyte development in rats: proliferation, distribution and death revisited/ C. Zogbi, R. B. Tesser, G. Encinas, S. M. Miraglia, T. Stumpp// Histochem Cell Biol. – 2012. – Vol. 138 (2). – P. 305–322. 63. https://cyberleninka.ru 64. https://elibrary.ru 65. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ 53

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

Рецензия от Шамсутдинова Динара

Выпускная квалификационная работа Шамсутдиновой Д.А. посвящена актуальной проблеме – роли отрицательного воздействия холода на морфологические и функциональные особенности семенников крыс линии Wistar. Низкая температура окружающей среды является одним из неблагоприятных природных факторов, способных оказывать повреждающее действие не только на весь организм, но и на половую систему. В настоящ...

больше 3 лет назад

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв