Совершенствование методов изучения амилоидных агрегатов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Совершенствование методов изучения амилоидных агрегатов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae Прион [PSI+] – это генетический детерминант, обнаруженный у дрожжей. Белок Sup35, агрегация которого приводит к образованию приона [PSI+], в норме участвует в терминации трансляции. Для изучения агрегатов Sup35 широко используют метод полуденатурирующего агарозного гель-электрофореза (SDD-AGE), который позволяет оценить наличие и сравнить размер агрегатов. Размер агрегатов легко сравнить в пределах одного геля, однако сравнение разных экспериментов затруднительно. В рамках решения этой проблемы мы предприняли попытку разработать молекулярный маркер для определения размера агрегатов на основе мышц животных, а также на основе коммерческого набора маркеров молекулярного веса ДНК. Мы выяснили, что набор маркеров молекулярного веса ДНК более удобен для оценки размера крупных белковых комплексов с помощью SDD-AGE, чем мышечные экстракты животных. Кроме того, мы проанализировали некоторые факторы, которые могут влиять на размер агрегатов. В частности, известно, что диапазон размера агрегатов зависит от оптической плотности при сборе культуры. Это может быть причиной артефактов при сравнении культур с разной оптической плотностью. Мы провели эксперимент с выделением белка из культур, находящихся на разных стадиях роста и выяснили, что диапазон размера агрегатов зависит от оптической плотности при сборе культуры, поэтому для анализа размеров агрегатов Sup35 очень важно использовать культуры на одинаковой стадии роста. Наконец, при анализе амилоидных агрегатов используют разные способы выделения белка из клеток дрожжей: с помощью стеклянных шариков, которая имеет ряд недостатков, а также методика выделения белка из сферопластов. В ходе работы мы провели сравнение этих методов и оптимизировали методику выделения белка. Модифицированный протокол выделения белка из сферопластов, на основе метода, предложенного Халфманном и Линдквист, не уступает механическому способу, предложенному Кушнировым и др.

Биология
Дипломы

Вуз: Санкт-Петербургский государственный университет (СПбГУ)

ID: 5a6f881d7966e12684eea01d
UUID: 650609e7-fe21-49f3-864b-25795296eebb
Язык: Русский
Опубликовано: около 6 лет назад
Просмотры: 31

Прокофьева Надежда Юрьевна

Источник: Санкт-Петербургский государственный университет


0

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 801,9 КБ


Поделиться работой
Current View

Рецензии:

  Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Для лиц старше 18 лет