ПРИМЕНЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ГРИППА В

Любовь Липко

ПРИМЕНЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ГРИППА В

Использование высокоспецифичных моноклональных антител при диагностике вирусов гриппа позволяет выявить положения с возникшими аминокислотными заменами, от чего зависит выбор штаммов, входящих в состав вакцин. Целью работы было определение эффективности применения МКА в диагностике вирусных инфекций гриппа В. Антигенный анализ вирусов проводился методом РТГА в присутствии МКА.

Биотехнология

Статьи

Вуз: Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины

ID: 60e9e3dce4dde500016d2dbd

UUID: cb794aa0-c3d8-0139-3c68-0242ac180005

Язык: Русский

Опубликовано: больше 3 лет назад

Просмотры: 17

39.08

Любовь Липко

Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 72,5 КБ

Поделиться работой

УДК: 616.98:578.832-07:619 ПРИМЕНЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ГРИППА В Липко Любовь Олеговна ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский университет ветеринарной медицины», г. Санкт-Петербург, Россия lipko1999@list.ru Аннотация. Использование высокоспецифичных моноклональных антител при диагностике вирусов гриппа позволяет выявить положения с возникшими аминокислотными заменами, от чего зависит выбор штаммов, входящих в состав вакцин. Целью работы было определение эффективности применения МКА в диагностике вирусных инфекций гриппа В. Антигенный анализ вирусов проводился методом РТГА в присутствии МКА. По результатам исследования МКА 10F1, 7G9 реагировали со всеми исследованными вирусами. МКА 7C8 и 8A8 реагировали на высоких титрах с 92,7% и 90,9% вирусов, соответственно. МКА 10D9 и 10B6 реагировали на более низких титрах с 27,3% и 47,3% штаммов, соответственно. Моноклон 7H8 не реагировал ни с одним исследованным штаммом. Полученные данные указывают на возникновение аминокислотных замен в соответствующих положениях. Ключевые слова: моноклональные антитела, вирусы гриппа В, антигенная изменчивость, аминокислотные замены, диагностика. Использование методов ранней диагностики вирусных инфекций позволяет своевременно определить их этиологическую природу, что необходимо для быстрого реагирования медицинских служб и разработки превентивных мероприятий в эпидемиологической практике. Благодаря достижениям в области клеточной инженерии повысить чувствительность диагностических методов определения вирусных агентов стало возможным с 1

применением высокоспецифичной иммунореагентики моноклонального типа [1, 2, 3]. На сегодняшний день выделяют две антигенно различные линии гриппа В: Викторианская и Ямагатская (родоначальниками линий являются штаммы B/Виктория/2/1987 и B/Ямагата/16/1988 соответственно). Накопление аминокислотных замен в поверхностных гликопротеинах – гемагглютинине и нейраминидазе – в процессе циркуляции штаммов этих двух ветвей приводит к изменению антигенных свойств вирусов. В результате внутри линий могут возникать дрейф-варианты, которые будут существенно отличаться от штаммов предыдущих лет. Применение инженерных моноклональных антител (МКА), которые реагируют с определенными антигенными детерминантами вируса, позволяет определить, в какой области произошла замена [3, 4, 5]. МКА представляют собой специфичные белки – иммуноглобулины, получаемые путем иммунизации мышей с последующим выделением из сыворотки лимфоидных клеток. Следующим этапом является слияние лимфоцитов с клетками миеломы – получение гибридом, синтезирующих специфичные антитела, которые и связываются с определенным эпитопом вирусной частицы [1]. В ходе работы были использованы штаммы вируса гриппа В Викторианской линий, выделенные из ПЦРположительных на грипп материалов в эпидемический сезон в 2019-2020 г. Материалы от больных, а также выделенные изоляты гриппа В, были получены в течение сезона из стационаров г. Санкт-Петербурга и других городов страны. МКА к вирусам гриппа типа В были предоставлены лабораторией биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ «Научноисследовательского института гриппа им. А. А. Смородинцева» Министерства Здравоохранения РФ. Выделение вирусов гриппа В осуществлялось путем заражения клеточной культуры и десятидневных куриных эмбрионов материалами от больных гриппом. При детекции выраженного цитопатического действия и/или гемагглютинации культуральную среду собирали и использовали для последующего типирования возбудителя в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с применением диагностических наборов ВОЗ. После 2

определения типа возбудителя и подтверждения его принадлежности к Викторианской линии, для исследуемых вирусов был проведен антигенный анализ методом РТГА в присутствии МКА. Реакции гемагглютинации и торможения гемагглютинации проводили в соответствии с рекомендациями ВОЗ. При постановке РТГА в круглодонных планшетах готовили последовательные двукратные разведения МКА в физиологическом растворе, для чего в первый ряд лунок вносили по 50 мкл разведенных в стерильном физиологическом растворе 1:10 МКА, затем в остальные ряды – по 25 мкл физ. раствора. За титр гемагглютининов принимали наибольшее разведение вируса, вызвавшее полную агглютинацию эритроцитов. С целью изучения антигенной изменчивости вирусов гриппа типа В была предоставлена панель из семи МКА к эталонному штамму В/Брисбен/46/15, обозначенные как МКА 10D9, 10F1, 10B6, 7C8, 7G9, 7H8, 8A8. 55 анализируемых вирусов были выделены на клеточной культуре MDCK. Установлено, что все МКА обладали выраженной антигемагглютинирующей активностью по отношению к вирусу-иммуногену В/Брисбен/46/15, выделенном на куриных эмбрионах. МКА 10F1, 7G9 также обладали выраженной антигемагглютинирующей активностью в отношении всех исследованных вирусов, принадлежащих к этой ветви. Интересным исключением стал МКА 7H8, который не взаимодействовал ни с одним вирусом, в том числе с тремя эталонными штаммами B/Котд'Ивуар/1662/19, B/Гонконг/269/17, B/Мэриленд/15/16. МКА 10D9 и 10B6 реагировали до титров 1/4 - 1/2 лишь с 27,3% и 47,3% вирусов соответственно. МКА 7C8 и 8A8 имели более хорошие показатели – реагировали с 92,7% и 90,9% штаммов, причем, до более высоких титров, чем с В/Brisbane/46/15, что объясняется особенностью МКА лучше взаимодействовать с изолятами, полученными на системе выделения MDCK. Основываясь на данных, полученных при постановке РТГА, можно заключить, что низкие титры реагирования МКА 10D9, 10B6, 7H8 с большинством выделенных штаммов указывают на возникновение аминокислотных замен в соответствующих положениях. 3

Таблица 1. Антигенный анализ вирусов гриппа В Викторианской эволюционной линии, выделенных на территории России в эпидемический сезон 2019-2020 гг. с использованием моноклональных антител. Моноклональные антитела (с указанными позициями аминокислотных замен) № п/ п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 Вирусы гриппа В (Викторианск ая линия) B/Брисбен/ 46/15 Egg B/Кот-д'Ивуар/ 1662/2019 MDCK B/Гонконг/ 269/2017 MDCK B/Мэриленд/ 15/2016 MDCK B/Астрахань/ 01/2020 MDCK B/Астрахань/ 06/2020 MDCK B/ Владивосток/ 13/2019 MDCK B/Гурзуф/ НИИГ-19/2020 MDCK B/ Калининград/ 34/2020 MDCK B/Красноярск/ 07/2020 MDCK B/Красноярск/ 09/2020 MDCK B/ Новосибирск/ 07/2020 MDCK B/ Новосибирск/ 10/2020 10D9 10F1 10B6 7C8 7G9 7H8 8A8 141G →R 241P →T 182T →K 200Q →R 74G →E 75K →E 122H →N 206G →R 121T →I >200 00 80 >200 00 640 320 >200 00 20 5120 80 5120 640 640 <10 160 2560 320 320 5120 2560 1280 640 >200 00 320 >200 00 5120 5120 5120 320 20000 160 20000 1280 640 <10 20 2560 160 10000 5120 2560 <10 320 320 160 320 2560 1280 <10 640 640 160 5120 1280 640 40 80 2560 80 1280 1280 640 40 80 >200 00 160 >200 00 1280 320 <10 80 5120 320 >200 00 1000 0 2560 320 320 5120 320 >200 00 1000 0 5120 40 320 5120 160 10000 640 640 80 <10 4

1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 2 8 2 9 3 0 3 MDCK B/Омск/НИИГ01/2020 MDCK B/Омск/ 05/2020 MDCK B/Самара/ 04/2020 MDCK B/Тула/ 03/2020 MDCK B/Тула/ 09/2020 MDCK B/Тула/ 11/2020 MDCK B/Тула/ 14/2020 MDCK B/Хабаровск/ 02/2020 MDCK B/Хабаровск/ 07/2020 MDCK B/Челябинск/ 01/2020 MDCK B/Челябинск/ 113/2020 MDCK B/СПб/НИИГ60/2020 MDCK B/СПб/НИИГ84/2020 MDCK B/СПб/НИИГ95/2020 MDCK B/СПб/НИИГ97/2020 MDCK B/СПб/НИИГ118/2020 MDCK B/СПб/НИИГ130/2020 MDCK B/СПб/НИИГ- 1280 160 5120 5120 640 320 160 2560 80 5120 320 640 40 10 10000 320 10000 2000 0 2560 40 160 >200 00 320 >200 00 2560 2560 <10 80 640 160 2560 2560 1280 10 640 10000 40 >200 00 160 320 <10 <10 640 160 160 5120 2560 <10 160 >=20 000 40 >200 00 320 320 20 10 640 160 320 5120 1280 <10 160 2560 80 5120 1280 640 <10 80 640 80 160 2560 640 20 160 640 320 320 1000 0 1280 320 320 320 320 2560 5120 2560 <10 640 5120 160 10000 2560 1280 40 160 >200 00 320 >200 00 1000 0 5120 20 640 1280 80 320 1280 320 160 80 1280 80 320 1280 320 160 160 1280 160 5120 2560 640 40 160 5

1 3 2 3 3 3 4 3 5 3 6 3 7 3 8 3 9 4 0 4 1 4 2 4 3 4 4 4 5 4 6 4 7 4 8 135/2020 MDCK B/СПб/НИИГ136/2020 MDCK B/СПб/НИИГ137/2020 MDCK B/СПб/НИИГ138/2020 MDCK B/СПб/НИИГ140/2020 MDCK B/СПб/НИИГ144/2020 MDCK B/СПб/НИИГ151/2020 MDCK B/СПб/НИИГ156/2020 MDCK B/СПб/НИИГ157/2020 MDCK B/СПб/НИИГ159/2020 MDCK B/СПб/НИИГ160/2020 MDCK B/СПб/НИИГ162/2020 MDCK B/СПб/НИИГ170/2020 MDCK B/СПб/НИИГ172/2020 MDCK B/СПб/НИИГ173/2020 MDCK B/СПб/НИИГ175/2020 MDCK B/СПб/НИИГ177/2020 MDCK B/СПб/НИИГ182/2020 MDCK 5120 80 5120 5120 1280 80 160 2560 160 10000 1000 0 1280 40 160 >200 00 40 >200 00 160 320 40 <10 2560 80 5120 2560 640 <10 160 2560 40 5120 640 320 40 40 5120 320 20000 1000 0 2560 160 320 2560 80 5120 1280 320 <10 80 >200 00 160 20000 1280 2560 160 80 2560 40 160 1280 320 <10 40 10000 40 10000 160 160 10 <10 1280 80 640 1280 320 160 40 640 320 640 2560 2560 <10 160 640 160 5120 640 640 80 80 5120 80 5120 1280 640 <10 80 1280 320 5120 5120 1280 10 320 10000 320 10000 1000 0 2560 40 320 5120 640 20000 2000 0 5120 1280 1280 6

4 9 5 0 5 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5 6 B/СПб/НИИГ191/2020 MDCK B/СПб/НИИГ192/2020 MDCK B/СПб/НИИГ199/2020 MDCK B/СПб/НИИГ200/2020 MDCK B/СПб/НИИГ203/2020 MDCK B/СПб/НИИГ289/2020 MDCK B/СПб/НИИГ336/2019 MDCK B/СПб/НИИГ352/2019 MDCK 1280 160 5120 2560 1280 <10 160 5120 160 2560 5120 1280 40 40 2560 160 10000 2560 1280 20 320 2560 160 5120 5120 2560 40 320 5120 320 10000 1000 0 5120 40 640 10000 160 10000 1000 0 10000 320 320 5120 80 5120 320 320 <10 <10 >200 00 160 >200 00 1280 640 40 40 Примечание: голубым цветом выделены эталонные штаммы вирусов гриппа В. Литература: 1. Вопросы общей вирусологии: Учебное пособие // Под ред. О. И. Киселева, И. Н. Жилинской – СПб.: СПбГМА им. И. И. Мечникова, 2007. – 374 с. 2. Медицинская вирусология: Руководство // Под ред. Д. К. Львова. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. – 656 с.: ил. 3. Daniels PS, Jeffries S, Yates P, Schild GC, Rogers GN, Paulson JC, et al. The receptor-binding and membrane-fusion properties of influenza virus variants selected using antihaemagglutinin monoclonal antibodies // EMBO J. -1987 - 6(5) – Р. 1459–65. 4. Lindstrom S.S., HiromotoY., Nishimura H. et al. Comparative Analysis of Evolutionary Mechanisms of the Hemagglutinin and Three Internal Protein Genes of Influenza B Virus: Multiple Cocirculating Lineages and Frequent Reassortment of the NP, M and NS Genes// Journal of Virology. – 1999. – V.73. №5. – P.4413-4426 5. Rota PA, Wallis TR, Harmon MW, Rota JS, Kendal AP, Nerome K. Cocirculation of two distinct evolutionary lineages of influenza type B virus since 1983. Virology. 1990 Mar;175(1):597

68. 8

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв