Создание геля на основе экстракта Aloe arborescens, обладающего антимикробной активностью в отношении  Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus

Жигачева

Создание геля на основе экстракта Aloe arborescens, обладающего антимикробной активностью в отношении Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus

В наше время к лекарственным препаратам на основе природных компонентов уделяют достаточно большое внимание, благодаря тому, что содержащиеся в них биологически активные вещества, при правильном применении не вызывают раздражения, аллергических реакций, а также способны оказывать терапевтическое действие (например, экстракты чабреца, солодки, крапивы двудомной, зверобоя, сок алоэ обладают выраженным ранозаживляющим и противовоспалительным действием). Тем самым есть возможность улучшить эффективность применяемых средств, обеспечивая комплексный подход к лечению. Наиболее эффективной мягкой лекарственной формой является гели, так как обладают рядом преимуществ: легко наносятся, хорошо высвобождают действующие вещества, оказывают трансдермальное действие.

Биотехнология

Диссертации

Вуз: Саратовский государственный аграрный университет имени НИ Вавилова

ID: 60e58963e4dde5000173e71c

UUID: 849a2ef0-c140-0139-3abb-0242ac180005

Язык: Русский

Опубликовано: почти 3 года назад

Просмотры: 57

-8.86

Жигачева

Саратовский государственный аграрный университет имени НИ Вавилова

Комментировать 0

Рецензировать 0

Скачать - 2,3 МБ

Поделиться работой

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» Факультет ветеринарной медицины, пищевых и биотехнологий Кафедра микробиологии, биотехнологии и химии ДОПУЩЕНО к защите: Зав. кафедрой __________О.С. Ларионова «___»________________2021 г. ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА Магистерская диссертация на тему: «Создание геля на основе экстракта Aloe arborescens, обладающего антимикробной активностью в отношении Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus» Направления подготовки 19.04.01 Биотехнология Магистерская программа Биотехнология Обучающийся Жигачева Марина Сергеевна __________ Руководитель выпускной квалификационной работы: Доцент, к.х.н. Древко Ярослав Борисович __________ Рецензент: Руководитель центра коллективного пользования научным оборудованием в области физико-химической биологии и нанобиотехнологии «Симбиоз» ИБФРМ РАН к.б.н. А.А. Широков __________ Саратов 2021

Содержание Введение Раздел 1. Литературный обзор 3 1.1 Гели. Классификация 5 1.2 Гели в медицине 6 1.3 Алоэ древовидное (Aloe arborescens). 9 Описание, состав, свойства. 1.4 Карбоксиметилцеллюлоза. 12 Описание, структура, свойства. 1.5 Аллантоин. 15 Формула, значение в медицине. 1.6 Диметилсульфоксид. Формула, значение в медицине. 16 1.7 Staphylococcus aureus 18 1.8 Pseudomonas aeruginosa 20 1.9 Klebsiella pneumoniae 22 Раздел 2. Экспериментальная часть 2.1 Характеристика научно-исследовательской базы 26 2.2 Оборудование 27 2.3 Используемые вещества 31 2.4 Используемые микроорганизмы 31 2.5 Объекты исследования 32 2.6 Методы исследования 34 Раздел 3. Результаты и их обсуждения 3.1 Контрольный образец 36 3.2 Сравнение полученных образцов с контрольным 37 3.3 Влияние рН среды на процесс гелеобразования 38 3.4 Влияние концентрации КМЦ на процесс 39 гелеобразования 3.5 Введение активных добавок в состав геля 40 2

3.6 Изучение термостабильности 41 3.7 Изучение антимикробной активности 41 Раздел 4. Заключение 50 Выводы 51 Список использованных литературных источников 52 3

Введение В настоящее время в сферу интересов разработчиков как косметологических так и фармацевтических средств входит направление по созданию лекарственных препаратов на основе растительного сырья. Содержащиеся в растениях биологически активные вещества, при правильном использовании не вызывают раздражения, аллергических реакций, а также могут иметь антимикробную активность, против организмов устойчивых к антибиотикам. Такие средства широко используют для лечения кожных и слизистых заболеваний, при этом долговременная фитотерапия будет практически безопасной, в отличие от препаратов химического происхождения [1]. Для увеличения терапевтического спектра действия препаратов, возможно добавление вспомогательных веществ. Они либо усиливают необходимый эффект, либо оказывает действие на другую сторону проблемы, тем самым образуется комплексный подход к лечению. Сейчас это направление считается популярным, в связи с увеличением внимания к «зеленым» ингредиентам в медицине, косметологии и к сохранению природы земного шара[1-2].Давно известно, растительное сырье, такие как, экстракты чабреца, солодки, крапивы двудомной, зверобоя, сок алоэ обладают выраженным ранозаживляющим и противовоспалительным действием, а экстракт каштана конского и дигидрокверцетин оказывают ангиопротекторный эффект, что может обеспечивает комплексный подход в лечении раневого процесса кожных покровов [3]. Также широкое использование в медицине получили гели. Известны они в различных видах и с использованием различных по природе высокомолекулярных веществ, обладают рядом преимуществ, что обеспечивает их использование в офтальмологии, гинекологии, стоматологии и т.д. [4]. Именно гели являются перспективной лекарственной формой, обладающие способностью легко наносится, хорошо высвобождают действующие вещества, обеспечивая трансдермальное действие [3]. 4

Основываясь на актуальность темы, целью работы было создание геля на основе сока алоэ и проверить его антимикробную активность. Для этого мы поставили следующие задачи: 1) создание геля, удовлетворяющий нашим требованиям; 2) ввести вспомогательные активные вещества; 3) определить оптимальные по составу и свойствам образцы для дальнейшего исследования; 4) исследовать антимикробную активность полученного геля; 5) сделать вывод о действии геля. 5

Раздел 1. Литературный обзор 1.1 Гели. Классификация Гели представляет собой трехмерную полимерную сетку, полученную в процессе «сшивание» между собой длинных полимерных молекул (рис. 1). Это дисперсные системы, состоящие из нескольких фаз. Первая формирует своего рода каркас, придающий системе прочность и структуру, благодаря наличию выполняют гелеобразователей. эту функцию. Именно Вторая высокомолекулярные фаза представляет вещества собой среду, поддерживающую каркас в набухшем состоянии, тем самым она удерживает определенный объем жидкости в своей структуре и не допускает ее растекания. В основном эту роль выполняют низкомолекулярные вещества [5-7]. Рисунок – 1.Структура полимерной сетки Благодаря уникальным механическим и физико-химическим свойствам гели находят широкое применение в различных областях медицины, пищевой промышленности, в аналитической химии и т.д. Они совмещают в себе свойства как твердых, так и жидких тел. Классифицировать гели можно по способу получения. Например, в синтезе используют как синтетические полимеры (эфиры целлюлозы, поливиниловый спирт и др.), так и природные (хитозан, альгинат, пектины и др.). Но возможны и гибридные гели на основе полисахаридов и синтетических полимеров. 6

Использование гелей, где растворителем является вода широко распространено, благодаря обеспечению пролонгированного действия лекарственных препаратов. К сожалению, одним из недостатков применения гидрогелей на основе синтетических полимеров является вероятность их отторжения тканями живого организма ввиду отсутствия условий для дифференциации, пролиферации клеток и тканевой регенерации. Что нельзя сказать о гидрогелях на основе природных полимеров, обладающих априори биосовместимостью, эластичностью, в некоторых случаях собственной биологической активностью. Их комбинация с лекарственными средствами находит все больше и больше применение в медицине. Также классифицировать гели можно по типу растворителя. Если среда представлена органическим растворителем, то гель называется органогель, если водой – гидрогель. В зависимости от условий сушки геля разделяют аэрогель, криогель, ксерогель. Аэрогели – это материал, в котором жидкость в порах замещается на воздух, сохраняя пористую структуру. Криогели получаются в результате убирания жидкости из пор по средством замораживающегося высушивания. Ксерогель – материал, полученный в процессе высушивания под действием температуры или давления с последующей усадкой геля [7]. 1.2 Гели в медицине На данный момент в фармацевтической практике все чаще используют мягкие лекарственные формы (мази, гели, крема и т.д.). Благодаря многим показателям, такие как локализованное действие, охлаждающий эффект, легкость нанесение, сохранение формы, отсутствие жировой мазевой основы наиболее перспективной формой является гелевая основа [8]. При этом такие средства применимы для использования на слизистых оболочках [910](рис.2). 7

а) б) Рисунок – 2 а,б. Известные лекарственные гели. Уже не ново помещать лекарственные средства в полимерные матрицы, для пролонгированного действия. Гели, восприимчивые к рН можно использовать для направленной доставки лекарства. Именно на этом принципе основано действие препаратов в полимерной оболочке: попадая в нужную среду, лекарство начинает высвобождаться, обеспечивается направленное действие. А полимерная матрица контролирует скорость выделения данного препарата, тем самым осуществляется направленный транспорт лекарственных веществ [11]. 8

Но следует помнить, что для применения в медицине полимеры должны удовлетворять ряду требований, таких как: 1) быть биосовместимыми, 2) мягкие условия гелеобразования, 3) иметь определённые показатели: вязкость, адгезия, разрывная прочность, 4) быть биорезорбируемыми для создания среды роста клеток, их перегруппировки и образования новых [4]. Известно большое количество литературы, описывающие самые разнообразные лекарственные средства на основе гидрогелей. Например, в статье [12] было исследовано эффективность использование гидрогелей на основе диальдегида гиалуроновой кислоты и сукцината хитозана в качестве носителя луцентиса при антиглаукомных операциях. В ходе чего было доказано, что такое применение безопасно и эффективно, была подобрана оптимально действенная концентрация луцентиса, который в составе гидрогелевого дренажа высвобождается постепенно и подавляет пролиферацию соединительной ткани. В опубликованной статье [2]проводили исследование относительно нефропротекторного действия трех слизисто-адгезивных фитогелей с биофлавоноидами, обладающих антиоксидантным, пребиотическим, ангиопротекторным, противовоспалительным действиями. Использовали фитогели «Квертулин», «Биотрит» и «Дубовый». В ходе экспериментов было выяснено, что применение фитогелей, содержащих антиоксиданты и антидисбиотики, имеют нефропротекторный эффект. 1.3 Алоэ древовидное (Aloe arborescens). Описание, состав, свойства. На данный момент перспективным направлением является использование растений в разработке лекарственных препаратов, который в 9

свою очередь будет обладать широким спектром биологической активности. Одним из них является алоэ древовидное (Aloe arborescens). Это ценное лекарственное растение, которое известно еще с давних времен (ри.3). Оно широко используется в современной фармацевтической промышленности для производства ряда препаратов для многогранного терапевтического применения, где он оказывает биостимулирующую, ранозаживляющую и другие виды активности [13-14]. Рисунок – 3.Aloearborescens. Интересом ученых со всего мира является создания лекарственных средств на основе Aloe arborescens. Например, в статье [15] целью исследования является разработка эффективного лекарственного растительного монопрепарата на основе сока алоэ древовидного (Aloe arborescens Mill.) с высоким содержанием действующих веществ. Такой препарат возможно применять пациентам, страдающим геморроем. Уникальность работы заключалась в подборе гидрофильной основе, которая обеспечивала бы высокое высвобождение действующего вещества из основы и легкое всасывание в прямую кишку, несущее слабительный эффект. 10

На основе алоэ древовидного получают разнообразные гели не только в медицинских, но в косметических целях [16-17]. Оно считается одним из действующих веществ увлажняющих кремов, солнцезащитных средств и средств против морщин, благодаря способности смягчать роговой слой [18].В связи с возросшим спросом на данный вид растения острый вопрос стоит в выявлении характерных признаков, одни из них, например, относящиеся к особенностям анатомии и гистологии листьев для идентификации натурального и качественного сырья [17, 19] Но, несмотря на все положительные стороны использования этого растения, очень мало литературы, касающейся химического состава. Например, в работах [14, 20] проводили различные методы для качественного и количественного определения составляющих веществ сока алоэ. В результате было выяснено, что доминантной органической кислотой является яблочная кислота, что свойственно суккулентному растению с метаболизмом ди- и трикарбоновых кислот по типу толстянковых. Также показано наличие изолимонной кислоты, лимонной, фумаровой, малоновой и щавелевой кислот. Ученым удалось выявить присутствие 11 аминокислот, свободных углеводов (глюкозы, сахарозы и фруктозы), фотосинтетических пигментов (виолаксантина, криптоксантина, лютеина, Р-зеакаротина, Ркаротина, хлорофиллов a, b и феофетинов a, b), группа пектиновых веществ, фенольные соединения, алоэнин, ванилиновую кислоту и умбеллиферон. Именно биологически таким разнообразным активных веществ химическим обусловлен составом целый иряду комплекс терапевтических свойств данного растенияалоэ древовидное. В статьях [20-21] была изучена антиоксидантная активность, в результате, которого выяснено, что сок алоэ A. arborescens способен оказывать положительное влияние на различные этапы окислительных процессов. Это обусловлено наличием фенольных соединения, участвующих в процессе нейтрализации влияния свободных радикалов, а также полисахаридов, способные связывать ионы тяжелых металлов. 11

В листьях содержаться такие вещества как антрахиноны и антрагликозиды (алоин), обладающие высокой противовоспалительной, обезболивающей и пищеварительной активностью. А алоин в свою очередь включает в свой состав антрахинон гликозидбарболоин, (алоэ-эмодин), обладающий выраженными солнцезащитными свойствами и антимикробной активностью в отношении к бактериям (стафилококки, стрептококки, дифтерийную, дизентерийную и брюшнотифозную палочки) и вирусам [2223]. 1.4 Карбоксиметилцеллюлоза. Описание, структура, свойства. Карбоксиметилцеллюлоза – является производным веществом от природного полисахарида — целлюлозы, где одна или несколько гидроксильных групп замещена на карбоксилметильную (рис.4). Рисунок – 4. Структурная формула КМЦ Карбоксиметилцеллюлоза (КМЦ) имеет широкое применение в различных отраслях пищевого, фармацевтического, косметического и других производств. В качестве добавки полимер не приводит к аллергическим реакциям, имеет большое значение ПДК, но даже не смотря на положительные характеристики, КМЦ запрещено при производстве детского питания, а также рекомендуется отказ от потребление людям, имеющим 12

заболевания желудка и кишечного тракта и страдающим нарушением обменных процессов [24-25]. Растворы КМЦ в различных типах растворителей образуют истинные растворы, где макромолекулы являются кинетически свободными. В результате образуется вязкий коллоидный раствор, который может сохранять свои свойства долгое время. Первый этап взаимодействия всех полимеров с растворителем, это набухание, то есть увеличение объема высокомолекулярного вещества за счет поглощения низкомолекулярной жидкости или ее паров. Ее молекулы проникают в полимерную сетку и изменяют структуру полимера. При этом не происходит разрыва связей вдоль цепи, вместо этого нарушаются слабые межмолекулярные связи [26]. Кроме того, возможны и взаимодействия молекул растворителя и ВМС, например, сольватация, происходит она за счет межмолекулярных связей (ван-дер-ваальсовых сил, водородных связей, диполь-дипольного взаимодействия, донорно-акцепторного взаимодействия), которые могут проявляться в определенных условиях реакции. В статье [27] получали гель на основе целлюлозы в водном растворе NaOH / мочевина. Реологические свойства и поведение гелеобразного раствора целлюлозы исследовали с помощью динамического измерения вязкоупругости. Было проанализировано влияние температуры, времени, молекулярной массы и концентраций целлюлозы как на модуль упругости при сдвиге ( G '), так и на модуль потерь ( G ''). В ходе работы впервые было выявлено необратимое гелеобразование в системе раствора целлюлозы. Образовавшийся гель не растворялся при охлаждении до температуры -10°C, при которой он растворялся ранее. Исходя из этого можно сказать, что образуются стабильнее гели, не разрушающиеся при нагревании и охлаждении. В связи с появлением в последние годы интереса к созданию биодергадируемых материалам на основе природных полисахаридов, КМЦ тоже не осталась в стороне. На ее основе создаются современные 13

гемостатические аппликационные средства , с выраженной гемостатической активностью [28]. В составе лекарственных препаратов производные КМЦ могут обеспечить направленный транспорт лекарств и пролонгированное действие. В травматологии и ортопедии перспективным направлением является создание наноструктурного покрытия, которое должно содержать антибактериальные компоненты с бактерицидным эффектом, тем самым обеспечивая восстановление после хирургических вмешательств. Так, авторами статьи [29] был получен гель на основе L-цистеина, нитрата серебра и КМЦ с хорошей совместимостью друг к другу. Благодаря бактерицидным свойствам серебра и антиоксидантным свойствам цистеина, возможно в дальнейшем удастся получать достаточно прочные, биоразлагаемые и биосовместимые пленки. А в статье [30] авторы работали над новыми перевязочными материалами, в основе которых также использовали природные биополимеры (белки, полисахариды и их производные), которые обладали бы хорошей биосовместимостью и обеспечивали надежную защиту от загрязнений открытых ран. В работе описан процесс получения губчатых пленочных покрытий медицинского назначения на основе коллагена и карбоксиметилцеллюлозы с включениями бактериостатиков на основе наночастиц серебра, хлоргексидина и глутаровогодиальдегида. Покрытие при нанесении на открытые раны способствует регенерации ткани, обладает поглотительной способностью влаги 46,0 г/г, высокой скоростью смачиваемости 42 с, антимикробной активностью по стафилококку 4 мм, с оптимальным сроком заживления раны 10 суток. Среди всего прочего КМЦ используют при получении наночастиц, например статья [31] посвящена разработки органоминерального композита на основе наночастиц гидроксиапатита кальция и КМЦ, в процессе их взаимодействия. В итоге был получен биоактивный органоминеральный 14

композит пористой структуры, который может быть перспективным для использования в имплантологии. 1.5 Аллантоин. Формула, значение в медицине. Аллантоин — продукт окислительного декарбоксилирования мочевой кислоты, представляющий собой белые кристаллы (рис.5). Это гетероциклическое соединение, содержащее заместитель мочевины в 4-м положении. Рисунок – 5. Химическая формула аллантоина Данное вещество является элементом метаболического процесса живых организмов [32]. Получают аллантоин из экстракта корня растения окопника лекарственного или, как в некоторых азиатских странах, выделяют из слизи улитки. Еще с давних времен известно, что это вещество обладает увлажняющими, успокаивающими, противовоспалительными и стимулирующими обновление и деление клеток свойствами [33]. В связи с этим является активным компонентом в средствах по уходу за кожей. Его способность к заживлению рубцовой ткани и защите кожи от солнечных ожогов и растрескивания делает их востребованными в косметологической и фармацевтической области. Использование его безопасно, что подтверждается наличием большого числа патентов, использующие данного вещество даже для детского применения [34-35]. 15

Аллантоин широко используется в производстве лекарственных средств. В качестве примера можно привести работу [36], где разрабатывается гель на основе таурина и аллантоина, изучается структурномеханические свойства геля. В статье [37] целью работы являлось разработка современного лекарственного средства - геля с тиоктовой кислотой и аллантоином местного действия, который мог бы помочь в решении проблемы лечения диабетических язв, возникающие в качестве осложнений сахарного диабета. 1.6 Диметилсульфоксид. Формула, значение в медицине. Диметилсульфоксид (ДМСО) впервые был получен в 1866 году А.М. Зайцевым, по реакции окисления диметилсульфида (CH3)2S с помощью азотной кислоты (рис.6). На данный момент используются другие окислители, например, пероксид водорода H2O2. Рисунок – 6. Химическая формула диметилсульфоксида (ДМСО) Сначала диметилсульфоксид не пользовался интересом у ученых, но в 1958 году была обнаружена уникальная способность ДМСО растворять многие неорганические и органические соединения, иногда превосходя воду. Уже через некоторое время соединение стало доступным для химиков, и появились обнадеживающие сообщения по использованию ДМСО в фармакологии и медицине. Благодаря улучшению проникновения наружных 16

лекарственных средств в ткани, ДМСО может позволить снизить терапевтическую дозу главного действующего вещества [38-39]. Диметилсульфоксид является малотоксичным веществом. Было установлено, что ДМСО обладает очень хорошей проницаемостью через биологические мембраны. При нанесении на кожу быстро проникает через кровеносные сосуды в организм. В литературе есть данные об эффективном применения ДМСО в качестве противоспалительного и антимикробного средства. Обнаружено, что он эффективен в качестве анальгетикапри лечении опорно-двигательной системы, радикулитах, остео артрита коленного сустава [40-41]. В исследовании [39] целью являлось оценка противоболевой и противовоспалительной активности гелей гимантана с составами, отличающимися наличием активатора всасывания ДМСО. Анальгетическую активность гелей оценивали в формалиновом тесте на крысах-самцах. В результате установлено, что гель гимантана, содержащий в качестве активатора всасывания ДМСО, снижает выраженность формалиновой боли и проявляет острой фазы противовоспалительное действие, сопоставимое с эффектом 1% геля диклофенака натрия. Также применение ДМСО возможно при лечении кардиологических заболеваний. В статье [42] изучались кардиопротективные свойства диметилсульфоксида (ДМСО) на модели изолированного сердца крысы Внутрибрюшинное введение животным ДМСО в течение 3 дней перед экспериментом в отличие от добавления ДМСО в перфузат (это любая жидкость, текущая через ткань или орган) способствует уменьшению размера инфаркта. При этом как внутрибрюшинное, так и внутрикоронарное введение ДМСО уменьшают выраженность постишемической дисфункции миокарда левого желудочка. Но существует и другая негативная сторона применения данного соединения. Обладая такой уникальной способностью проникать глубоко в 17

кожу, ДМСО может растворять и токсические вещества, давая возможность им проникать в организм. 1.7 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк)— это грамположительные неподвижные и не образующие спор анаэробные бактерии, которые имеют округлую форму золотисто-желтого цвета (рис.7). Этот основной вид бактериального патогена человека, вызывающий широкий спектр клинических проявлений, и распространен среди всего населения планеты [43-44]. Рисунок – 7. Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus способен поражать слизистые оболочки, паховую область и другие части кожного покрова, вызывая экземы, абсцесс, фурункулы, возможны поражения желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей [45-46]. В минимальных количествах является частью естественной кожной флоры человека, не вызывая инфекций на здоровой коже. Но при увеличении количества бактерий, они начинают проникать в 18

глубокие слои кожного покрова через микротрещины в кровоток [47], и это может привести к патологическим процессам, затрагивающие не только внутренние органы, такие как печень, почки, селезенка, головной мозг, но и мышцы, кости и суставы. Бактерии Staphylococcus aureus известны как возбудители болезней пищевого происхождения. Именно они являются главной причиной гастроэнтерита, возникающего в результате употребления зараженной пищи, при этом пищевое отравление происходит из-за абсорбции стафилококковых энтеротоксинов, предварительно образовавшихся в пище [48]. Но известно, что некоторые штаммы данного патогенного микроорганизма, обладают устойчивостью ко многим антимикробным препаратам, что является серьезной проблемой при лечении. В результате появляются все новые альтернативные подходы к профилактике и лечению стафилококковых инфекций. Например, один из них, использование специфических иммуннобиологических препаратов, повышающих резистентность организма к стафилококковой инфекции [43,49]. В работе [47] изучалась роль Staphylococcus aureus при атопическом дерматите у детей. В результате исследований было выявлено наличие микроорганизма на коже у 73% больных, а также определена зависимость тяжести поражения участков кожи и степенью колонизации микроорганизма. Данные факты могут быть объяснены либо нарушенной микроциркуляцией кожных покровов, которая приводит к ухудшению кровоснабжения участка и размножению микроорганизма, либо нарушением защиты иммунной системы организма. В обсуждениях работы предложено 2 подхода к лечению: использование пероральных наружных антисептических антибиотиков рекомендуется средств, только а по применение клиническим показаниям (лечение рецидивирующей пиодермии). 19

1.8 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) – грамотрицательные бактерии, один из самых опасных больничных патогенов, известных уже долгое время (рис.8). При этом пациенты могут быть уже больными или могут заразиться в самой больнице. Болезнь широко распространена среди госпитализированныхс онкологическими заболеваниями, ожоговыми ранами, муковисцидозом, острым лейкозом [50]. Рисунок – 8. Pseudomonas aeruginosa Другие инфекции, вызываемые видами Pseudomonas, включают эндокардит, пневмонию и инфекции мочевыводящих путей, центральной нервной системы, ран, глаз, ушей, кожи и опорно-двигательного аппарата [51]. Универсальность питания, большое количество факторов вирулентности и высокая устойчивость к антибиотикам делают эту бактерию чрезвычайно трудной для уничтожения у инфицированных людей [52]. В общей этиологической статистике внутрибольничных инфекций доля Pseudomonas aeruginosa занимает около 20-30% [53]. 20

Бактерии Pseudomonas aeruginosa распространены в окружающей среде повсеместно, чаще встречается в природных водах, таких как озера и реки. Причем обнаружить микроорганизм можно как с низким, так и высоким уровнем содержания для нее питательных веществ [54]. Pseudomonas aeruginosa передвигается с помощью одного жгутика [51]. Наличие несколько «прилипание» к пилей клеточной клеточным мембранам поверхности, и другим обеспечивают поверхностям микроорганизма [55]. Pseudomonas aeruginosa обладает устойчивостью к целому ряду противомикробных препаратов, в результате лечение инфекций затруднено или даже считает крайне опасным. В литературе это явление объясняется как приобретенный механизм защиты, возникший в процессе мутационных изменений этого микроорганизма, что позволяет бактериям адаптироваться к внешним воздействиям окружающей среды в короткие сроки[56-57]. Основываясь на многие исследования, все антимикробные препараты для лечения заболеваний, вызванные синегнойной палочкой, можно разделить на 3 группы: 1) антибиотики, к которым нечувствительны практически все штаммы вида Pseudomonas aeruginosa; 2) антибиотики, подавляющие метаболизм штаммов, которые не обладают приобретенными механизмами устойчивости к какому-либо антибиотику. 3) антибиотики, которые теоретически могут подавлять жизнедеятельность бактерии, но существующие методики не позволяют определить лабораторные критерии чувствительности для конкретного штамма. В итоге использование таких антибиотиков не рационально. В итоге основная терапия заключается в использовании антимикробных препаратов второй группы. Но сложность снова заключается в способности микробов нейтрализации антибиотиков, задействуя всё новые и новые приемы, иногда и сочетая их, так как возможно проявление 21

нескольких механизмов устойчивости одновременно. В таких случаях перед терапией необходимо изучить молекулярные механизмы устойчивости к антибиотикам[53]. 1.9Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae – это грамотрицательные инкапсулированные неподвижные палочкообразные бактерии семейства Enterobacteriaceae, обитающие в окружающей среде: в почве, наземных водах, в медицинских учреждениях (рис.9). Этот известный нозокомиальный патоген человека вызывает широкий спектр инфекций, включая пневмонию или инфекции мочевыводящих путей. Известны случаи регистрации инвазивного синдрома, вызывающий абсцессы печени [58-61]. Рисунок – 9. Klebsiella pneumoniae Изначально данный микроорганизм вызывал опасность у населения с ослабленным иммунитетом, но cпоявлениеvдополнительных генетических признаков, они стали гипервирулентными и приобрели устойчивость к антибиотикам, тем самым увеличило число больных, среди лиц, обладающих 22

хорошим иммунитетом. Именно такая особенность сделала его важным патогеном, способным внутрибольничные вызывать инфекции [59, внебольничные 61]. и все Определяющим чаще признаком гипервирулентного типа является появление гипермукоида на чашках с агаром, поэтому в источниках его упоминают как гипермуковязкозный или гипермукоидный тип [62]. В научной литературе большое значение придают потенциальным источникам штаммов, клинические особенности инфекции, молекулярные основы его клинической идентификации и вирулентность, а также конвергенцию устойчивых к антибиотикам и гипервирулентных штаммов [62]. В процессе исследования были выявлены факторы вирулентности K. Pneumoniae, что позволило получить больше информации о факторах роста данного патогена в различных участках тканей. Многие из этих генов кодируют белки, которые участвуют в метаболизме и регуляции транскрипции. Но даже на данный момент нет точно описанных различий между инфекциями у здоровых пациентов и пациентов с ослабленным иммунитетом и определения бактериальных мишеней или мишеней-хозяев для лечения этих инфекций [59]. В работе [63] изучались факторы риска Klebsiella pneumoniae продуцирования K. pneumoniae и их влияние на смертельный исход больного. В результате профилактики была и подчеркнута инфекционного острая необходимость контроля в борьбе разработки с данным микроорганизмом, так как он обладает значительной смертностью. В работе [64] проанализировали и обобщили известную литературу на тему клинических исходов после инфекций Klebsiella pneumoniae. В обзоре говорится, что тигециклин и аминогликозидыв большинстве случает имеют положительный результат. Полимиксины показатели низкие проценты успеха в качестве монопрепарата, но намного выше при комбинации с 23

другими препаратами. Для определения оптимального лечения инфекций, необходимы исследования, изучающие комбинированную терапию. Симптомами могут являться лихорадка, озноб, боль в животе, тошнота и рвота, или же локализованные метастатической инфекции (глаза, легкие, центральная нервная система). Рисунок – 10. Распространенные места первичных и метастатических инфекций, вызванных гипервирулентной инфекции K. pneumoniae Все источники окружающей среды могут потенциально являться зараженными. Это вода и поверхности, загрязненные почвой, растительностью или фекалиями. Приобретенный в больнице K. pneumoniae может передаваться от пациента пациенту или же также от загрязненной поверхности. Бактерия может являться и часть собственного микробиома кишечника. Известны случаи, когда инфекций K. pneumoniae в отделении интенсивной терапии были вызваны собственным желудочно-кишечным штаммом пациента[64]. В результатах исследований были 24

идентифицированы гены гипервирулентной K. pneumoniae, необходимые для распространения и колонизации в желудочно-кишечном тракте, что означает, что она может использовать определенные детерминанты вирулентности для доступа к печени [62]. 25

Раздел 2. Экспериментальная часть 2.1 Характеристика научно-исследовательской базы Все проводимые работы проводились в научных лабораториях Саратовского Вавилова» государственного на факультете аграрного «Ветеринарной университета медицины, имени Н.И. пищевых и биотехнологий». Все необходимое оборудование работало исправно, без нарушений техники безопасности. Лаборатория была оснащена всеми необходимыми реактивами и химической посудой. При работе соблюдались все нормы и стандарты федеральных законов в сфере экологии. Перед началом исследования были повторены все необходимые документы относительно соблюдения техники безопасности при работе с щелочами, кислотами, микроорганизмами, электроприборами разработанных на основании государственных нормативных требований охраны труда. Данные требования учитывают вредные и опасные условия труда, исключают вероятность получения профзаболеваний и травм, обеспечивают безопасную деятельность на рабочем месте при условии выполнения каждым работником стандартов и нормативной документации: ГОСТ ССБТ (государственный стандарт системы стандартов безопасности труда); СанПиН (санитарные правила и нормы); ПОТ (правила охраны труда); НПБ (нормы пожарной безопасности); ПБ (правила безопасности) и т.п. Вещества, которые использовались в ходе работы, хранились в закрытых сосудах, без попадания посторонней влаги и не нужной микрофлоры. Поступление воды в лаборатории обеспечивалось с помощью общей городской водопроводной сети, при этом вся необходимая посуда дополнительно обрабатывалась дистиллированной водой, приготовленной 26

заранее на кафедре. Все необходимые растворы также готовились с использованием дистиллированной воды. Лаборатория была оснащена аптечкой для оказания первой медицинской помощи, первичные средства пожаротушения: огнетушители, ящик с песком, автоматические извещатели системы пожарной сигнализации Перед началом работы индивидуальной защиты у для сотрудника должны предотвращения иметься заражения и средства прямого попадания вредных веществ на кожу: халат, резиновые перчатки, чепчик, сменная обувь или бахилы, необходимо соблюдать правила личной гигиены: тщательно мыть руки с мылом, запрещено принимать пищу, курить, вносить посторонние вещи (верхнюю одежду, обувь). После завершения работы следует убрать свое рабочее место, убрать на свои места использованные вещества, вкинуть мусор и проветрить помещение. Перед выходом надо снять средства индивидуальной защиты, тщательно помыть руки с мылом и выключить электроприборы из сети. Во всех химических лабораториях вентиляция должна полностью обеспечивать сохранение гигиенических условий работы при наибольшей нагрузке производственного помещения. 2.2 Оборудование Для проведения научной работы были использованы:  магнитная мешалка,  стеклянные палочки, 27

Рисунок – 11. Стеклянные палочки  термометр,  водяная баня, Рисунок – 12. Водяная баня  пипет дозатор, 28

Рисунок – 13. Пипет дозатор  пенициллиновые флаконы, Рисунок – 14. Пенициллиновые флаконы  термошкаф, 29

Рисунок – 15.Термошкаф  бактериологический бокс,  чашки Петри, Рисунок – 16. Чашки Петри  лабораторные электронные весы, 30

Рисунок – 17. Лабораторные весы  холодильник,  рН метр. 2.3 Используемые вещества  Экстракт алоэ Aloe arborescens  Карбоксиметилцеллюлоза  Аллантоин  Диметилсульфоксид  Дистиллированная вода  Гидрооксид натрия 2.4 Используемые культуры микроорганизмов  Staphylococcus aureus АТСС-6538 (209-Р),  Pseudomonas aeruginosa АТСС-9027,  Klebsiella pneumonia К25. 31

2.5 Объекты исследования Объектами исследования являлись: 1) Коллоидные системы состава Алоэ : КМЦ : Вода в процентном соотношении 99-0 : 1 : 0-99. 2) Гелевые системы состава Алоэ : КМЦ : Аллантоин / ДМСО в процентном соотношении 76,9-86,9 : 3,4-3,8 : 9,7-19,2. Для получения композиций использовали экстракт алоэ, полученный на кафедре «Микробиология, биотехнология и химия» из выжимки растения, карбоксиметилцеллюллоза типа 4000 с молекулярноймассой450000в качестве структурообразователя, раствор алантоин \ ДМСО в соотношении 1 : 10 в качестве функциональной добавки. Коллоидные системы составаАлоэ : КМЦ : Вода получали добавлением 1% КМЦ к жидкой фазе и нагреванием до 50°Спри перемешивании до полного исчезновения комочков вещества в растворе. Для приготовления функциональной добавки в системы1г аллантоина растворили в 10г демитилсульфоксида. После чего при перемешивании добавляли в полученный гель в выбранном процентном соотношении. На начальном этапе было необходимо получить гель, удовлетворяющий нашим визуальным требованиям, именно для этого был сделан контрольный образец №1К, на основе КМЦ : Вода. Было составлено множество рецептур, характеризующие различные соотношения компонентов для получения требующего результата. Некоторые из составов представлены в таблице 1. Табл.1. Соотношения исходных компонентов Номер образца Соотношение компонентов, % Экстракт алоэ Дистиллированная вода КМЦ №1К 0 99 1 2 99 - 1 32

3 80 19 1 4 50 49 1 5 20 79 1 Для оценки гелеобразования использовали свежеприготовленные и хранившиеся при комнатной температуре композиции. Далее из полученных гелей были выбраны полностью удовлетворяющие нашим требованиям образцы и изучена их антимикробная активность. Для этого мы выбрали 3 культуры Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Klebsiell apneumoniae. В качестве питательной среды для роста микроорганизмов готовили мясо-пектонныйагар, по рецептуре, предлагающей производителем. В 100мл дистиллированной воды растворяли 5г питательной среде, после чего нагревали.Как только раствор начинал закипать, среду снимали с плиты и остужали при комнатной температуре. Питательная среда должна обеспечивать не только оптимальные условия для роста микробной взвеси, но и достаточную скорость диффузии исследуемого геля [66]. Разведение делали в следующем порядке: в пробирку помещали 1г навески испытуемого образца, добавляли 9мл физиологического раствора, механически перемешивая, добивались полного растворения геля. Далее из полученного разведения отбирали 1мл и уже его растворяли в 9мл физиологическом растворе и т.д. Таким образом, было получено разведение в концентрациях 10-1,10-2, 10-3, 10-4, 10-5. Для обеспечения чистоты эксперимента и среда, и полученные образцы прошли через стадию автоклавирования. После чего была пророщена культура микроорганизмов на питательной среде. 33

2.6 Методы исследования Для оценки образования геля использовали свежеприготовленные и хранившиеся при комнатной температуре композиции. Измерение рН проводили с помощью рН-метра и лакмусовых бумажек для проверки результатов. Термостабильность изучали по ГОСТу [67]. Гель нагревали в хорошо закрытой пробирке в термостате при 37±1ºC в течение суток (24 часа). После чего наблюдали за системой. При лучшем результате не должно быть расслоений (отсутствие коагуляции, уплотнения, помутнения, разжижения). При замораживании навески геля в пробирке до – 20ºC и последующем постепенном оттаивании при комнатной температуре также не должно быть расслоений. Определение антимикробной активности полученных гелей проводили методом диффузии из лунок агара согласно требованиям ГФ ХII изд., вып. 1[68]. В качестве испытуемых микроорганизмов использовали Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Klebsiella pneumoniae. Суть метода состоит в том, что расплавленную и охлаждённую 48-50°C питательную среду с микробной взвесью разливают в чашки Петри, создавая оптимальную толщину слоя. После застывания в асептических условиях делают отверстия диаметром от 6 до 8 мм с помощью стерильного сверла или наконечника. При работе с чашками Петри необходимо соблюдать несколько правил: - чашки Петри устанавливаются строго на горизонтальную поверхность; - чашки Петри должны быть одного размера; - объем питательной среды в каждой чашке должен быть одинаковым - лунки или цилиндрики (стерильные) устанавливаются на поверхность остывшего агара, строго вертикально, на равном расстоянии от центра и края чашки, от центра примерно 2,8 см для чашек диаметром 100 мм, зоны должны быть круглые для равномерной диффузии по всему диаметру. 34

Затем в лунки вносятся равный объем готовых исследуемых образцов (не более 100 мкл) и контроля (в нашем случае в качестве контроля взят физиологический раствор) как показано на рисунке 18. Противомикробный агент диффундирует в питательную среду и подавляет рост микробного штамма. Рисунок – 18. Схема положения лунок. -1,-2,-3,-4,-5 – степень разбавления геля; К+ - контрольная лунка с физиологическим раствором. Засеянные чашки инкубировали 24 часа в термостате при 37°C, после чего через центр лунок с помощью миллиметровой бумаги с точностью до 0,1 мм измеряли диаметры зон задержки роста тест-культуры [68-69]. 35

Раздел 3. Результаты и их обсуждение 3.1 Контрольный образец После получения контрольного образца №1К, содержащий в своем составе только дистиллированную воду и КМЦ, мы оценили, что после 24 часов хранения гелевая структура не нарушается, остается прозрачной, без выделяющихся осадков. Это можно увидеть на рисунке 19. Что подтвердило нам, возможность использовать данного геля как контроль в сравнении в дальнейших исследованиях. Рисунок – 19. Контрольный образец №1К 36

3.2 Сравнение полученных образцов с контрольным После получения первоначальных образцов, составы которых указанных в таблице 1, и сравнение их с контрольным образцом было выяснено, что существует дополнительный фактор, отрицательно влияющий на процесс гелеобразования. Именно композиции, имеющие в своем составе экстракт алоэ, не образовывали гелеобразные структуры, это можно увидеть на рисунке 20. Данные системы были полностью подвижны к изменениям угла поворота флакона, что говорит о сохранении жидкого агрегатного состояния и отсутствии гелеобразования в системах. Рисунок – 20. Полученные образцы гелей на первом этапе работы. 37

В итоге полученные нами результаты можно представить в таблице 2. Табл.2. Состав полученных систем и результат гелеобразования Номер образца Соотношение компонентов, % Экстракт Дистиллированная КМЦ алоэ вода Результат №1К 0 99 1 Образования плотного геля 2 99 - 1 Гель не образовался 3 80 19 1 Гель не образовался 4 50 49 1 Гель не образовался 5 20 79 1 Гель не образовался 3.3 Влияние рН среды на процесс гелеобразования Было предположено, что происходит химическая реакция между многочисленными компонентами экстракта, водой и КМЦ, что ведет к изменению рН среды. Для изучения этого фактора было сделано образцы идентичного состава, но с различным рН. Регулирование производили добавлением гидроксида натрия до выбранного нами значения, контроль производили рН-метром. Полученные данные представлены в таблице 3. Табл.3. Сравнение образцов с разным рН Соотношение компонентов, %об Номер образца Экстракт Дистиллированная КМЦ алоэ вода рН 2 99 - 1 6-7 2º 99 - 1 9-10 Результат Гель не образовался Гель не образовался 38

Было выяснено, что в данном случае на процесс гелеобразования, никак не оказывает влияние рН среды. При этом при увеличении рН цвет системы темнеет (рис.21), что говорит нам о том, что данное значение нам не подходит и проблема гелеобразования нашего геля не в этом. Рисунок – 21. Полученные образцы гелей. Слева-образец с рН=9-10, справа-образец с рН=6-7. 3.4 Влияние концентрации КМЦ на процесс гелеобразования Дальнейшим этапом было увеличение массы КМЦ в потенциальном геле. За основной состав мы приняли №2, содержащий почти 100% сока алоэ. Шаг увеличения концентрации КМЦ составлял 0,5%. В результате было выяснено, что при приближении концентрация к4% образуется плотный гель. Состав представлен в таблице 4. Табл.4. Состав потенциального геля Номер образца 6 Соотношение компонентов, %об Экстракт Дистиллированная КМЦ алоэ вода 96 - 4 рН 6-7 Таким образом, нами был получен образец геля №6 на основе экстракта алоэ, удовлетворяющий нашим требованиям, визуально основываясь на контрольный образец №1К. 39

3.5 Введение активных добавок в состав геля Для достижения необходимого лечебного действия было решено ввести в состав ДМСО и аллантоин, что должно было привести к увеличению проникания ранозаживляющего и антисептического веществ, тем самым улучшая действие нашего геля. Для начала растворили 1г аллантоина в 10г ДМСО. Далее процесс разделили на 2 способа: 1) добавления раствора в готовый гель 2) добавление в процессе гелеобразования Полученные составы представлены в таблице 5. Табл.5. Соотношения компонентов геля и активных добавок Номер образца Соотношение компонентов, % Экстракт Раствор аллантоина КМЦ алоэ в ДМСО Результат 7 86,9 3,4 9,7 Образования геля 8 86,5 3,8 9,6 Образования геля 9 77,5 3,1 19,4 Образования геля 10 76,9 3,8 19,2 Образования геля В результате экспериментов во всех образцах образовался гель, плотность которого с увеличением содержания КМЦ увеличивается, что и следовало ожидать. В зависимости, на какой стадии добавляется активные вещества, изменяется консистенцию, тем самым мы можем контролировать и регулировать именно ту плотность, которая нам необходима. Для дальнейшего изучения антимикробной активности были выбраны образцы № 6, № 7,№ 8, № 9, № 10. 40

3.6 Изучение термостабильности В результате нагревания полученных нами образцов при 37±1ºC в течение суток не наблюдалось никаких видимых изменений в структуре исследуемых гелей. При заморозке геля в морозилке до – 20ºC с последующим постепенным оттаиванием при комнатной температуре, также не было обнаружено критических нарушений гелевой структуры. Что говорит нам о том, что все наши образцы обладают термостабильностью, и можно приступать к изучению антимикробной активности на выбранных нами культурах микроорганизмов. 3.7 Изучение антимикробной активности Для удобства обозначений исследуемым образцам было присвоено новые порядковые номера (табл.6). Табл.6. Порядковые номера и состав исследуемых композиций Соотношение компонентов, % Номер образца Экстракт алоэ КМЦ Раствор аллантоина в ДМСО 1 99 1 - 2 86,5 3,8 9,6 3 86,9 3,4 9,7 4 76,9 3,8 19,2 5 77,5 3,1 19,4 В процессе проверки антимикробной активности исследуемых гелей были получены следующие результаты. На первом этапе использовалась культура Staphylococcus aureus АТСС-6538 (209-Р). В концентрации1,5·108 КОЕ/мл, контролируемая методом измерения оптической плотности, именно при данной концентрации плотностью бактериальной суспензии при 41

визуальном контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. После выдерживания в инкубаторе 24 часов засеянные чашки доставались и оценивались зоны задержки роста культуры. В результате было выяснено, что зоны задержки тест-культуры лунок, содержащие в своем объеме исследуемые гели полностью идентичны лунке контрольного образца, содержащий в своем объеме только физиологический раствор (рис. 22). Установлено, что гели не проявляют антимикробной активности в отношении данной культуры. а) б) 42

в) г) 43

д) Рисунок – 22. Полученные результаты антимикробной активности в отношении культуры Staphylococcus aureus АТСС-6538 (209-Р). а –образец №1, б – образец №2, в – образец №3, г – образец №4, д – образец №5 Вторым этапом являлось проверка антимикробной активности гелей в отношении культуры Pseudomonas aeruginosa АТСС-9027.В концентрации 1,5·108 КОЕ/мл, контролируемая методом измерения оптической плотности. В результате также, как и на предыдущем этапе зоны задержки тесткультуры лунок, содержащие в своем объеме исследуемые гели полностью идентичны лунке контрольного образца (рис.23). а) 44

б) в) 45

г) д) Рисунок – 23. Полученные результаты антимикробной активности в отношении культуры Pseudomonas aeruginosa АТСС-9027. а –образец №1, б – образец №2, в – образец №3, г – образец №4, д – образец №5 Третьим этапом являлось определение антимикробной активности гелей в отношении культуры Klebsiella pneumoniae К25.В результате было установлено, что гели №1, №2, №3 обладают антимикробной активностью в разбавлении 10-1, что отражается в задержке зоны роста тест-культуры в лунках, относительно контрольного образца (рис.24). 46

Гель №4 не проявляет антимикробной активности в отношении Klebsiella pneumoniae. Гель №5 проявляет антимикробную активность относительно Klebsiella pneumoniae в двух разбавлениях, а именно в 10-1 и 10-2. а) б) 47

в) г) 48

д) Рисунок – 24. Полученные результаты антимикробной активности в отношении культуры Klebsiella pneumoniae К25. а – образец №1, б – образец №2, в – образец №3, г – образец №4, д – образец №5 Таким образом, установлено, что у всех образцов гелей полностью отсутствует антимикробная активность в отношении Staphylococcus aureus АТСС-6538 (209-Р)и Pseudomonas aeruginosaАТСС-9027. Однако, также было показано, что гели №1, №2, №3 обладают антимикробной активностью в отношении культуры Klebsiella pneumoniae К25в концентрации 10-1, образец №4 не показал антимикробную активность, а образец №5 обладает антимикробной активностью в 10-1 и 10-2. 49

Раздел 4. Заключение Перспективное направление использования растительного сырья при создании лекарственных препаратов имеет место быть. Биологически активные вещества, содержащиеся в природных компонентах, могут обеспечить необходимые терапевтические действия при лечении различных заболеваний, от простых аллергических реакций до сложных после хирургических вмешательств. Также важной проблемой при лечении является способность микроорганизмов приобретать устойчивость к антибиотикам, и она может быть решена с помощью использования в составе растительных компонентов. Гели являются наиболее удобным лекарственным средством для местного применения, обеспечивая легкое нанесение, хорошее проникновения действующего вещества и его пролонгированное действие. 50

Выводы 1) В ходе работы получены гели на основе растительного природного компонента – экстракта алоэ, что является перспективным направлением в современной фармацевтической отрасли. 2) Нами было обнаружено, что при малых концентрациях КМЦ не образуется гелевая структура, возможно, существует дополнительных фактор, приводящий к химической деструкции полимера, тем самым уменьшая его гелеобразующие свойства. 3) На процесс гелеобразования рН среды не оказывает однозначного действия, но возможно окисляет продукт, что говорит нам изменение цвета на более темный оттенок. 4) При увеличении концентрации КМЦ до 4% в системах увеличивается гелеобразующие свойства. 5) Все полученные нами образцы антимикробной активности в отношении гелей показали отсутствие Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. Но в отношении культуры Klebsiella pneumoniae К25 образцы №1, №2, №3 показали антимикробную активность в концентрации 10-1, образец №5 в концентрации 10 -1 и 10-2, а образец №4 показал отсутствие антимикробной активности. 51

Список использованных литературных источников 1 – Сёмкина, О.А. Мази, гели, линименты и кремы, содержащие фитопрепараты (обзор) / О.А. Сёмкина // Методы синтеза и технология производства лекарственных средств. Химико-фармацевтическийжурнал. – 2005. – Т.39. – №7. – С. 30-36. 2 – Comparative nephroprotective efficiency of polyfunctional mucousadhesive phytogels / A.I. Gozhenko , A.P. Levitsky , V. T. Stepan , I. A. Selivanskaya , I.P. Pustovoit // Journal of Education, Health and Sport. – 2021. – Vol. 11. – No.1. – С. 24-32. 3 – Володина, Т.А. Разработка состава, технологии и норм качества фитогеля репаративного действия / диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. ОМСК – 2014. 4 – Бикбов, М. М., Сигаева, Н. Н., Вильданова, Р. Р. Полимерные гели и их применение в офтальмологии / М.М. Бикбов, Н.Н. Сигаева, Р.Р. Вильданова // Практическая медицина. – 2017. – Т. 2. – С. 38-41. 5 – Роговина, Л.З., Васильев, В.Г. Многообразие полимерных гелей и основные факторы, определяющие свойства самих гелей и получаемых из них твердых полимеров / Л.З. Роговина, В.Г. Васильев // Высокомолекулярные соединения. Серии А и Б. – 2010. – Т. 52. – №11. – C. 1975-1987. 6 – Роговина, Л.З., Васильев, В.Г., Браудо, Е.Е. К определению понятия «полимерный гель» / Л.З. Роговина, В.Г. Васильев, Е.Е. Браудо // Высокомолекулярные соединения. Серии А, Б и С. – 2008. – Т. 50. – №7. – С. 1397-1406. 7 – Гели на основе супрамолекулярных полимеров / А.М. Супрун, С.Д. Хижняк, П.В. Комаров, П.М. Пахомов // ВестникТвГУ. Серия «Химия». – 2012. – № 12. – С.190-205 52

8 – Морозова, Р.Ф., Спатлова, Л.В.Изучение структурной вязкости геля на примере лекарственного препарата "Гепарин" / Р.Ф.Морозова, Л.В. Спатлова // Инновационная наука. – 2018. – № 5. – С. 38-41. 9 – Тиунова, Н.В., Васильев, Ю.Л. Опыт применения препаратов на основе коллагена в комплексном лечении красного плоского лишая слизистой оболочки рта / Н.В. Тиунова, Ю.Л. Васильев // Медицинский алфавит. – 2018. –Т. 2.–№ 8.–С. 21-24. 10 – Нейзберг, пленкообразующий Д.М., Акулович, биодеградируемый А.В., гель с Матело, С.К.Новый антимикробными и разнозаживляющими свойствами для полости рта / Д.М. Нейзберг, А.В.Акулович, С.К. Матело // Пародонтология. – 2017. –Т. 22.–№ 4.–С. 64-67. 11 – Филиппова, О.Е. «Умные» полимерные гидрогели / О.Е.Филиппова // Природа. – 2005. – №8. – С. 11-17. 12 – Гидрогели на основе гиалуроновой кислоты и хитозана в качестве носителя луцентиса при антиглаукомных операциях / М.М. Бикбов, И.И. Хуснитдинов, Р.Р., Вильданова, С.С. Остахов и др. // Практическая медицина. – 2017. – Т.1. – С.135-138. 13 – Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: учебное пособие по фармакогнозии для студентов фармацевтических вузов, обучающихся по специальности "Фармация" / ред.: Г. П. Яковлев, К. Ф. Блинова. – СПб.: СпецЛит, 2004. – 765 с. 14 – Олейников, Д.Н., Зилфикаров, И.Н., Ибрагимов, Т.А. Исследование химического состава алоэ древовидного (AloearborescensMill.) / Д.Н. Олейников, И.Н. Зилфикаров, Т.А. Ибрагимов // Химия растительного сырья. – 2010. – №3. – С. 77-82. 15 – Глущенко, С.Н., Шмыгарева, А.А., Саньков, А.Н. Разработка суппозиториев на основе сока алоэ древовидного / С.Н. Глущенко, А.А. Шмыгарева, А.Н.Саньков // Аспирантский вестник Поволжья. – 2020. – № 1-2. – С. 126-130. 53

16 – Нуралиева, Ш.Т., Азизов, У.М. Разработка технологии геля на основе сока алоэ / Ш.Т. Нуралиева, У.М. Азизов // Фармацевтический вестник Узбекистана. – 2015. – №3. – С.21-25. 17 – Глущенко, С.Н., Шмыгарева, А.А., Саньков, А.Н. Морфологоанатомическое исследованиелиста алоэ-вера / С.Н. Глущенко, А.А. Шмыгарева, А.Н.Саньков // Вестник ВГУ, Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2018. – № 3. – С. 205-210. 18 – Разработка технологии получения эмульсионного крема на основе алоэ и изучение ее биофармацевтических свойств / С.Д.Мехралиева, М.Н.Велиева, У.Э.Магеррамлы, Э.А.Кулиева и другие // Биомедицина (Баку). – 2018. – № 3. – С. 29-33. 19 – Глущенко,С.Н. Сравнительное исследование методик стандартизации сырья алоэ в фармакопеях зарубежных стран и фармакопеи России / С.Н. Глущенко // Современные проблемы фармакогнозии. Сборник материалов III международным Межвузовской участием, научно-практической посвященной конференции 100-летию с Самарского государственного медицинского университета. –2018.–С. 68-72. 20 – Химический состав сока алоэ древовидного / Д.Н. Олейников, И.Н. Зилфикаров, Т.А. Ибрагимов, А.А. Торопова, Л.М. Танхаева // Химия растительного сырья. – 2010. – №3. – С. 83-90. 21 – Рюшина, В.А., Габрук, Н.Г., Шутеева Т.А. Идентификация биологически активных компонентов Aloe arborescens Miller / В.А. Рюшина, Н.Г. Габрук, Т.А. Шутеева // Научные ведомости. Серия Естественные науки. – 2010. – Т. 10. – №3. – С. 93-96. 22 – Биологически активные вещества растительного происхождения: в 3 т. / Б.Н. Головкин, Р.Н.Руденская, И.А. Трофимова, и другие. – М.: Наука, 2002. 23 – Муравьева, Е.Д.Современное состояние изученности биостимулирующих свойств растений рода Aloe / Е.Д.Муравьева // Научный потенциал молодежи – будущему Беларуси : материалы XIII международной 54

молодежной научно-практической конференции, Пинск, 5 апреля 2019 г. : в 3-х ч.– Пинск: ПолесГУ, 2019. – Ч. 3. – С. 74-76. 24 – Шачнева, Е.Ю. Молекулярная структура системы вода — карбоксиметилцеллюлоза по данным вискозиметрии / Е.Ю. Шачнева // Образовательный вестник «Сознание». – 2016. – Т. 18– № 12. – С. 50-53. 25 – ГН 2.1.5.689-98. Предельно допустимые концентрации (ПДК) химических веществ в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования.–М.: Минздрав России, 1998. - 73 с. 26 – Козлов, Н.А., Митрофанов, А.Д. Физика полимеров: Учеб. пособие / Н.А. Козлов, А.Д. Митрофанов. – Владимир: ВлГУ, 2001. – 345 с. 27 – Cai, J., Zhang, L. Unique Gelation Behavior of Cellulose in NaOH / Urea Aqueous Solution / J. Cai, L. Zhang // Biomacromolecules. – 2006. – Vol. 7. – No.1. – С. 183-189. 28 – Гемостатическая активность новых аппликационных средств на основе карбоксиметилцеллюлозы / А.И. Бежин, А.Н. Майстренко, В.А. Липатов, Г.М. Чижиков, В. А. Жуковский // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. 18. – № 3. – С. 152-154. 29 – Влияние карбоксиметилцелюлозы на процесс самоорганизации в цистеин-серебряном растворе / Д.Ю. Новоженин, А.Н. Адамян, С.Д. Прокофьева, С.Д. Хижняк, П.М. Пахомов // Вестник Тверского государственного университета. Серия «Химия». – 2021. – Т. 43. – № 1. – С. 80-86. 30 – Наномикрокомпозиционные раневые покрытия на основе коллагена и карбоксиметилцеллюлозы / A.Н. Иванкин, B.И. Панферов, Х.А. Фахретдинов и др. // Лесной вестник. – 2015.– №1. – С. 41-45. 31 – Наноразмерныйбиокомпозит гидроксиапатит кальция / карбоксиметилцеллюлоза / Н.А. Захаров, Ж.А. Ежова, Е.М. Коваль, B.Т. Калинников, А.Е. Чалых // Неорганические материалы. – 2005. –Т. 41. – № 5. – С. 592-599. 55

32 – Шестопалов, А.В., Саллум, А., Крыжаковская, И.О. Содержание аллантоина в плаценте и его роль в регуляции апоптоза / А.В. Шестопалов, А. Саллум, И.О. Крыжановская // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. – 2014. – № 3 –C. 69-73. 33 – Аллантоин – биологические свойства и функции / А.В. Шестопалов, Т.П. Шкурат, З.И. Микашинович, А.В. Крыжановская // Успехи современной биологии. – 2006. – Т. 126. – № 6. – С. 111-116. 34 – Патент РФ № 2017142985, 08.12.2017. Композиция для мытья и умывания младенцев // Патент России № RU 2657805 C1. 2018. Бюл. № 17. / Пантелеев Е. А., Саморукова А.В., Чечерникова Л. В., Борисенко Е. А. и др. 35 – Патент РФ № 2018145577, 21.12.2018. Туалетное мыло для мытья младенцев // Патент России RU 2732294 C2. 2020. Бюл. № 26. / Пантелеев Е. А., Каратаева Н. Н., Матросова О. А., Романычева О. В. и др. 36 – Исследование структурно-механических свойств модельных составов гелей с таурином и аллантоином / С. И. Провоторова, А. И. Сливкин, Ф. С. Бугаёв, М. А. Веретенникова и др. // Вестник ВГУ, Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2017. – № 2. – С. 136-139. 37 – Коваленко, С.М., Баранова, И.И. Разработка состава геля с тиоктовой кислотой и аллантоином для лечения дибетических язв / С.М. Коваленко, И.И. Баранова // Весник. – 2014. – № 1. – С. 81-86. 38 – Кукушкин, Ю.Н. Диметилсульфоксид – важнейший апротонный растворитель / Ю.Н. Кукушкин // Соросовский образовательный журнал. Химия. – 1997. – № 9. – С. 54-59. 39 – Влияние диметилсульфоксида на выраженность противовоспалительного и анальгетического действия гелей гимантана / А.И. Матюшкин, Е.А. Иванова, Т.А. Воронина, Е.В. Блынская и др. // Фармация. – 2019. – Т. 68. – № 6. – С. 37-41. 40 – Efficacy and safety of topical diclofenac containing dimethyl sulfoxide (DMSO) compared with those of topical placebo, DMSO vehicle and oral 56

diclofenac for knee osteoarthritis / L.S. Simon, L.M. Grierson, Z. Naseer, A. A. Bookman, Zev Shainhouse J. // Pain. – 2009. – Vol 143. – № 3. – С. 238–245. 41 – Диметилсульфоксид - вещество с плейотропными эффектами, актуальными при заболеваниях опорно-двигательного аппарата / Д.Ю. Ивкин, С.В. Оковитый, А.С. Ивкина, Н.А. Анисимова // Лечащий врач. – 2019. – № 4. – С. 19-23. 42 – Исследование кардиопротективных свойств диметилсульфоксида при глобальной ишемии--реперфузии изолированного сердца крысы / Ю.В. Дмитриев, С.М. Минасян, Е.А. Демченко, М.М. Галагудза // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2012. –Т. 154 . – № 7. – С. 55-58. 43 – Lowy F.D. Инфекции золотистого стафилококка / F.D. Lowy // N. Engl. J. Med. – 1998. – Vol. 339. – №8. – С. 520-532. 44 – Пономаренко, С. В. Микробиологические аспекты стафилококковой инфекции на современном этап (обзор литературы) / С.В. Пономаренко // AnnalsofMechnikovInstitute. – 2013. – №3. – С. 13-17. 45 – Стукова, Е.И., Кениксфест, Ю.В. Патогенетическое значение золотистого стафилококка при атопическом дерматите / Е.И. Стукова, Ю.В. Кениксфест // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 7. – С. 680-687. 46 – Акатов, А. К., Зуева, В. С. Стафилококки / А.К. Акатов, В.С. Зуева // – М.: Медицина. – 1983. – 255с. 47 – Тюрин, А.Ю., Долбин, Д.А. Роль факторов патогенности золотистых стафилококков в развитии атопического дерматита / А.Ю. Тюрин, Д.А. Долбин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 4. – С. 105-110. 48 – Loir, Y.L., Baron, F., Gautier, M. [i]Staphylococcus aureus[/i] and food poisoning / Y. L. Loir, F. Baron, M. Gautier // Genetics and molecular research : GMR, Ribeirão Preto foundation for Scientific Research (FUNPEC). – 2003. – Vol. 2. – № 1. – С. 63-76. 57

49 – Дмитренко, О.А. Токсины золотистого стафилококка и их токсоиды: роль в патогенезе и профилактике стафилококковой инфекции / О.А. Дмитренко / Молекулярная медицина. – 2016. –Т. 14. – № 4. – С. 10-19. 50 – Infections Caused by Pseudomonas aeruginosa / G. P. Bodey, R. Bolivar, V. Fainstein, L. Jadeja // Reviews of Infectious Diseases. –1983. – Vol. 5. – № 2. – С. 279-313. 51 – Iglewski, B. H. Pseudomonas / B. H. Iglewski // Medical Microbiology. 4th edition. – Galveston: The University of Texas Medical Branch at Galveston, 1996.Chapter 27. 52 – Pseudomonas aeruginosa / W. Wu, Y. Jin, F. Bai, S. Jin // Molecular Medical Microbiology (Second Edition). – 2015.– Vol. 2. – P. 753-767. 53 – Чеботарь, И.В., Бочарова, Ю.А., Маянский, Н.А. Механизмырезистентности Pseudomonas aeruginosa к антибиотикам и их регуляция / И.В. Чеботарь, Ю.А. Бочарова, Н.А. Маянский // КМАХ. – 2017. – Т. 19. – №4. – С. 308-319. 54 – Mena, K.D., Gerba, C.P. Risk assessment of Pseudomonas aeruginosa in water / K.D. Mena, C.P. Gerba // Rev Environ ContamToxicol. – 2009. – Vol. 201. –P. 71-115. 55 – Driscoll, J.A., Brody, S.L., Kollef, M. H. The Epidemiology, Pathogenesis and Treatment of Pseudomonas aeruginosa Infections / J.A. Driscoll, S.L. Brody, M. H. Kollef // Drugs. – 2007. –Vol. 67.–P.351-368. 56 – Poole, K. Pseudomonas aeruginosa: resistance to the max / K. Poole // Front Microbiol.2011; 2: 65. 57 – Pseudomonas aeruginosa: патогенность, патогенезипатология / А.В. Лазарева, И.В. Чеботарь, О.А. Крыжановская и др. // Клиническаямикробиологияиантимикробнаяхимиотерапия. – 2015. –Т. 17. – № 3. – С.170-186. 58 – Klebsiella pneumoniae liver abscess: a new invasive syndrome/ L K. Siu, K.M. Yeh, J.C. Lin, and et // The Lancet Infectious Diseases. – 2012. – Vol.12. – Is. 11. – P. 881-887. 58

59 – Paczosa M.K., Mecsas, J. Klebsiella pneumoniae: Going on the Offense with a Strong Defense // M.K. Paczosa, J. Mecsas // ASM Journals. – 2016. – Vol.80. – Is. 3. – P. 629-661. 60 – Frequency of Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC)-producing and non-KPC-producing Klebsiella species contamination of healthcare workers and the environment // C. Rock, K.A. Thom, M. Masnick, J.K. Johnson etal // Infect Control Hosp Epidemiol. – 2014. – Vol.35. – P. 426–429. 61 – Molecular pathogenesis of Klebsiella pneumoniae/ B. Li, Y.Zhao, C. Liu, and et. // Future microbiologyvol. – 2014. – Vol. 9. – Is. 9. – P. 1071-1081. 62 – Choby, J.E., Howard-Anderson, J., Weiss D.S. Hypervirulent Klebsiella pneumoniae – clinical and molecular perspectives / J.E. Choby, J. Howard-Anderson, D.S. Weiss //Journal of Internal Medicine. – 2020. – Vol.287. – Is. 3. – P. 283-300. 63 – Risk Factors and Clinical Impact of Klebsiella pneumonia Carbapenemase–Producing K. pneumoniae / L.B. Gasink, P.H. Edelstein, E. Lautenbachand et.// Infect Control Hosp Epidemiol. – 2009. – Vol.30. –Is. 12. – P. 1180-1185. 64 – Hirsch, E.B., Tam, V.H.Detection and treatment options for Klebsiella pneumoniae carbapenemases (KPCs): an emerging cause of multidrug-resistant infection / E.B. Hirsch, V.H. Tam // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. – 2010. – Vol.65. –Is. 6. – P. 1119-1125. 65 – Gastrointestinal carriage is a major reservoir of Klebsiella pneumoniae infection in intensive care patients /C.L Gorrie, M. Mircita, R.R. Wick et al // Clin Infect Dis.– 2017. – Vol.65. – P. 208-215. 66 – Кулешова, С.И. Определение активности антибиотиков методом диффузии в агар /С.И. Кулешова // ВедомостиНаучного центра экспертизы средств медицинского применения. – 2015. – №3. – С. 13–17. 67 – ГОСТ 29188.3-91. Изделия косметические. Методы определения стабильности эмульсии. – М.: Изд-во стандартов, 1996. – 18 с. 59

68 –Государственная Фармакопея Российской Федерации: сборник. Вып. 1 / М-во здравоохранения и соц. развития РФ. – 12-е изд. – М.: Изд-во НЦ экспертизы средств мед. Применения, 2007. – 696 с. 69 – Гров, Д.С., Рендалл, В.А. Руководство по лабораторным методам исследования антибиотиков / Д.С. Гров, В.А. Рендалл. – М.: Медгиз. – 1958. 60

Рецензии:

Авторизуйтесь, чтобы добавить рецензию

- у работы пока нет рецензий -

Отзывы:

Авторизуйтесь, чтобы оставить отзыв